Die Charakterisierung des T-Zell-Rezeptors nickelreaktiver T-Zellen:
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| Format: | Buch |
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG SEITE
1.1 PATHOPHYSIOLOGISCHE GESICHTSPUNKTE DER NICKELALLERGIE 1
1.1.1 BEDEUTUNG DER NICKELALLERGIE 1
1.1.1.1 DIE NICKELALLERGIE - EINE ALLERGISCHE TYP IV-REAKTION DER HAUT 1
1.1.1.2 HAEUFIGKEIT DER NICKELALLERGIE 2
1.1.1.3 DIE VERSCHIEDENEN MOEGLICHKEITEN DER EXPOSITION DURCH NI
2+ 2
1.1.2 DIE T-ZELL-AKTIVIERUNG DURCH NI2+ 3
1.1.2.1 T-ZELL-ANTWORT AUF EINEN MODIFIZIERTEN MHC-PEPTID-KOMPLEX 3
1.1.2.1.1 METALLAKTIVIERUNG DER T-ZELLEN IN ASSOZIATION MIT DEM
MHC-KLASSE II 3
KOMPLEX
1.1.2.1.2 DIE INTERAKTION VON T-ZELLEN, NI2+ UND MHC-KLASSE II KOMPLEX 5
1.1.2.1.3 DIE ROLLE DER KERATINOZYTEN IN DER T-ZELL AKTIVIERUNG 6
1.1.2.2 T-ZELL-AKTIVIERUNG DURCH NI
2+ OHNE ASSOZIATION MIT DEM MHC-KOMPLEX 8
1.2 DIE STRUKTUR DES TCR 8
1.2.1 DER ALLGEMEINE AUFBAU DES TCR - 8
1.2.2 CHARAKTERISIERUNG DER VIER POLYPEPTIDKETTEN DES TCR 10
1.2.3 DIE MOLEKULARE BASIS DER TCR-ANTIGENERKENNUNG 11
2. AUFGABENSTELLUNG 13
3. MATERIAL UND METHODEN
3.1 ZELLBIOLOGIE
3.1.1 MATERIAL 14
3.1.1.1 MEDIEN, CHEMIKALIEN UND LOESUNGEN 14
3.1.1.2 LABORGERAETE UND LABORMATERIAL 17
3.1.1.3 AK FUER DIE OBERFLAECHENANTIGENANALYSE UND DIE IMMUNHISTOCHEMIE 19
3.1.1.4 ZELLINIEN UND SCHNITTMATERIAL 21
3.1.2 METHODEN 21
3.1.2.1 MEDIUMHERSTELLUNG UND ALIQUOTIEREN VON IL-2 UND PHA-C 21
3.1.2.2 HERSTELLUNG DER EBV-ZELLEN 22
3.1.2.3 ISOLIERUNG HUMANER ZELLPOPULATIONEN 22
3.1.2.4 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN 23
3.1.2.5 BESTRAHLUNG DER STIMULATORZELLEN 24
3.1.2.6 EXPANSION VON PMNC MIT NI
Z+, IL-2 UND TETANUSTOXOID (TT) 24
3.1.2.7 TCRBV-ANALYSE MIT HILFE DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 25
3.1.2.8 IMMUNHISTOCHEMISCHE METHODE 26
3.1.2.9 T-ZELL-KLONIERUNG AUS GEWEBEPROBEN 27
3.1.2.10 NICKELREAKTIVITAETSPRUEFUNG MIT HILFE DES CTLL-BIOASSAYS 29
3.1.2.11 WILCOXON-TEST FUER ZWEI ABHAENGIGE STICHPROBEN 30
3.2 MOLEKULARBIOLOGIE
3.2.1 MATERIAL 32
3.2.1.1 REAGENTIEN, LOESUNGEN UND PRIMER FUER DIE PCR 32
3.2.1.2 LABORGERAETE UND LABORMATERIAL 36
3.2.2 METHODEN 37
3.2.2.1 RNA-ISOLATION UNTER VERWENDUNG VON GUANIDINIUMTHIOCYANAT 37
3.2.2.2 AMPLIFIKATION DER CDNA AUS DER MRNA 3 8
3.2.2.3 PCR-AMPLIFIKATION DER TCRAV- UND TCRBV-DNA 39
3.2.2.4 AUFTRENNUNG DER PCR-PRODUKTE MIT HILFE DER GELELEKTROPHORESE 42
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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0
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4. ERGEBNISSE
4.1 TCRBV-EXPRESSION IM PERIPHEREN BLUT UND IN DER HAUT 44
4.1.1 TCRBV-USAGE IM PERIPHEREN BLUT VON GESUNDEN PROBANDEN IM VER- 44
GLEICH ZU PROBANDEN MIT NICKELALLERGIE
4.1.2 TCRBV-REPERTOIRE IM PERIPHEREN BLUT UND BEI POSITIVEN
EPIKUTANTEST-RE- 46
AKTIONEN VON PATIENTEN MIT NICKELALLERGIE
4.1.2.1 TCRBV-REPERTOIRE IN BIOPSIEN MIT POSITIVER EPIKUTANTEST-REAKTION
AUF 46
NI
2+
4.1.2.2 VERSCHIEBUNG DES TCRBV-REPERTOIRES IM PERIPHEREN BLUT 53
4.1.2.2.1 VERGLEICH DES TCRBV-REPERTOIRES ZWISCHEN UNSTIMULIERTEN UND
MIT IL-2 53
STIMULIERTEN PMNC VON NICKELALLERGIKEM
4.1.2.2.2 STIMULIERUNG VON PMNC MIT IL-2, IL-2/ TT UND IL-2/ NI2+ 54
4.1.2.2.3 TCRBV-EXPRESSION IM PERIPHEREN BLUT BEI NICKELALLERGIKEM IM
VER- 63
GLEICH ZU BIOPSIEN MIT POSITIVER EPIKUTANTEST-REAKTION AUF NI
2+
4.1.2.2.4 PROLIFERATION VON TCRBVX*-T-ZELLEN IM VERGLEICH ZU TCRBVX'-T-
65
ZELLEN IN ANWESENHEIT VON NI2+
4.1.2.2.5 UNTERSUCHUNG EINES ZUSAMMENHANGES ZWISCHEN DER VERSCHIEBUNG
DES 66
TCRBV-REPERTOIRES UND DEM HLA-KLASSE II-TYP
4.1.3 ZUSAMMENFASSUNG DER FACS- UND IMMUNHISTOCHEMISCHEN ANALYSEN 68
4.2 CHARAKTERISIERUNG DER T-ZELL-KLONE 69
4.2.1 ISOLIERUNG DER T-ZELL-KLONE AUS DER HAUT 69
4.2.2 NICKELREAKTIVITAETSPRUEFUNG MIT HILFE DES CTLL-BIOASSAYS 70
4.2.3 TCR-ANALYSE DER ISOLIERTEN KLONE UNTER ANWENDUNG DER PCR 73
4.2.4 ERGEBNISZUSAMMENFASSUNG DER T-ZELL-KLONIERUNG 77
5. DISKUSSION
5.1 METHODENDISKUSSION
5.1.1 OBERFLAECHENANALYSE DER T-ZELLEN 78
5.1.2 IMMUNHISTOCHEMIE 79
5.1.3 ISOLIERUNG NICKELREAKTIVER T-ZELL-KLONE 8 0
5.1.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE ANALYSE DER T-ZELL-KLONE 83
5.2 ERGEBNISDISKUSSION
5.2.1 OLIGOKLONALE T-ZELL-ANTWORT AUF DAS ANTIGEN NI2+ 85
5.2.2 VERSCHIEBUNG DES TCRBV-REPERTOIRES ZWISCHEN HAUT UND BLUT 88
5.2.2.1 TCRBV-REPERTOIRE IN HAUT UND BLUT BEI PROPANDEN MIT EINER 88
NICKELKONTAKTALLERGIE IM VERGLEICH ZU GESUNDEN PROBANDEN
5.2.2.2 ASSOZIATION DES KUTANEN LYMPHOZYTEN-ASSOZIIERTEN ANTIGENS (CLA)
MIT 89
DEM ADHAESIONSREZEPTOR E-SELECTIN
5.2.2.3 BEEINFLUSSUNG DER T-ZELL-AKTIVIERUNG DURCH SUPERANTIGENE 92
5.2.2.3.1 ROLLE VON SUPERANTIGENEN BEI DER KONTAKTALLERGIE 92
5.2.2.3.2 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN CLA-EXPRESSION UND SUPERANTIGENEN 97
5.2.3 TCR-STRUKTUR NICKELREAKTIVER T-ZELLEN IN DER HAUT UND IM
PERIPHEREN 100
BLUT
ZUSAMMENFASSUNG
105
LITERATURVERZEICHNIS
107
DANKSAGUNG
121
LEBENSLAUF
122 |
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