Anti-Endotoxin-Antikörper in der Muttermilch: eine longitudinale Studie mittels eines entwickelten Enzym-Immunoassays
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1997
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I
NHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
EIGENSCHAFTEN
DER
MUTTERMILCH
1
1.2
ENDOTOXINE
UND
ANTI-ENDOTOXIN-ANTIKOERPER
5
13
SCHUTZMECHANISMEN
FUER
DEN
SAEUGLING
DURCH
MUETTERLICHE
ANTIKOERPER
9
1.4
PROBLEMSTELLUNG
11
2
MATERIAL
UND
METHODIK
13
2.1
MATERIAL
13
2.1.1
MUTTERMILCHPROBEN
13
2.1.1.1
GRUPPENEINTEILUNG
14
2.1.2
NORMALSPENDER-SEREN
16
2.1.3
PUFFERLOESUNGEN
17
2.1.3.1
COATING-PUFFER
A
17
2.1.3.2
COATING-PUFFER
B
17
2.1.3.3
PBS-TWEEN-PUFFER
17
2.1.3.4PBS-TWEEN-PEG-PUFFER
18
2.1.3.5
SUBSTRAT-PUFFER
18
2.1.4
ANTIGENE
UND
ANTIKOERPER
18
2.1.5
VERBRAUCHSMATERIALIEN
19
2.1.6
GERAETE
UND
SOFTWARE
20
2.2
METHODIK
22
2.2.1
ENTWICKLUNG
EINES
ELISAS
ZUR
ENDOTOXIN-ANTIKOERPERBESTIMMUNG
IN
MUTTERMILCH
22
2.2.1.1
ERPROBUNG
DES
ELISAS
NACH
H
IKI
22
2.2.1.2
BESTIMMUNG
DES
OPTIMALEN
VERDUENNUNGSBEREICHES
FUER
DIE
MESSUNG
23
2.2.1.3
HERSTELLUNG
EINES
MUTTERMILCH-STANDARDS
23
2.2.1.4
VERBESSERUNG
DER
OBERFLAECHENBESCHICHTUNG
23
2.2.1.5
EINFLUSS
DES
MILCHFETTES
AUF
DIE
ANTIKOERPERBESTIMMUNG
24
2.2.1.6
NACHWEIS
DER
GUETE
DES
ENTWICKELTEN
ELISAS
25
2.2.2
BESTIMMUNG
DES
GESAMTIMMUNGLOBULINGEHALTES
DER
MUTTERMILCH
PROBEN
28
I
2.2.2.1
WIEDERFINDEN
VORGEGEBENER
IGA-KONZENTRATIONEN
(RECOVERY)
28
2.2.2.2
LINEARITAET
DER
VERDUENNUNG
28
2.2.3
DURCHFUEHRUNG
DES
ELISAS
ZUR
BESTIMMUNG
VON
ANTI-ENDOTOXIN
ANTIKOERPEM
IN
MUTTERMILCH
29
2.2.3.1
OBERFLAECHENBESCHICHTUNG
DER
MIKROTITERPLATTEN
29
2.2.3.2
INKUBATION
DER
PLATTEN
MIT
DEN
STANDARDS
UND
PROBEN
30
2.2.3.3
INKUBATION
DER
PLATTEN
MIT
DEN
SEKUNDAEREN
ANTIKOERPERN
30
2.2.3.4
MESSUNG
DER
ENZYMAKTIVITAET
30
2.2.4
BERECHNUNG
DES
SPEZIFISCHEN
UND
KORRIGIERTEN
ANTIKOERPERGEHALTES
DER
EINZELPROBEN
31
2.2.5
INDIREKTE
STANDARDISIERUNG
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
DES
ANTIKOERPERGEHALTES
31
2.2.5.1
BESCHICHTUNG
DER
MIKROTITERPLATTEN
32
2.2.5.2
INKUBATION
DER
PROBEN
UND
DER
STANDARDS
32
2.2.5.3
INKUBATION
MIT
DEM
SEKUNDAEREN
ANTIKOERPER
33
2.2.5.4
MESSUNG
DER
ENZYMAKTIVITAET
UND
BERECHNUNG
DER
ANTIKOERPERKONZENTRATIONEN
33
2.2.6
STATISTISCHE
ANALYSE
33
3
ERGEBNISSE
35
3.1
ENTWICKLUNG
DES
ENZYM-IMMUNOASSAYS
35
3.1.1
VERGLEICH
DES
ANTIKOERPERGEHALTES
IN
BLUTSERUM
UND
MUTTERMILCH
35
3.1.2
BESTIMMUNG
DES
OPTIMALEN
VERDUENNUNGSBEREICHES
36
3.1.3
VERWENDUNG
EINES
MUTTERMILCH-STANDARDS
37
3.1.4
VERGLEICH
DER
BESCHICHTUNGSVERFAHREN
38
3.1.5
EINFLUSS
DES
FETTGEHALTES
DER
MILCH
AUF
DIE
ANTIKOERPERBESTIMMUNG
40
3.1.5.1
SCHLUSSFOLGERUNG
42
3.1.6
HERSTELLUNG
DES
NULLSTANDARDS
43
3.1.7
LINEARITAET
DER
VERDUENNUNG
44
3.1.8
SPEZIFITAET
FUER
DIE
GESUCHTEN
ANTIKOERPER
45
3.1.8.1
IGA-EXTRAKTION
(NULLSTANDARD)
45
3.1.8.2
INHIBITIONSVERSUCHE
45
3.1.8.3
VERWENDUNG
EINES
YYNONSENSE
"
-ANTIKOERPERS
47
3.1.9
INTRA-ASSAY-VARIABILITAET
50
3.1.10INTER-ASSAY-VARIABILITAET
51
3.1.11
SENSITIVITAET
DES
ELISAS
52
_
III
3.2
VERSUCHE
ZUR
TURBIDIMETRISCHEN
MESSUNG
IN
MUTTERMILCH
52
3.2.1
WIEDERFINDEN
VORGEGEBENER
IGA-KONZENTRATIONEN
(RECOVERY)
53
3.2.2
LINEARITAET
DER
VERDUENNUNG
53
33
ERGEBNISSE
DER
INDIREKTEN
STANDARDISIERUNG
54
3.4
ERGEBNISSE
DER
STATISTISCHEN
ANALYSE
57
3.5
GESAMT-IGA-KONZENTRATIONEN
58
3.5.1
VERGLEICH
DES
GESAMT-IGA
-GEHALTES
IN
MUTTERMILCH
VON
MUETTERN
REIF
UND
FRUEHGEBORENER
OHNE
INFEKTION
59
3.6
KONZENTRATIONEN
AN
ANTI-ENDOTOXIN-ANTIKOERPERN
60
3.6.1
MUTTERMILCH
VON
MUETTERN
REIFER
NEUGEBORENER
OHNE
UND
MIT
INFEKTION
61
3.6.2
MUTTERMILCH
VON
MUTTEM
FRUEHGEBORENER
OHNE
UND
MIT
INFEKTION
66
3.6.3
VERGLEICH
DER
MUTTERMILCH
VON
MUETTERN
REIFER
NEUGEBORENER
UND
FRUEHGEBORENER
OHNE
INFEKTION
71
3.6.4
KORRELATION
DER
VERSCHIEDENEN
ANTIKOERPERKONZENTRATIONEN
74
3.6.4.1
ABHAENGIGKEIT
DER
ANTI-ENDOTOXIN-ANTIKOERPER-KONZENTRATIONEN
VOM
GESAMT-IGA-GEHALT
74
3.6.4.2
KORRELATION
VON
ANTIKOERPERKONZENTRATIONEN
GEGEN
VERSCHIEDENE
ENDOTOXINE
75
4
DISKUSSION
77
4.1
BEDEUTUNG
DER
ERGEBNISSE
77
4.1.1
GESAMT-IGA-GEHALT
DER
MUTTENNILCHPROBEN
77
4.1.2
ANTI-ENDOTOXIN-ANTIKOERPER
IN
DER
MUTTERMILCH
80
4.2
QUALITAET
DER
ANTIKOERPERBESTIMMUNGEN
88
4.2.1
METHODENKRITIK
89
4.2.2
DISKUSSION
DER
FEHLERQUELLEN
91
4.2.3
VERBESSERUNGSMOEGLICHKEITEN
93
4.2.4
TURBIDIMETRISCHE
GESAMT-IGA-BESTIMMUNG
95
43
SCHLUSSFOLGERUNGEN
96
5
ZUSAMMENFASSUNG
98
6
LITERATURVERZEICHNIS
100
7
ANHANG
123 |
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