Bedeutung G1-spezifischer Zellzyklusregulatoren bei der malignen Transformation:
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| Published: |
München
Utz, Wiss.
1998
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| Series: | Biochemie
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| Item Description: | Zugl.: Essen, Univ., Diss., 1997 |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
NHALTSVERZEICHNIS
1
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2
EINLEITUNG
.
2
2.1
EINFUEHRUNG
.
2
2.2
EUKARYONTISCHE
ZELLZYKLUSKONTROLLE
.
2
2.2.1
CYCLIN-ABHAENGIGE
KINASEN
(CDKS)
.
2
2.2.2
CYCLINE
.
3
2.2.2.1
CYCLIND
.
3
22.2.2
CYCLIN
E
.
4
2.2.3
CDK-INHIBITOREN
.
5
2.2.4
RB
UND
E2F
.
6
2.2.5
MYC
.
8
23
TUMORENTSTEHUNG
.
9
2.4
ZELLZYKLUSREGULATOREN
UND
TUMORENTSTEHUNG
.
11
2.4.1
ZELLZYKLUSREGULATOREN
ALS
ONKOGENE
.
11
2.4.2
ZELLZYKLUSREGULATOREN
ALS
TUMORSUPRESSORGENE
.
12
23
ZIELE
DIESER
ARBEIT
.
13
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
14
3.1
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
.
14
3.2
HAEUFIG
VERWENDETE
LOESUNGEN
.
14
3.3
VERWENDETE
PLASMIDE
.
16
3.4
BAKTERIEN
.
16
3.4.1
VERWENDETER
BAKTERIENSTAMM
.
16
3.4.2
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
.
16
3.4.3
KULTIVIERUNG
VON
BAKTERIEN
.
16
3.4.4
HERSTELLUNG
VON
TRANSFORMATIONSKOMPETENTEN
BAKTERIEN
.
17
3.45
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
.
17
3.5
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
17
3.5.1
ANALYTISCHE
UND
PRAEPARATIVE
PLASMIDAUFREINIGUNG
.
17
3.5.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNA
.
18
35.3
RESTRIKTIONSVERDAU
UND
ELEKTROPHORESE
VON
DNA
.
18
3.5.4
KONVERSION
5'-UEBERHAENGENDER
DNA-ENDEN
.
19
35.5
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA-ENDEN
.
19
35.6
ISOLATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
19
35.7
PRAEPARATION
VON
VEKTOR-DNA
.
19
3.5.8
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
20
3.5.9
DNA-SEQUENZIERUNG
.20
3.5.10
PCR
.
.21
3.6
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
21
3.6.1
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
PROTEINEN
.
21
INHALTSVERZEICHNIS
3.6.2
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
PROTEINEN
.
22
3.6.3
IN
VITRO
TRANSLATION
.23
3.6.4
HERSTELLUNG
VON
PROTEINEXTRAKTEN
.
.24
3.6.5
IMMUNPRAEZIPITATION
.
24
3.6.6
PROTEIN-TRANSFER
(WESTERN
BLOT)
.
25
3.6.7
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
.
26
3.6.8
CAT-ASSAY
.
26
3.7
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
27
3.7.1
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
.
.27
3.7.2
ZELLINIEN
UND
ZELLEN
.
28
3.7.3
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
.
28
3.7.4
PASSAGIEREN
VON
ZELLEN
.
28
3.7.5
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
28
3.7.6
FACS-ANALYSE
.
29
3.7.7
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFEKTAMIN
.
29
3.7.8
REF-ASSAY
.
29
3.7.9
ETABLIERUNG
STABILER
ZELLINIEN
.
30
3.7.10
WEICHAGARTEST
.
30
3.7.11
INJEKTION
VON
STABIL
TRANSFIZIERTEN
ZELLINIEN
IN
SYNGENE
RATTEN
.
31
3.7.12
TRYPANBLAU
EXKLUSION
.
31
3.7.13
IN-VITRO
MARKIERUNG
VON
ZELLEN
.
31
4
ERGEBNISSE
.
32
4.1
KONSTITUTIVE
EXPRESSION
VON
CDK4
IN
REFS
.
32
4.1.1
TRANSFORMATION
VON
REFS
DURCH
CDK4
.
32
4.1.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
ETABLIERTEN
CDK4-ZELLINIEN
.
34
4.1.2.1
CDK4-ZELLINIEN
IM
WEICHAGARASSAY
.
34
4.1.2.2
TUMORIGENITAET
DER
CDK4
TRANSFORMIERTEN
ZELLEN
.
35
4.1.2.3
UNABHAENGIGKEIT
CDK4
TRANSFORMIERTER
ZELLEN
GEGENUEBER
WACHSTUMSFAKTOREN
.
36
4.1.3
BEDEUTUNG
VON
PL
6
FUER
DIE
CDK4-ABHAENGIGE
TRANSFORMATION
.
37
4.1.4
EINFLUSS
VON
CKIS
AUF
DIE
TRANSFORMATION
DURCH
CYCLIN
D/CDK4
UND
MYC
.
39
4.1
5
ABHAENGIGKEIT
DER
WIRKUNG
DER
CKIS
VON
POCKET-PROTEINEN
.
.41
4.2
INTERAKTION
VON
CDK4
UND
MYC
.
.42
4.2.1
TRANSFORMATION
DURCH
CYCLIN
DL
UND
CDK4
BENOETIGT
FUNKTIONELLES
MYC
.
42
4.2.2
PL6
INHIBIERT
DIE
TRANSAKTIVIERENDE
FUNKTION
VON
MYC
.
.45
4.2.3
INHIBIERUNG
DER
VON
MYC
ABHAENGIGEN
TRANSAKTIVIERUNG
UND
TRANSFORMATION
DURCH
PL07
.
.49
43
KONSTITUTIVE
EXPRESSION
VON
CYCLIN
E
IN
REFS
.
51
4.3.1
TRANSFORMATION
VON
REFS
DURCH
CYCLIN
E
.
51
432
CHARAKTERISIERUNG
DER
ETABLIERTEN
CYCLIN
E-ZELLINIEN
.
52
4.3.2.1
TUMORIGENITAET
DER
CYCLIN
E
TRANSFORMIERTEN
ZELLEN
.
53
4.3.2.2
ABHAENGIGKEIT
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
UND
VERHALTEN
BEI
DNA-SCHAEDIGUNG
IN
CYCLIN
E/HA-RAS
TRANSFORMIERTEN
REFS
.
54
4.3.2.3
POLYPLOIDIE
IN
CYCLIN
E
TRANSFORMIERTEN
ZELLEN
.
56
43.3
ONKOGENE
AKTIVITAET
VON
CYCLIN
E
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
AKTIVEM
CDK
.
58
5
DISKUSSION
.
63
5.1
GL-REGULATOREN
ALS
ONKOGENE
.
63
5.1.1
TRANSFORMATION
VON
REFS
DURCH
CDK4
.
63
5.1.2
TRANSFORMATION
VON
REFS
DURCH
CYCLIN
E
.
64
-II
INHALTSVERZEICHNIS
5.1.2.1
CYCLIN
E
INDUZIERTE
POLYPLOIDIE
.
65
5.2
MECHANISMUS
DER
TRANSFORMATION
DURCH
CDK4
UND
CYCLIN
E
.
66
5.3
INTERAKTION
VON
CYCLIN/CDK-KOMPLEXEN
UND
MYC
.
67
5.3.1
GEGENSEITIGE
ABHAENGIGKEIT
VON
CYCLIN
D1/CDK4
UND
MYC
BEI
DER
TRANSFORMATION
.67
5.3.2
CYCLIN
E/CDK2
IST
ABHAENGIG
VON
MYC
.
.70
54
EIN
MODELL
FUER
DIE
INTERAKTIONEN
ZWISCHEN
CYCLIN
D/CDK4,
MYC
UND
CYCLIN
E/CDK2
.
.70
5.5
AUSBLICK
.
73
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
74
-NI |
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