Aktivierung des Proto-Onkogens c-myc durch t(2;8)-Chromosomentranslokation beim Burkitt-Lymphom: Untersuchungen zur Promotor-enhancer-Interaktion
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München
Diss.-Verl. NG-Kopierladen
1997
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INHALTSVERZEICHNIS
---------------------------------------------------------------------------------------------
---
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
DAS
C-MYC
GEN
.
1
1.2
STRUKTUR
DES
C-MYC
GENS
.
2
1.3
REGULATION
DER
C-MYC
EXPRESSION
.
3
1.3
AKTIVIERUNG
DES
C-MYC
GENS
IN
TUMOREN
.
6
1.4
REPRESSION
DER
C-MYC
EXPRESSION
IN
TUMOREN
.
9
1.5
FRAGESTELLUNG
DER
ARBEIT
.
9
2
MATERIAL.
10
2.1
ZELLEN
.
10
2.2
BAKTERIEN
.
10
2.3
PLASMIDE
UND
CDNA
.
10
2.4
OLIGONUKLEOTIDE
.
10
2.5
ANTIKOERPER
UND
PROTEINE
.
11
2.6
ENZYME
.
11
2.7
RADIOAKTIVE
ISOTOPE
.
11
2.8
CHEMIKALIEN
UND
ANDERE
MATERIALIEN
.
11
3
METHODEN
.
13
3.1
METHODEN
IM
RAHMEN
DER
BAKTERIENKULTUR
.
13
3.1.1
VERMEHRUNG
UND
AUFBEWAHRUNG
VON
BAKTERIEN
.
13
3.1.2
TRANSFORMATION
.
13
3.1.3
PLASMID-SCHNELLAUFARBEITUNG
.
13
3.1.4
PRAEPARATIVE
PLASMIDAUFARBEITUNG
.
13
3.2
METHODEN
IM
RAHMEN
DER
ZELLKULTUR
.
-.
.
14
3.2.1
VERMEHRUNG
VON
ZELLEN
.
14
3.2.2
AUFBEWAHRUNG
VON
ZELLEN
.
14
3.2.3
BESTIMMUNG
DER
LEBENDZELLZAHL
.
14
3.2.4
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
ZELLEN
.
14
3.2.5
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
ZELLEN
.
15
3.2.6
TRANSFEKTION
VON
DNA
IN
ZELLEN
.
15
3.2.7
REPORTERGEN-NACHWEIS
.
15
3.2.8
HERSTELLUNG
VON
ZELLKEMEXTRAKTEN
FUER
DIE
GELRETENTIONSANALYSE
.
16
3.2.9
FLUORESZENZ-MIKROSKOPIE
ZUM
NACHWEIS
VON
GFP
.
17
3.2.10
NACHWEIS
DER
GFP-EXPRESSION
DURCH
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
17
3.3
DNA-ANALYSE
.
17
3.3.1
SPALTUNG
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
17
INHALTSVERZEICHNIS
N
3.3.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
17
3.3.3
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
.
18
3.3.4
AUFFIILLEN
VON
DNA
MIT
UEBERHAENGENDEN
5'-ENDEN
.
18
3.3.5
EXONUKLEASEVERDAU
UEBERHAENGENDER
3
'-ENDEN
.
18
3.3.6
PHOSPHATASEBEHANDLUNG
UND
LIGATION
.
18
3.3.7
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
MIT
KLENOW
POLYMERASE
.
18
3.3.8
HERSTELLUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
DURCH
PCR
.
19
3.3.9
"SITE
DIRECTED"
IN
VITRO-MUTAGENESE
.
20
3.3.10
GELRETENTIONSANALYSE
.
20
3.3.11
DNASEL
"FOOTPRINT"
EXPERIMENT
.
20
3.3.12
DMS-METHYLIERUNGS-INTERFERENZ
ANALYSE
.
21
3.3.13
"SOUTHERN-BLOT"
ANALYSE
.
21
3.4
RNA
ANALYSE
.
22
3.4.1
"NORTHERN-BLOT"
ANALYSE
.
22
3.4.2
NUKLEASE
S1
ANALYSE
.
22
4
ERGEBNISSE
.
23
4.1
ENHANCER-RESPONSIVE
ELEMENTE
DES
PI
PROMOTORS
.
23
4.2
MITGLIEDER
DER
SPL
TRANSKRIPTIONSFAKTOR-FAMILIE
BINDEN
AN
ENHANCER-RESPONSIVE
ELEMENTE
DES
PI
PROMOTORS
.
25
4.3
DIE
FUNKTIONELLE
BEDEUTUNG VON
SPL
UND
SP3
FUER
DIE
PI
EXPRESSION
.
29
4.4
DIE
FUNKTIONELLE
BEDEUTUNG
DER
"CORE"
PROMOTOR-ELEMENTE
FUER
DIE
ENHANCER-VERMITTELTE
PI
AKTIVIERUNG
.
31
4.5
DER
EINFLUSS
DES
XMAR-ELEMENTS
AUF
DIE
K-ENHANCER-VERMITTELTE
C-MYC
AKTIVIERUNG
.
35
4.6
C-MYC
AKTIVIERENDE
ELEMENTE
DER
IGK
ENHANCER
.
37
4.7
FUNKTIONELLE
KOOPERATION
VON
SPL
UND
NF
K
B
BEI
DER
PI
AKTIVIERUNG
.
40
4.8
REGULATION
DER
C-MYC
EXPRESSION DURCH
HEMMUNG
DER
HISTON-DEACETYLASE
FUNKTION
.
42
5
DISKUSSION
.
49
5.1
ELEMENTE
IM
C-MYC
PI
PROMOTOR
VERMITTELN
DIE
AKTIVIERUNG
DURCH
DIE
IGK
ENHANCER
.
49
5.2
C-MYC
AKTIVIERENDE
ELEMENTE
INNERHALB
DER
IGK
ENHANCER:
BINDESTELLEN
FUER
BAUSTEINE
VON
MULTIPROTEIN-KOMPLEXEN
.
54
5.3
DIE
C-MYC
AKTIVIERUNG
DURCH
DIE
IGK
ENHANCER:
MODELL
DER
ENHANCER-FUNKTION
.
58
5.3.1
DIE
IGK
ENHANCER
SIND
IN
DER
LAGE,
DIE
AUSBILDUNG
REPRESSORISCHER
CHROMATINSTRUKTUREN
AM
C-MYC
PROMOTOR
ZU
VERHINDERN
.
61
INHALTSVERZEICHNIS
M
5.3.2
C-MYC
AKTIVIERUNG
DURCH
HISTON-HYPERACETYLIERUNG
.
62
5.3.3
C-MYC
AKTIVIERUNG
DURCH
ERHOEHUNG
DER
PROZESSIVITAET
VON
POLYMERASE-KOMPLEXEN
.
66
5.3.4
C-MYC
AKTIVIERUNG
DURCH
ERHOEHUNG
DER
STABILITAET
VON
PROTEIN-KOMPLEXEN
AM
PROMOTOR
.
67
AUSBLICK
.
69
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
70
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
71
DANKSAGUNG
.
88 |
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