Die Elektronenüberträger Ferredoxin (PetF) und Flavodoxin (IsiB) des Cyanobakteriums Synechocystis sp. PCC 6803: Isolierung und In-vivo-Mutationsanalyse
Gespeichert in:
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| Format: | Mikrofilm Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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| Ausgabe: | [Mikrofiche-Ausg.] |
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| Beschreibung: | Bonn, Univ., Diss., 1997. - Mikrofiche-Ausg.: 2 Mikrofiches : 24x |
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Datensatz im Suchindex
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I
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZTJNGSVERZEFRHNIS
_VI
1. EINLEITUNG
_1
LI DIE PHOTOSYNTHESE 1
1.2 CYANOBAKTERIEN UND DIE PHOTOSYNTHESE DER HOEHEREN PFLANZEN 2
1.3 FERREDOXINE 5
1.4 FLAVODOXINE UND EISENREGULATION 7
1.5 ZIELE DER VORLIEGENDEN ARBEIT 9
2. MATERIAL UND METHODEN
_11
2.1 ORGANISMEN
LL
2.1.1 CYANOBAKTERIEN 11
2.1.2
ESCHERICHIA COLI
11
2.2 KULTURMEDIEN
LL
2.2.1 ANZUCHT VON CYANOBAKTERIEN 11
2.2.2 ANZUCHT VON
ESCHERICHIA COLI
LL
2.3 PLASMIDE 12
*
2.4 OLIGONUKLEOTIDE 12
2.5 ARBEITSGERAETE 13
2.6 ENZYME 14
2.7 CHEMIKALIEN 14
2.8 ANZUCHTEN UND WACHSTUMSPARAMETER 14
2.8.1
ESCHERICHIA COLI
14
2.8.2
SYNECHOCYSTIS 6803 15
2.9 DN A-PRAEP ARATION 15
2.9.1 PLASMED-DNA-ISOLIERUNG AUS
ESCHERICHIA COU 15
2.9.2
PRAEPARATION GENOMISCHER
DNA
AUS
SYNECHOCYSTIS
6803 15
2.10 DNA-ANALYSE 16
2.11 SUBKLONIERUNG 16
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/952081768
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.12
LIGATION UND TRANSFORMATION 17
2.13 SOUTHERN-ANALYSE 17
2.14 PCR 17
2.15 DNA-SEQUENZIERUNG 18
2.15.1 RADIOAKTIVE SEQUENZIERUNG 18
2.15.2 NICHT-RADIOAKTIVE, AUTOMATISCHE SEQUENZIERUNG 18
2.16 ORTSSPEZIFISCHE MUTAGENESE 18
2.17
TRANSFORMATION VON SYNECHOCYSTIS 6803 19
2.18
DATENVERARBEITUNG 19
2.18.1 ANALYSE VON DNA- UND PROTEINSEQUENZEN 19
2.18.2 ENZYMTESTS 20
2.19 RNA-PRAEPARATION 20
2.20 RNA-GELELEKTROPHORESE 20
2.21 NORTH ERN-ANA LYSE 20
2.22 PROTEINAUFREINICUNG 21
2.22.1 PROTEIN-MINIPRAEPARATION 21
2.22.1.1 PROTEIN-MINIPRAEPARATION AUS
ESCHERICHIA COLI 21
2.22.1.2 PROTEIN-MINIPRAEPARATION AUS
SYNECHOCYSTIS 6803 21
2.22.2 HERSTELLUNG VON ROHEXTRAKTEN 21
2.22.3 AUFREINIGUNG VON REKOMBINANTEN FERREDOXINEN AUS
ESCHERICHIA COLI 21
2.22.4
AUFREINIGUNG DER REKOMBINANTEN SYNECHOCYSTIS
6803-GOGAT
AUS
ESCHERICHIA COLI
22
2.22.5 THYLAKOIDPRAEPARATION (AUS
AENABAENA 7120) 23
2.22.6 AUFREINIGUNG DER REKOMBINANTEN FNR AUS
ESCHERICHIA COU 23
2.23
QUALITATIVER UND QUANTITATIVER PROTEINNACHWEIS 23
2.23.1
WESTERN-ANALYSE 23
2.23.2 BESTIMMUNG DES GESAMTPROTEINGEHALTES 24
2.23.3 QUANTIFIZIERUNG VON FERREDOXINEN 24
2.24
UNTERSUCHUNG DER FERREDOXIN-AKTIVITAET IN REKONSTITUTIONSTESTS 24
2.24.1
CYTOCHROM C-REDUKTION 24
2.24.2 GOGAT-REKONSMUTIONSTEST 25
2.24.3
NADP+
PHOTOREDUKTION 25
INHALTSVERZEICHNIS
III
3. ERGEBNISSE 27
3.1 ISOLIERUNG DES PATF-GENS 27
3.2 ORTSSPEZIFISCHE MUTAGENESE DES
PETF
GENS 32
3.3 AUFREINIGUNG DER REKOMBINANTEN PETF-WLLDTYP- UND
MUETANTEN-FERREDOXINE
AUS
ESCHERICHIA COU 34
3.4 IN VITRO-TESTS DER MUTAGENISIERTEN, REKOMBINANTEN FERREDOXINE 36
3.4.1 CYTOCHROM C-REDUKTION 36
3.4.2 GOGAT-AKTIVITAETSTEST 36
3.4.3 NADP
+-PH0T0REDUKTI0N 38
3.5 IN VIVO-MUTAGENESE DES PTF-GENS AUS
SYNECHOCYSTIS 6803 39
3.6 WACHSTUMSKURVEN DER
SYNECHOCYSTIS
6803-PATF-MUTANTEN 46
3.7 TRANSKRIPTANALYSE DER
SYNECHOCYSTIS 6803-PERF-PUNKTMUTANTEN 50
3.8 EXPRESSIONSANALYSE DER
SYNECHOCYSTIS 6803-PTF-PUNKTMUT ANTEN 52
3.9 ISOLIERUNG DES
ISIB
GENS 53
3. IO
HERSTELLUNG EINER
SYNECHOCYSTIS
OESOS-W/H-NUELLMUTANTE 57
3.11 WACHSTUEMSKURVEN DER
SYNECHOCYSTIS
6803-/S/AE-MUTANTEN 58
3.12 T RANSKRIPT ANALYSE DER
ISLBS ULLMUT ANTEN 61
3.13 EXPRESSIONSANALYSE DER
SYNECHOCYSTIS 6803-//SS-MUTANTEN 62
4. PISKUSSION
_ 63
4.1 DAS [2FE-2S1-FERREDOXIN AUS SYNECHOCYSTIS 6803 63
4.1.1 ISOLIERUNG DES
PETF
GENS AUS
SYNECHOCYSTIS
6803 63
4.1.2 REGULATION DES PCTF-GENS 65
4.2
ORTSSPEZIFISCHE MUTATIONEN AM FERREDOXIN (PETF) VON SYNECHOCYSTIS
6803 68
4.2. L
EINSATZ VON USE UND LP-USE 68
4.2.2 EFFEKTE DER MUTATIONEN AM PETF IN REKONSTHUTIONSTESTS 68
4.2.2.1 DAS REDOXPAAR PETF-FNR 69
4.2.2.2 DIE INTERAKTIONEN DES PETF MIT WEITEREN REDOXPARTNEM 70
4.3
SYNECHOCYSTIS
6803
PETF
-MUTANTEN 73
IV
INHALTSVERZEICHNIS
4.4 IN VIVO-MUETAGENESEN DES
SYNECHOCYSTIS 6803-PTF-GENS 74
4.4.1 PLATITORM-MUTAGENESE IN
SYNECHOCYSTIS
6803 75
4.4.2 DIREKTER AUSTAUSCH DES PTF-WLLDTYPGENS GEGEN MUTIERTE
PTF-GENK0PIEN 77
4.5
DAS FLAVODOXIN-KODIERENDE ISIB-GEN AUS SYNECHOCYSTIS
6803 81
4.5.1 ISOLIERUNG DES /5/5-GENS AUS
SYNECHOCYSTIS
6803 81
4.5.2 DIE TRANSKRIPTIONELLE ORGANISATION DER JS/B-GENREGION IN
SYNECHOCYSTIS
6803 82
4.6
SYNECHOCYSTIS 6803 ISLB-NULLMUTANTEN 84
4.7 AUSBUCK 87
5. ZUSAMMENFASSUNG
_89
6. LITERAT! IR VERZEICHNIS
_91 |
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