Gewinnung, Subkultivierung und Charakterisierung einer Vulvakarzinom-Zellinie: Träger eines bisher seltenen humanen Papillomavirus
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Aachen
Mainz
1997
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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| Beschreibung: | Zugl.: Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 1997 |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
L.
1.1
GEGENSTAND
DER
ARBEIT
1
1.2
HUMANE
PAPILLOMAVIREN
2
1.2.1
EINFUEHRUNG
2
1.2.2
KULTIVIERUNG
3
1.2.3
VIRUSSTATUS
4
1.2.4
EXOGENE
FAKTOREN
5
1.2.5
VIRUSGENOM
5
1.2.6
FRUEHE
PROTEINE
6
1.2.6.1
E6/E7
6
1.2.6.2
E6
7
1.2.6.3
E7
8
1.2.63.1
E7/PRB
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EL
11
1.2.6.6
E5
12
1.2.6.7
E4
13
1.2.7
SPAETE
PROTEINE
15
1.2.7.1
L1/L2
15
1.2.8
EXPRESSION
VON
HPV
IM
EPITHEL
15
1.3
EPITHEL
16
1.4
DIFFERENZIERUNGSGRAD
DER
ZELLEN
17
1.5
INTRAEPITHELIALE
NEOPLASIE
17
1.5.1
KLINISCHE
MASSNAHMEN
19
1.6
VULVA
20
1.6.1
BENIGNE
VERAENDERUNGEN
DER
VULVA
20
1.6.2
PRAEKANZEROESEN
DER
VULVA
20
1.6.3
VULVAKARZINOM
21
1.6.3.1
EXOGENE
FAKTOREN
21
1.7
CYTOSKELETT
23
1.7.1
INTERMEDIAERFILAMENTE
23
1.7.2
CYTOKERATINEXPRESSIONSMUSTER
24
1.7.3
EXPRESSION
DER
CYTOKERATINE
IM
TUMOR
25
1.8
ZELLKULTUR
26
1.8.1
ZELLKULTURMEDIUM
26
1.8.2
KULTIVIERUNG
VON
TUMORGEWEBE
28
1.8.3
ZELLCHARAKTERISIERUNG
28
1.8.4
TRANSFORMIERTER
PHAENOTYP
28
1.9
EIGENE
FRAGESTELLUNG
29
MATERIAL/METHODEN
2.1
ETABLIERUNG
IN
DER
ZELLKULTUR
31
2.1.1
PRIMAERKULTUR
31
2.1.2
KLONIERUNG
32
2.1.3
MYCOPLASMEN-TEST
32
2.1.4
EINFRIEREN
32
2.2
PHYSIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
33
2.2.1
MALIGNITAETSTEST
33
2.2.1.1
HAEMALAUN-EOSIN-FAERBUNG
33
2.2.2
PLATING
EFFICIENCY
34
2.2.3
WACHSTUMSKURVE
34
2.3
MORPHOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
35
2.3.1
IMMUNHISTOCHEMIE
35
2.3.1.1
PRIMAERE
ANTIKOERPER
36
2.3.1.2
ZELLKULTURZELLEN/ABC-METHODE
37
2.3.1.3
PARAFFINSCHNITTE
/
AP
AAP-METHODE
39
2.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
HPV-NACHWEIS
41
2.4.1
NICKTRANSLATION
41
2.4.2
FILTER-IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
41
2.4.3
HYBRID
CAPTURE
TEST
42
2.4.3.1
COLORIMETRISCHE
MODIFIKATION
43
2.4.3.2
FLUORESZENZ-MODIFIKATION
44
2.4.4
DNA-PRAEPARATION
45
2.4.5
HPV-AMPLIFIKATION
45
2.4.5.1
TYPSPEZIFISCHE
PCR
45
2.4.5.2
GENERALISIERTE
PCR
46
2.4.6
SOUTHEM-BLOT
50
2.4.7
BLOTHYBRIDISIERUNG
50
2.4.8
DNA-ISOLIERUNG
AUS
AGAROSEGELEN
52
2.4.8.1
FREEZE
SQUEEZE
METHODE
52
2.4.8.2
QIAQUICK
EXTRAKTION
52
2.4.9
SEQUENZIERUNG
52
2.5
ZELLKULTURMEDIEN
54
2.6
PUFFER
56
1
ERGEBNISSE
3.1
ETABLIERUNG
IN
DER
ZELLKULTUR
58
3.1.1
KLONIERUNG
60
3.1.2
MYCOPLASMEN-TEST
60
3.2
PHYSIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
61
3.2.1
MALIGNITAETSTEST
61
3.2
2
PLATING
EFFICIENCY
(PE)
62
3.2.3
BEWERTUNG
DER
PE-WERTE
63
3.2.4
WACHSTUMSKURVE
72
3.3
MORPHOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
75
3.3.1
IMMUNHISTOCHEMIE
75
3.3.1.1
ZELLKULTURZELLEN
/
ABC-METHODE
75
3.3.1.2
PARAFFINSCHNITTE
/
APAAP-METHODE
88
3.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
89
3.4.1
FILTER-IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
90
3.4.2
TYPSPEZIFISCHE
PCR
91
3.4.3
HYBRID
CAPTURE
TEST
92
3.4.3.1
MODIFIKATIONEN
DES
HYBRID
CAPTURE
TESTS
99
3.4.4
GENERALISIERTE
PCR
100
3.4.5
SOUTHERN
BLOT
HYBRIDISIERUNG
102
3.4.6
SEQUENZIERUNG
108
DISKUSSION
111
5.
ZUSAMMENFASSUNG
124
6.
LITERATUR
127
L
ANHANG
145 |
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