Vergleichende Untersuchungen zwischen den Osteoblasten von Osteoporotikern und Nicht-Osteoporotikern unter dem Einfluß der Wachstumsfaktoren PDGF, IGF-I und TGF-Beta:
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| Language: | German |
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG
6
2 ZIELSTELLUNG
22
3
MATERIAL UND METHODEN
23
3.1 PROBENMATERIAL
23
3.2 KULTURMEDIEN, ZUSAETZE, FAKTOREN, TESTKITS 24
3.3 KULTURGEFAESSE
24
3.4 HERSTELLUNG DER KULTURMEDIEN 25
3.4.1 WACHSTUMSMEDIUM 25
3.4.2 SERUMFREIES MEDIUM
25
3.4.3 MINERALISIERUNGSMEDIUM
25
3.5 GEWINNUNG DER KNOCHENZELLEN 26
3
6
ISOLIERUNG DER OSTEOBLASTEN 27
3.7 VERFAHREN ZUR IDENTIFIZIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER OSTEOBLASTEN
28
3.7.1 ANFAERBUNG DER ZELLKULTUR AUF ALKALISCHE PHOSPHATASE 28
3.7.2 OSTEOCALCIN-ANSTIEG NACH STIMULIERUNG MIT 1,25-DIHYDROXY- 28
CHOLECALCIFEROL
3.7.3 CAMP-ANSTIEG NACH PTH-STIMULIERUNG 29
3.7.4 NACHWEIS DES GEBILDETEN KOLLAGENTYPS AUS DER ZELLKULTUR 29
3.7.5 NACHWEIS DER MINERALISIERUNG
30
3.7.5.1 ANFAERBUNG DER GEBILDETEN NODULE
30
3.7.6 CHARAKTERISIERUNG DES MINERALISIERUNGSPRODUKTES DURCH
30
IR-SPEKTROSKOPIE
3.8 VERSUCHSANSATZ FUER DIE VERGLEICHSUNTERSUCHUNGEN
31
3.9 VERSUCHSANSATZ FUER DIE BESTIMMUNG DER
PROTEIN-TYROSINPHOSPHORYLIERUNG 32
3.10 BESTIMMUNG DES PROTEINGEHALTES
33
3.11 BESTIMMUNG DER ALKALISCHEN PHOSPHATASE
33
3.12 BESTIMMUNG DER PROLIFERATION
35
3.13 MESSUNG DER KOLLAGENSYNTHESE
36
3.14
SDS-POLYACRYLAMIDELEKTROPHORESE
38
3.15BLOTTING
3.16 IMMUNOBIOTTING
4
J
3.17 ECL-DETEKTION
(ENHANCED CHEMILUMINESCENCE-DETECTION)
42
3.18 AUSWERTUNG DER EXPERIMENTELLEN DATEN
43
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/951019872
44
4 ERGEBNISSE
4.1 AUSWAHL UND KULTIVIERUNG DES PATIENTENMATERIALS
44
4.2 CHARAKTERISIERUNG DER ZELLEN 46
4.2.1 EXPRESSION DER ALKALISCHEN PHOSPHATASE
46
4.2.2 OSTEOCALCINANSTIEG NACH 1,25-DIHYDROXYCHOLECALCIFEROL-
48
STIMULIERUNG
4.2.3 CAMP-ANSTIEG NACH PTH-STIMULIERUNG
48
4.2.4 KOLLAGENEXPRESSION IN DER OSTEOBLASTENZELLKULTUR 49
4.3 ETABLIERUNG VON SERUMFREIEN KULTURBEDINGUNGEN FUER DIE PRIMAERE
50
OSTEOBLASTENKULTUR
4.3.1 MINERALISIERENDE OSTEOBLASTENZELLKULTUR 52
4.4 VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN ZWISCHEN DEN OSTEOBLASTEN VON 56
OSTEOPOROTIKEM UND NICHT-OSTEOPORTIKEM UNTER DEM EINFLUSS VON
WACHSTUMSFAKTOREN
4.4.1 EFFEKTE DES WACHSTUMSFAKTORS PDGF AUF DIE OSTEOBLASTENKULTUREN 58
4.4.1.1 PROLIFERATION UNTER DEM EINFLUSS VON PDGF 58
4.4.1.2 KOLLAGENSYNTHESE UNTER DEM EINFLUSS VON PDGF 62
4.4.2 EFFEKTE DES WACHSTUMSFAKTORS IGF-I AUF DIE OSTEOBLASTENKULTUREN 66
4.4.2.1 PROLIFERATION UNTER DEM EINFLUSS VON IGF-I 66
4.4.2.2 KOLLAGENSYNTHESE UNTER DEM EINFLUSS VON IGF-I 70
4.4.3 EFFEKTE DES WACHSTUMSFAKTORS TGF-SS AUF DIE OSTEOBLASTEN 74
4.4.3.1 PROLIFERATION UNTER DEM EINFLUSS VON TGF-SS 68
4.4.3.,2 KOLLAGENSYNTHESE UNTER DEM EINFLUSS VON TGF-SS
78
4.4.3.3 EINFLUSS DES TGF-SS AUF DIE TYROSINPHOSPHORYLIERUNG VON PROTEINEN
IN 82
OSTEOBLASTEN
5 DISKUSSION
86
6 ZUSAMMENFASSUNG
97
7 LITERATURVERZEICHNIS
99
8 ABBILDUNGSVERZEICHNIS
113
9 TABELLENVERZEICHNIS
115 |
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