Molekulargenetische Untersuchungen von MLL-Gen-Rearrangements bei Säuglingen mit akuter lymphoblastischer Leukämie:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
2
ZIELSETZUNG
.
5
3
MATERIAL
.
6
3.1
CHEMIKALIEN
.
6
3.2
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
7
3.3
OLIGONUCLEOTIDE
(PRIMER)
.
8
3.3.1
SEQUENZEN
DER
PRIMER
FUER
DIE
KONVENTIONELLE
PCR
.
8
3.3.2
SEQUENZEN
DER
PRIMER
FUER
DIE
MULTIPLEX-PCR
.
9
3.4
SPEZIELLE
GERAETE
UND
MATERIALIEN
.
10
3.5
UNTERSUCHUNGSMATERIAL
.
10
3.5.1
PATIENTENMATERIAL
.
10
3.5.2
ZELLINIEN
.
11
4
METHODEN
.
13
4.1
RNA-ISOLIERUNG
MIT
RNAZOL
.
13
4.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
13
4.3
PCR
.
14
4.4
AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE
.
16
4.5
GENESCAN-FRAGMENTANALYSE
.
17
4.5.1
PRINZIP
DER
ANALYSE
.
17
4.5.2
PROBENAUFBEREITUNG
ZUR
GENESCAN-ANALYSE
.
21
4.5.3
POLYACRYLAMIDGEL-VORBEREITUNG
.
21
4.6
PRAEPARATION
EINZELSTRAENGIGER
DNA
.
22
4.7
DIREKTE
SEQUENZIERUNG
.
23
4.7.1
PRINZIP
DER
SEQUENZIERUNG
.
23
4.7.2
SEQUENZIERUNG
MIT
SEQUENASE
.
26
4.7.2.1
PRIMER-ANNEAHNG
.
26
4.7.2.2
TERMINATIONSREAKTION
.
26
4.7.2.3
ETHANOLFAELLUNG
.
26
4.8
DNA-ISOLIERUNG
AUS
AGAROSEGELEN
.
27
5
ERGEBNISSE
.
30
5.1
MOLEKULARE
ANALYSE
DES
MLL/AF4-REARRANGEMENTS
.
30
5.1.1
SENSITIVITAETSBESTIMMUNG
.
30
5.1.2
NACHWEIS
DES
MLL/AF4-REARRANGEMENTS
BEI
PATIENTEN
.
31
5.1.3
DIREKTSEQUENZIERUNG
DER
PCR-PRODUKTE
.
32
5.1.4
NACHWEIS
DES
REZIPROKEN
AF4/MLL-REARRANGEMENTS
.
35
5.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
VERSCHIEDENER
11
Q23
ABERRATIONEN
.
37
5.2.1
EINZELNACHWEIS
DER
FUSIONSTRANSKRIPTE
.
37
5.2.2
MULTIPLEX-PCR
.
38
5.2.3
SENSITIVITAETSBESTIMMUNG
.42
6
DISKUSSION
.
43
6.1
DISKUSSION
DER
METHODEN
.
43
6.1.1
KONVENTIONELLE
PCR
.
43
6.1.2
MULTIPLEX-PCR
.
45
6.2
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
.47
6.2.1
MLL-GEN
.47
6.2.2
HETEROGENITAET
DER
MLL/AF4-TRANSKRIPTE
.
49
6.2.2.1
HETEROGENITAET
DES
MLL-BRUCHPUNKTES
.
50
6.2.2 2
HETEROGENITAET
DES
AF4-BRUCHPUNKTES
.
51
6.2.3
DAS
REZIPROKE
AF4/MLL-REARRANGEMENT
.
51
6.2.4
STAMMT
DAS
ONKOPROTEIN
VON
DER(4)
ODER
VON
DER(11)?
.
52
6.2.5
HAEUFIGKEIT
DER
T(4;
11)
UND
KLINISCHE
PROGNOSE
BEI
SAEUGLINGEN
MIT
ALL
.
53
7
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
.
56
8
LITERATUR
.
58
ANHANG
.
65 |
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