Low-density-Lipoprotein induziert die Oberflächenexpression von Vascular Adhesion Molecule (VCAM) auf humanen Endothelzellen:
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GLIEDERUNG
1. EINLEITUNG.
4
1.1. DIE PHYSIOLOGIE DER ENDOTHELZELLE.
4
1.2. DIE ENTSTEHUNG DER ARTERIOSKLEROSE.
5
1.3. ADHAESION UND MIGRATION DER LEUKOZYTEN.
6
ADHAESIONSMOLEKUELE.
\
.
6
LIPIDDIFFERENZIERUNG UND ROLLE DES LDL-CHOLESTERINS IN DER
ARTERIOSKLEROSE.
8
2. FRAGESTELLUNG.
9
3. MATERIAL UND METHODEN.10
3.1. MATERIAL.
.
7
.
.10
3.1.1. CHEMIKALIEN UND ANTIKOERPER.10
3.1.2. GERAETE.
11
3.1.3. PLASTIKWAREN.12
3.1.4. ZELLKULTUR.12
3.1.4.1. ENZYME.12
3.1.4.2. PUFFER UND LOESUNGEN.13
3.2. DIE PRAEPARATION VON LDL UND ACETYLIERTEM LDL.15
3.2.1. LDL-PRAEPARATION.15
3.2.2. PRAEPARATION VON AEETYLIERTEM LDL.16
3.3. FACSCAN (DURCHFLUSSZYTOMETER).17
3.3.1. AUFBAU EINES DURCHFLUSSZYTOMETERS.17
3.3.2. PROBENZUFUEHRUNG.17
3.3.3. MESSUNG DER LICHTSTREUUNG.18
3.3.4. MESSUNG DER FLUORESZENZ.18
3.3.5. SIGNALVERARBEITUNG.18
3.4. ELISA FUER DIE EXPRESSION VON VCAM-1, ICAM-1 UND ELAM.18
3.5. STATISTIK.19
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.6. METHODE DER KULTIVIERUNG HUMANER UMBILIKALER ENDOTHELZELLEN
(HUVEC).19
3.6.1. GEWINNUNG UND TRANSPORT DER NABELSCHNUERE.20
3.6.2. PRAEPARATION DER NABELSCHNUERE.20
3.6.3. ENDOTHELZELL-ISOLIERUNG. 21
3.6.4. GELANTINE-BESCHICHTUNG DER KULTURFLASCHEN. 21
3.6.5. ENDOTHELZELL-KULTIVIERUNG. 22
3.6.6. DAS PASSAGIEREN. . 22
3.6.7. DIE FAERBUNG DER ENDOTHELZELLEN FUER DEN DURCHFLUSSZYTOMETER
(FACSCAN).23
4. VERSUCHE UND ERGEBNISSE.26
4.1. VCAM-VERSUCHE MIT DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE.26
4.1.1. ZEITKURVE DER VCAM-EXPRESSION NACH STIMULATION MIT TNF-ALPHA.26
4.1.2. STIMULATION MIT ACLDL.:.26
4.1.3. BEEINFLUSSUNG DER ACLDL-WIRKUNG DURCH EINEN KALZIUMANTAGONISTEN.27
4.1.4. BEEINFLUSSUNG DER ACLDL-WIRKUNG DURCH STAUROSPORIN.27
4.2. IC AM-VERSUCHE MIT DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE.27
4.2.1. ZEITKURVE DER ICAM-EXPRESSION NACH STIMULATION MIT TNF-ALPHA.,.27
4.2.2. STIMULATION MIT ACLDL.28
4.2.3. BEEINFLUSSUNG DER ACLDL-WIRKUNG DURCH EINEN KALZIUMANTAGONISTEN.28
4.3. VCAM-VERSUCHE MIT ELISA-PLOT.28
4.3.1. STIMULATION MIT ACLDL.28
4.3.2. KONZENTRATIONSKURTE DER ACLDL-WIRKUNG.28
4.3.3. DOSIS-ZEIT-KURVE DER ACLDL-WIRKUNG.29
4.3.4. BEEINFLUSSUNG DER DURCH ACLDL-INDUZIERTEN VCAM-EXPRESSION MIT
NITRENDIPIN UND
STAUROSPORIN.29
4.4. STIMULATION MIT NATIVEM LDL.30
4.4.1. DOSIS-ZEITKURVE MIT NATIVEM LDL.30
4.4.2. BEEINFLUSSUNG DER DURCH NATIVES LDL-INDUZIERTEN VCAM-EXPRESSION
MIT NITRENDIPIN
UND STAUROSPORIN.30
4.5. ICAM-OBERFLAECHENEXPRESSION NACH LDL-INKUBATION MIT DEM
ELISA-PLOT.30
4.6. ELAM-OBERFLAECHENEXPRESSION NACH LDL-INKUBATION MIT DEM
ELISA-PLOT.31
2
5. DISKUSSION.
32
6
. ZUSAMMENFASSUNG.
37
7. ABBILDUNGEN.
3
G
8
. LITERATUR.*.
49
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