Zellzyklus-Regulatoren und Genexpression: die E2F-abhängige Transkriptionskontrolle von MYC und einem Histon H2A-H2B Gen Paar
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
1-14
1.1
DER
ZELLZYKLUS
1
1.2
TRANSKRIPTIONSREGULATION
DURCH
E2F
3
1.3
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DES
MYC-GENS
7
1.4
DIE
REGULATION
DES
MYC-GENS
8
1.5
HISTONE
11
1.6
AUFGABENSTELLUNG
14
2
MATERIAL
15-18
2.1
BAKTERIEN
15
2.2
KLONIERUNGSVEKTOREN
15
2.3
ZELLINIEN
15
2.4
ENZYME
16
2.5
CHEMIKALIEN,
GERAETE
UND
ANDERE
MATERIALIEN
16
3
METHODEN
19-43
3.1
BAKTERIENHALTUNG
19
3.1.1
AGARPLATTEN
19
3.1.2
UEBERNACHT-KULTUREN
19
3.1.3
PRAEPARATIVE
KULTUREN
19
3.1.4
GLYZERINKULTUREN
19
3.2
ISOLIERUNGSVERFAHREN
FUER
DNA
UND
RNA
20
3.2.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
(PRAEPARATIVE
20
ULTRAZENTRIFUGATION)
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.2
PLASMIDISOLIERUNG
UEBER
QUIAGEN-SAEULEN
21
3.2.3
PLASMIDISOLIERUNG
UEBER
SCHNELLAUFSCHLUSS
22
3.2.4
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
(FT-METHODE)
22
3.2.5
SOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
DURCH
ELEKTROELUTION
22
3.2.6
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
DURCH
23
AUSZENTRIFUGIEREN
3.2.7
RNA-ISOLIERUNG
(PRAEPARATIV)
23
3.3
KLONIERUNGSVERFAHREN
UND
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID
24
DNA
3.3.1
KLONIERUNGSVEKTOREN
24
3.3.2
ENZYMATISCHE
REAKTIONEN
AN
DNA
FRAGMENTEN
24
3.3.3
IN
VITRO
MUTAGENESE
MIT
HILFE
DER
POLYMERASE-KETTEN
25
REAKTION
(PCR)
3.3.4
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
IN
VEKTOREN
25
3.3.5
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID-DNA
26
3.4
TRANSFORMATIONSKOMPETENTE
BAKTERIEN
26
3.5
TRANSFORMATION
DES
LIGASEANSATZES
UND
AUFARBEITUNG
DER
'S
KLONE
3.6
FAELLUNG
VON
DNA
UND
RNA
MIT
ETHANOL
277
3.7
SPALTUNGEN
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
27
3.8
PHENOLEXTRAKTION
VON
PROTEINEN
28
3.9 TRENNVERFAHREN
FUER
DNA,
RNA
UND
PROTEINE
28
3.9.1
DNA-AUFTRENNUNG
UEBER
AGAROSEGELE
28
3.9.2
DNA-AUFTRENNUNG
UEBER
DENATURIERENDE
28
POLYACRYLAMIDGELE
3.9.3
RNA-AUFTRENNUNG
UEBER
DENATURIERENDE
AGAROSEGELE
29
3.9.4
PROTEINAUFTRENNUNG
UEBER
SDS-POLYACRYLAMIDGELE
30
3.9.5
COOMASSIE-BLAU
FAERBUNG
30
3.10
WESTEMBLOTS
31
3.10.1
TRANSFER
AUFGETRENNTER
PROTEINE
AUF
NITROZELLULOSE
31
MEMBRANEN
3.10.2
NACHWEIS
SPEZIFISCHER
PROTEINE
DURCH
ECL
31
3.11
NACHWEIS
VON
SPEZIFISCHEN
DNA-PROTEIN-KOMPLEXEN
32
3.11.1
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
SYNTHETISCHEN
32
OLIGONUKLEOTIDEN
UND
ASSOZIIERUNG
ZUM
DOPPELSTRANG
3.11.2
MARKIERUNG
DOPPELSTRAENGIGER
OLIGONUKLEOTIDE
32
3.11.3
MARKIERUNG
EINZELSTRAENGIGER
OLIGONUKLEODIDE
AM
5'
33
ENDE
3.11.4
HERSTELLUNG
VON
KERNEXTRAKTEN
33
3.11.5
HERSTELLUNG
VON
GESAMTZELL-LYSATEN
MIT
CHAPS
34
LYSISPUFFER
3.11.6
HERSTELLUNG
VON
GESAMTZELL-LYSATEN
MIT
HOCHSALZ-PUFFER
34
3.11.7
NACHWEIS
VON
SPEZIFISCHEN
DNA-PROTEIN-KOMPLEXEN
IN
35
NATIVEN
POLYACRYLAMIDGELEN
3.12
IN
VITRO-TRANSKRIPTION
35
3.13
IN
VITRO-TRANSLATION
36
INHALTSVERZEICHNIS
III
3.14
ZELLKULTUR
37
3.14.1
LAGERUNG
VON
STAMMKULTUREN
37
3.14.2
ZELLVERMEHRUNG
37
3.14.3
STIMULIERUNG
VON
PRIMAEREN
T-ZELLEN
MIT
ANTI-CD3-
37
ANTIKOERPERN
3.15
TRANSFEKTIONSMETHODEN
FUER
EUKARYONTISCHE
ZELLEN
38
3.15.1
TRANSFEKTION
MIT
DER
CA3(P04)2-KOPRAEZIPITATIONS-
38
TECHNIK
3.15.2
TRANSFEKTION
MITTELS
ELEKTROPORATION
39
3.16
AUFARBEITUNG
DER
EUKARYONTENZELLEN
40
3.16.1
AUFARBEITUNG
MIT
TEN-PUFFER
40
3.16.2
AUFARBEITUNG
MIT
LYSISPUFFER
40
3.16.3
ULTRASCHALL-AUFSCHLUSS
41
3.16.4
AUFSCHLUSS
MIT
DER
"FREEZE-THAW"-METHODE
41
3.16.5
PROTEINBESTIMMUNG
MIT
DEM
BIORAD-ASSAY-KIT
41
3.17
CAT-ELISA
41
3.18
LUCIFERASE-ASSAY
42
3.19
SYNCHRONISATION
EUKARYONTISCHER
ZELLEN
IM
ZELLZYKLUS
42
3.19.1
TRANSFEKTION,
BLOCKIERUNG
UND
RELEASE
42
3.19.2
PACS-ANALYSE
43
4
ERGEBNISSE
44-80
4.1
DIE
E2F-ABHAENGIGE
REGULATION
DES
HUMANEN
MYC-GENS
44
4.1.1
DIE
TRANSAKTIVIERUNG
DES
MYC-GENS
DURCH
E2F-1
UND
DIE
REPRESSION
DURCH
RB
IST
ABHAENGIG
VOM
P2-PROMOTOR
44
4.1.2
DIE
REPRESSION
DER
MYC-SPEZIFISCHEN
PROMOTORAKTIVITAET
DURCH
RB
KORRELIERT
MIT
EINER
HERABREGULATION
DES
ENDOGENEN
MYC-PROTEINS
IN
HEK-293
ZELLEN
47
4.1.3
CYCLIN
A
TRANSAKTIVIERT
DEN
MYC-PROMOTOR
50
4.1.4
DIE
TRANSAKTIVIERUNG
VON
MYC
DURCH
CYCLIN
DL
IST
ABHAENGIG
VOM
P2-PROMOTOR
UND
WIRD
DURCH
DAS
POCKET
PROTEIN
RB
VERHINDERT
51
4.2
DIE
E2F-ABHAENGIGE
REGULATION
DES
HISTON
H2A.1
PROMOTORS
53
4.2.1
DIE
MITGLIEDER
DER
E2F
FAMILIE,
E2F-1,
E2F-2,
E2F-3
UND
DP-1,
AKTIVIEREN
DEN
H2A.1-PROMOTOR
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
EINER
INTAKTEN
E2F-BINDUNGSSEQUENZ
55
4.2.2
DER
INHIBITORISCHE
RB-E2F-KOMPLEX
BINDET
AN
DEN
H2A.1-PROMOTOR
IN
VITRO
58
4.2.3
DIE
PROMOTORAKTIVITAET
DES
H2A.1-GENS
WIRD
DURCH
DIE
POCKET-PROTEINE
RB
UND
PL07
REPRIMIERT
60
IV
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.4
DIE
TRANSAKTIVIERUNG
DES
H2A.1-PROMOTORS
DURCH
DIE
62
4.2.5
GI-CYCLINE
DL
UND
D2
IST
UNABHAENGIG
VON
DER
RB
BINDUNGS
DOMAENE
DIE
E2F-BINDUNGSSEQUENZ
IM
H2A.1-PROMOTOR
IST
63
4.2.6
VERANTWORTLICH
FUER
DIE
AKTIVIERUNG
DES
HISTON-H2A.L
GENS
IN
DER
FRUEHEN
S-PHASE
DES
ZELLZYKLUS
E2F-BINDUNGSSEQUENZEN
SIND
HOCHKONSERVIERTE
DNA-
65
4.3
MOTIVE
IN
H2A-H2B-PROMOTOREN
AUCH
ANDERER
SPEZIES
DIE
BIDIREKTIONALE
KONTROLLE
DES
H2A.1-H2B.2-GENPAARES
66
4.3.1
MITGLIEDER
DER
OCT-FAMILIE
UND
EIN
ZELLTYP-SPEZIFISCHER
66
4.3.2
TRANSKRIPTIONSFAKTOR,
PU-1,
BINDEN
IM
HISTON-PROMOTOR
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DES
BIDIREKTIONALEN
PROMOTORS
71
5
DURCH
GEEIGNETE
REPORTERKONSTRUKTE
DISKUSSION
81-93
5.1
DIE
E2F-ABHAENGIGE
REGULATION
VON
MYC
81
5.1.1
CYCLINE
ALS
TRANSKRIPTIONELLE
AKTIVATOREN
82
5.1.2
DIE
REGULATION
DER
MYC-EXPRESSION
AM
GO-GL-UEBERGANG
84
5.2
DIE
E2F-ABHAENGIGE
REGULATION
DES
H2A.1-H2B.2~
87
5.3
GENPAARES
DIE
VERWENDUNG
DES
BIDIREKTIONALEN
H2A.1-H2B.2-
91
6
PROMOTORS
IN
EXPRESSIONSSYSTEMEN
?
ZUSAMMENFASSUNG
94-95
7
ANHANG
96-98
7.1
RESTRIKTIONSKARTE
DES
PLASMIDS
PBLUC5
96
7.2
RESTRIKTIONSKARTE
DES
PLASMIDS
PLC-1
97
7.3
UEBERSICHT
DER
VERWENDETEN
OLIGONUKLEOTIDE
97
7.3.1
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
BINDUNGS
UND
97
7.3.2
KOMPETITIONSANALYSEN
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
PCR-MUTAGENESE
98
7.3.3
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
SEQUENZREAKTIONEN
98
8
LITERATURVERZEICHNIS
99-112 |
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| spelling | Oswald, Franz Verfasser aut Zellzyklus-Regulatoren und Genexpression die E2F-abhängige Transkriptionskontrolle von MYC und einem Histon H2A-H2B Gen Paar von Franz Oswald 1997 V, 112 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 1997 Genregulation (DE-588)4122166-7 gnd rswk-swf Myc (DE-588)4267356-2 gnd rswk-swf Histon H2 (DE-588)4469522-6 gnd rswk-swf Zellzyklus (DE-588)4129960-7 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Myc (DE-588)4267356-2 s Genregulation (DE-588)4122166-7 s Zellzyklus (DE-588)4129960-7 s DE-604 Histon H2 (DE-588)4469522-6 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007701836&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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