Entwicklung der Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung zum Nachweis des Philadelphia-Chromosoms bei der akuten lymphatischen Leukämie und der chronisch myeloischen Leukämie:
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS 4
INHALTSVERZEICHNIS
1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 6
2. EINLEITUNG
2.1 BEDEUTUNG CHROMOSOMALER VERAENDERUNGEN
BEI HAEMATOLOGISCHEN NEOPLASIEN 7
2.2 BEDEUTUNG DES PHILADELPHIA CHROMOSOMS 9
2.3 ENTWICKLUNG DER FLUORESZENZ IN SITU HYBRIDISIERUNG ZUM NACHWEIS 10
CHROMOSOMALER VERAENDERUNGEN
2.4 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 12
3. MATERIAL UND METHODEN
3.1 PATIENTEN
3.1.1 PROBANDEN 13
3.1.2 LEUKAEMIE PATIENTEN 13
3.1.3 ZELLINIEN 16
3.2 UNTERSUCHUNGSMATERIAL
3.2.1 EISESSIG/METHANOL-FIXIERTE PRAEPARATE 17
3.2.2 BLUT-UND KNOCHENMARKAUSSTRICHE 18
3.2.3 BEADS-SORTIERTE ZELLEN 18
3.3 DNA-PROBEN
3.3.1 DER YAC-KLON D107F9 19
3.2.2 DER COSMID-KLON COS-ABI 8 19
3.4 PRAEPARATION DER DNA-PROBEN
3.4.1 PRAEPARATION DES YEAST-ARTIFICIAL-CHROMOSOME-KLONS D107F9 21
3.4.2 PRAEPARATION VON COSMID-DNA 22
3.5 PCR UND IHRE ANWENDUNGEN
3.5.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE GRUNDLAGEN , 24
3.5.2 ABLAUF DER PCR 25
3.5.3 DIE ALU-PCR 26
3.5.3 PCR-PIPETTIERANSATZ 27
3.6 NICKTRANSLATION 29
3.7 CHROMOSOMALE IN SITU SUPPRESSIONS (CISS) HYBRIDISIERUNG
3.7.1 PROBENAUFBEREITUNG 31
3.7.2 VORBEHANDLUNG DER PRAEPARATE 32
3.7.3 FLUORESZENZ-DETEKTION 33
3.7.3 AMPLIFIKATION DER FLUORESZENZSIGNALE 35
3.8
MIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG UND BILDLICHE DOKUMENTATION 36
3.9
REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN 38
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHAL TSVERZEICHNI S
5
4. ERGEBNISSE
4.1 EINFARBENVERSUCHE MIT DEM YAC-KLON D107F9
4.1.1 PROBANDEN 50
4.1.2 ZELLINIEN 51
4.1.3 PATIENTEN MIT CML 52
4.1.4 PATIENTEN MIT
BCR-ABL POSITIVER ALL 54
4.2 ZWEIFARBENEXPERIMENTE
4.2.1 PROBANDEN 56
4.2.2 RETROSPEKTIVE ANALYSE VON PATIENTEN MIT ALL UND CML 58
4.3 PROSPEKTIVE ANALYSE VON BLUT- UND KNOCHENMARKAUSSTRICHEN
BEI PATIENTEN MIT CML UND ALL
4.3.1 ANALYSE VON PROBANDEN AUF BLUTAUSSTRICHEN 63
4.3.2 HYBRIDISIERUNG VON BLUTAUSSTRICHEN
UND EISESSIG/METHANOL FIXIERTE ZELLPRAEPARATIONEN 64
4.3.3 PROSPEKTIVE ANALYSE VON PATIENTEN MIT VERDACHT AUF CML 65
4.3.4 PROSPEKTIVE ANALYSE VON ALL PATIENTEN 67
4.3.5 EXEMPLARISCHE DARSTELLUNG DES THERAPIE-MONITORING MIT HILFE
DER FLUORESZENZ IN SITU HYBRIDIZIERUNG BEI ALL UND CML PATIENTEN 69
4.4 PHOTOGRAPHISCHE DOKUMENTATION 72
5. DISKUSSION
5.1 ALLGEMEINE METHODISCHE ANSAETZE FUER DEN NACHWEIS DER
BCR-ABL FUSION 81
5.2 ETABLIERUNG UND WEITERENTWICKLUNG DER FLUORESZENZ ISH
MIT DEM YAC-KLON D107F9 FUER DIE INTERPHASEZYTOGENETIK 84
5.3 ANWENDUNG DES BCR-YAC KLONES DL07F9
ZUR DIAGNOSE DER BCR-ABL FUSION 86
5.4 EINFUEHRUNG DES ZWEI-FARBEN-VERSUCHS DURCH KOMBINATION
DES YAC-KLONS D107F9 MIT DEM COSMID-KLON COS-ABI 8 87
5.5 ERWEITERUNG DER FLUORESZENZ ISH AUF BLUT- UND KNOCHENMARKAUSSTRICHE
5.5.1 ETABLIERUNG DER FLUORESZENZ ISH FUER DEN YAC-KLON D107F9
UND DEM COSMID-KLON COS-ABI 8 AUF BLUT-UND KNOCHENMARKAUSSTRICHEN 91
5.5.2 PROSPEKTIVE UNTERSUCHUNG VON LEUKAEMIEN
HINSICHTLICH DER
BCR-ABL FUSION 92
5.5.3 EXEMPLARISCHES MONITORING DER
BCR-ABL FUSION NACH CHEMOTHERAPIE 94
5.5.4 DIE FLUORESZENZ ISH IM VERGLEICH ZUR RT-PCR 96
5.6 SCHLUSSFOLGERUNGEN 98
6. ZUSAMMENFASSUNG 99
7. LITERATURVERZEICHNIS 101
8. LEBENSLAUF 121
9. DANKSAGUNG 122 |
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