Gap Junctions: Funktionelle Bedeutung für die Differenzierung und Lipolyse in Adipozyten
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
/IBKTIRZIINGSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
_
1
I.
GAPJUNCTIONS
.
2
LI.
AUFBAU
.
2
1.2.
PERMEABILITAET
UND
REGULATION
DER
PERMEABILITAET
.
3
1.3.
DIE
CONNEXINFAMILIE
.
4
1.4.
EXPRESSION
VON
CONNEXINEN
.7
1.5.
POSTTRANSLATIONALE
MODIFIKATION
UND
ASSEMBLIERUNG
DER
CONNEXINE
ZU
FUNKTIONSFAEHIGEN
GAP
JUNCTIONS
.
1
1
2.
GAPJUNCTIONS
UND
FETTGEWEBE
.
13
3.
FETTZELLDIFFERENZIERUNG
.
1
5
3.1.
MODELLSYSTEME
ZUM
STUDIUM
DER
FETTZELLDINERENZIERUNG
IN
VITRO
.
1
5
3.2.
ABLAUF
DER
DIFFERENZIERUNG
VON
3T3-LI
PRAEADPOZYTEN.
16
3.3.
DIFFERENZIERUNGSSYTEME
.
1
8
4.
LIPOLYSE
.
20
5.
AUFGABENSTELLUNG
.22
II.
ZUSAMMENFASSUNG
_
24
HL
MATERIAL
UND
METHODEN
_
27
I.
MATERIAL.
.
27
1.1.
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
27
1.2.
GERAETE
.
28
1.3.
LOESUNGEN
UND
ZELLKULTTIRMEDIEN
.
28
1.3.1.
ZELLKULTURMEDIEN
UND
MEDIENZUSAETZC
.
28
1.3.2.
LOESUNGEN
UND
PUFFER
.
29
1.4.
ZELLEN
UND
GEWEBE
.
33
1.4.1.
ZELLEN
.
33
1.4.2.
GEWEBE
.33
1.5.
ANTIKOEQRER
.
33
INHALTSVERZEICHNIS
1.5.
T.
PRIMAERE
ANTIKOERPER.
.
33
1.5.2.
SEKUNDAERE
ANTIKOERPER.
.
34
1.6.
PHOSPORTHIOAT
OLIGONUKLEOTIDE
.
34
2.
METHODEN
.
34
2.1.
ZELLKULTUR.
.
34
2.1.1.
AUFZUCHT
.
34
2.1.2.
DIFFERENZIERUNG
.
3
5
2.1.3.
EINFRIEREN
.35
2.1.4.
AUFTAUEN
.
36
2.2.
ZELLEMTE
.36
2.3.
BIOCHEMISCHE
TESTS
.
36
2.3.1.
BESTIMMUNG
DER
GPDH-AKTIVITAET
.
36
2.3.2.
BESTIMMUNG
DES
GLYZERINGEHALTS
IN
ZELLKULTURIIHERSTAENDEN
.
36
2.4.
PROTEINBESTIMMUNG
.
37
2.4.1.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
.
37
2.4.2.
PROTEINBESTIMMUNG
MIT
DEM
BCA-TEST
.
38
2.5.
I
LERSTELHMG
VON
MEMBRANPRAEPARATIONEN
.
38
2.5.
1.
MEMBRANPRAEPARATIONEN
VON
3T3-L1
ZELLE
.38
2.5.2.
MEMBRANPRAEPARATIONEN
VON
STROMAZELLEN
UND
FETTZELLEN
AUS
RATTEN
FETTGEWEBE
.
38
2.6.
SDS-PAGE
UND
WESTEMBLOT
.39
2.6.1.
SDS-PAGE
.
39
2.6.2.
IMMUNOBLOT
.
39
2.7.
REINIGUNG
UND
BESCHICHTUNG
VON
DECKGLAESCHEN
.
40
2.7.1.
REINIGUNG
VON
DECKGLAESCHEN.
40
2.7.2.
BESCHICHTUNG
VON
DECKGLAESCHEN
.
40
2.8.
HERSTELLEN
VON
KRYOSCHNITTEN
AUS
RATTENFETTGEWEBE
.
40
2.8.1.
FIXIERUNG
UND
EINBETTUNG
DES
FETTGEWEBES.
40
2.8.2.
HERSTELLEN
DER
KRYOSCHNITTE
.
40
2.9.
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
.
41
2.
1
0.
MIKROINJEKTIONEN
.
4
1
2.
11.
ANTISENSE-EXPERIMENTE.
.
4
1
IV.
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
_
43
INHALTSVERZEICHNIS
I.
ROLLE
DER
GAP
JUNCTIONS
BEI
DER
DIFFERENZIERUNG
VON
3T3-LI
PRAEADIPOZYTEN
ZU
ADIPOZYTEN
.
43
LI.
VORVERSUCHE
.
43
1.1.1.
AENDERUNG
DES
KOPPLUNGSVERHALTENS
IM
LAUCDER
DIFFERENZIENING
VON
3T3-LI
PRAEADIPOZYTEN
ZU
ADIPOZYTEN
.
43
1.
1
.
1
.
1.
AUFZUCHT
UND
DIFFERENZIERUNG
.
43
LI.
1.2.
INTERZELLULAERE
KOMMUNIKATION
TIBER
GAP
JUNCTIONS.
.
46
1.L2.
EINENGUNG
DES
KOPPLUNGSZEITRAUMS
.
47
1.1.2.1.
VORBEHANDLUNG
.
47
1.1.2.2.
KOPPLUNGSVERHALTEN
VORBEHANDELTER
ZELLEN
.
48
1.
1.2.3.
DIFFERENZIENINGSMARKER
.
5
1
1.1.2.4.
NACHWEIS
DES
GAP
JUNCTION
PROTEINS
CONNEXIN43
IN
3T3-LI
ZELLEN
.
53
1.
1.2.5.
LOKALISIERUNG
VON
CX43
IN
DIFFERENZIERENDEN
3T3-LI
PRAEADIPOZYTEN.
55
1.1.3.
EINFLUSS
DER
DIFFERENZIERUNGSZUSAETZE
CORTICOSTERON
UND
IBMX
AUF
DIE
KOPPLUNG
.
58
1.
1.3.1.
KOPPHINGSVERHALTEN
.
58
1.
1.3.2.
MORPHOLOGISCHE
UNTERSCHIEDE.
50
1.
1.3.3.
DIFFERENZIENINGSMARKER.
.
62
1.2.
BLOCK
DER
CONNEXIN
43
EXPRESSION
DURCH
ANTISENSE
PHOSPHORTHIOAT-OLIGONUKLEOTIDE
.
64
1.2.1.
VORVERSUCHE
ZUR
EINGRENZUNG
DER
OPTIMALEN
PTO-KONZENTRATION
.
64
1.2.2.
REPRESSION
DER
CX43-EXPRESSION
MIT
ANTISENSE-PTOS
.
71
1.3.
DIFFERENZIERUNG
VON
3T3-L1
PRAEADIPOZYTEN
OHNE
BETEILIGUNG
VON
GAP
JUNCTIONS
.76
1.3.1.
VERGLEICH
DER
DIFFERENZIENING
MIT
DEN
DREI
DIFFERENZIENINSPROTOKOLLEN
.
76
1.3.2.
VERGLEICH
DES
KOPPLUNGSVERHALTENS
VON
3T3-LI
ZELLEN
WAEHREND
DER
DIFFERENZIENING
MIT
DEN
DREI
VERSCHIEDENEN
DIFFERENZIENINGSPROTOKOLLEN
.
79
1.3.3.
EXPRESSION
VON
CX43
UNTER
VERSCHIEDENEN
DIFFERENZIENMGSBEDINGUNGEN.
84
1.3.4.
LOKALISIENMG
DES
CX43-PROTEINS
IN
DER
ZELLE
.89
1.4.
DISKUSSION
DER
ROLLE
VON
GAP
JUNCTIONS
BEI
DER
DIFFERENZIENING
.
92
2.
ROLLE
DER
GAP
JUNCTIONS
FUER
DIE
LIPOLYSE
.
102
2.
1
.
ROLLE
VON
GAP
JUNCTIONS
FUER
DIE
LIPOLYSE
IN
VITRO
.
102
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.1.
EINFLUSS
DER
LIPOLYT
ISCHEN
AGENZIEN
AUF
DIE
DIFFERENZIERUNG
.
1
02
2.
1
.2.
GLYZERINFREI
SETZUNG
ALS
MASS
FUER
DIE
LIPOLYTISCHE
WIRKUNG
VERSCHIEDENER
AGENZIEN
.
104
2.1.3.
EINFLUSS
VON
LIPOLYTISCHEN
AGENZIEN
AUF
DAS
KOPPLUNGSVERHALTEN.
105
2.1.4.
EINFLUSS
LIPOLYTISCHER
AGENZIEN
AUF
DIE
EXPRESSION
DES
CX43-PROTEINS
.
106
2.1.5.
LOKALISIERUNG
VON
CX43
IN
DEN
3T3-L1
ADIPOZYTEN
.
109
2.1.6.
LIPOLYSEEXPERIMENTE
IN
INSULINFREIEM
MEDIUM
.
11
1
2.2.
DIE
ROLLE
VON
GAP
JUNCTIONS
FIIR
DIE
LIPOLYSE
IN
VIVO
.
11
5
2.2.1.
GEWICHTSVERLUSTE
DURCH
HUNGERN
.
1
15
2.2.2.
NACHWEIS
VON
CX43-PROTEIN
IN
MEMBRANPRAEPARATIONEN
VON
FETTZELLEN
UND
STROMAVASKULAEREN
ZELLEN
DER
EINZELNEN
FETTDEPOTS
.
117
2.2.3.
IMMUNFLUORESZENZFARBUNG
AN
KRYOSCHNITTEN
VON
FETTGEWEBE
.
121
2.3.
DISKUSSION
DER
ROLLE
VON
GAP
JUNCTIONS
FUER
DIE
LIPOLYSE.
126
V.
LITERATUR
VERZEICII
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