Untersuchungen zum Gewebsbildungsprozess in der nodulären Palmarfibromatose (Morbus Dupuytren):
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. EINLEITUNG
1
1.1. DIE NODULAERE PALMARFIBROMATOSE (MORBUS DUPUYTREN) 1
1.2. DIE EXTRAZELLULAERE MATRIX - STRUKTUR UND FUNKTION 3
\
1.3. BEGRUENDUNG UND ZIELSTELLUNG DER ARBEIT 11
2. MATERIAL UND METHODEN
13
2.1. MATERIAL 13
2.1.1. GERAETE 13
2.1.2. CHEMIKALIEN 13
2.2. METHODEN
X ^ 16
2.2.1. GEWINNUNG UND AUFARBEITUNG DER APONEUROSEKTOMIE-
PRAEPARATE 16
2.2.1.1. PARAFFINEINBETTUNG / KONVENTIONELLE HISTOLOGIE 16
2.2.1.2. DIAGNOSESTELLUNG UND STADIENEINTEILUNG 16
2.2.1.3. KRYOKONSERVIERUNG FUER IMMUNHISTOCHEMISCHE VERFAHREN
UND FUER DIE IN-SITU-HYBRIDISIERUNG 16
2.2.1.4. GEWEBSMATERIAL FUER DIE ZELLKULTUR 17
2.2.2. WESTERNBLOT ZUM NACHWEIS VON LAMININ 17
2.2.2.1. ZIELPRAEPARATION DER FIBROMATOSEKNOTEN 17
2.2.2.2. AUFSCHLUSS DES GEWEBES 17
2.2.2.3. SDS-PAGE UND GELFAERBUNG 17
2.2.2.4. WESTERNBLOT, MEMBRANFAERBUNG UND IMMUNDETEKTION 18
2.2.3. IMMUNHISTOCHEMIE 18
2.2.3.1. IMMUNHISTOCHEMISCHE EINFACHMARKIERUNGEN 18
2.2.3.1.1. APAAP-METHODE 18
2.2.3.1.2. IMMUNFLUORESZENZMARKIERUNGEN 19
2.2.3.2. IMMUNHISTOCHEMISCHE DOPPELMARKIERUNGEN 19
2.2.3.2.1. IMMUNOGOLDTECHNIK 19
2.2.3.2.2. PAP-METHODE FUER POLYKLONALE KANINCHENSEREN 20
2.2.3.2.3. IMMUNFLUORESZENZ-DOPPELMARKIERUNGEN 20
2.2.3.3. LICHTMIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG 21
2.2.3.4. UEBERSICHT UEBER DIE VERWENDETEN PRIMAEREN MONOKLONALEN
ANTIKOERPER UND ANTISEREN 21
2.2.3.4.1. ANTIKOERPER UND ANTISEREN GEGEN FILAMENTPROTEINE,
FIBROBLASTENSPEZIFISCHE ANTIGENE UND PROLIFERATIONSMARKER 21
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.2.34.2.
2.2.3.4.3.
2.2.3.4.4.
2.2.3.4.5.
2
.
2
.
3
.
4
.
6
.
2.2.4.
2.2.4.1.
2.2.4.1.1.
2.2.4.1.2.
2.2.4.2.
2.2.4.2.1.
2.2.4.2.2.
2.2.4.3.
2.2.4.4.
2.2.5.
2
.
2
.
6
.
2
.
2
.
6
.
1
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2
.
2
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6
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2
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2
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2
.
6
.
3
.
2.2.6.3.1.
2
.
2
.
6
.
3
.
2
.
2.2.64.
2.2.6.4 1.
2.2.6.4.2.
2.2.6.5.
2.2.6.5.1.
2.2.6.5.3.
ANTIKOERPER UND ANTISEREN GEGENE HUMANE MATRIXPROTEINE 21
ANTIKOERPER UND ANTISEREN GEGEN HUMANE MATRIXREZEPTOREN
VOM INTEGRINTYP 21
ANTIKOERPER UND ANTISEREN GEGEN HUMANE WACHSTUMSFAKTOREN 21
ANTIKOERPER UND ANTISEREN GEGEN HUMANE WACHSTUMSFAKTOR
REZEPTOREN 21
ANTIKOERPER GEGEN HUMANE APOPTOSEASSOZIIERTE ANTIGENE 21
RNA-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG 22
IN-SITU-HYBRIDISIERUNGSPROTOKOLLE '
YY
22
FIBRONEKTIN RNA-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG UNTER VERWENDUNG
EINER CDNA-PROBE 22
RNA-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG UNTER VERWENDUNG VON
OLIGONUKLEOTIDSONDEN 22
NICHT-RADIOAKTIVE SONDENMARKIERUNG 23
BIOTIN- UND DIGOXIGENINMARKIERUNG VON CDNA-PROBEN MITTELS
NICK TRANSLATION ' - 23
BIOTIN- UND DIGOXIGENINMARKIERUNG VON OLIGONUKIEOTIDEN 23
KONTROLLEN 24
DETEKTIONSSYSTEME FUER DIE IN-SITU-HYBRIDISIERUNG 24
UNTERSUCHUNGEN ZUR APOPTOSE MITTELS N/MEL-METODE UND
IMMUNHISTOCHEMISCHER DETEKTION APOPTOSE-ASSOZIIERTER
ANTIGENE 25
ZELLKULTURUNTERSUCHUNGEN 26
PRIMAERKULTUR HUMANER FIBRO-/MYOFIBROBLASTEN DER
PALMARFIBROMATOSE 26
ZELLKULTUR AUF DIALYSEMEMBRAN 26
ELEKTRONENMIKROSROPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER KULTURZELLEN 27
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE 27
ULTRASTRUKTURIMMUNHISTOCHEMIE FUER TENASCIN AN KULTURZELLEN 27
IMMUNHISTOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER PRIMAERKULTUREN 28
APAAP-METHODE FUER ZELLKULTUREN 28
ANTIKOERPER 28
DREIDIMENSIONALE ZELLKULTUR 29
KOLLAGENGELKULTUR 29
FIXIERUNG UND IMMUNHISTOLOGISCHE BEARBEITUNG DER GELE 29
3.
3.1.
3.1.1.
ERGEBNISSE 31
CHARAKTERISIERUNG DES FIBRO-/MYOFIBROBLASTENPHAENOTYPS
UND DER PROLIFERATIVEN AKTIVITAET IN DEN PROLIFERATIONSKNOTEN
DER NODULAEREN PALMARFIBROMATOSE 31
PROLIFERATIVE AKTIVITAET UND VERTEILUNG DER FILAMENTPROTEINE
3.2.
3.2.1.
3.2.1.1.
3.2.1.2.
3.2.2.
3.2.3.
3.2.4.
3.2.4.1.
3.2.4.2.
3.3.
3.4.
3.4.1.
3.4.2.
3.5.
3.6.
3.7.
3.7.1.
3.7.2.
3.8.
3.8.1.
3.8.2.
3.8.3.
3.8.4.
3.8.5.
3.8.6.
3.9.
A-GLATTMUSKULAERES AKTIN, DESMIN UND VIMENTIN
DIE ZUSAMMENSETZUNG DER EXTRAZELLULAEREN MATRIX IN DEN
PROLIFERATIONSKNOTEN DER NODULAEREN PALMARFIBROMATOSE
CHARAKTERISIERUNG DER FIBRONEKTIN-MATRIX
DIE VERTEILUNG VON FIBRONEKTIN UND MOLEKULARER VARIANTEN VON
FIBRONEKTIN
FIBRONEKTINSYNTHESE
CHARAKTERISIERUNG DER TENASCIN-MATRIX
CHARAKTERISIERUNG DER KOLLAGEN TYP IV-MATRIX
CHARAKTERISIERUNG DER LAMININ-MATRIX
DIE VERTEILUNG VON MOLEKULAREN VARIANTEN VON LAMININ
WESTERNBLOT FUER LAMININ
DIE EXPRESSION VON MATRIXREZEPTOREN VOM INTEGRINTYP
WACHSTUMSFAKTOREN IN DER NODULAEREN PALMARFIBROMATOSE
IMMUNHISTOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DES VERTEILUNGSMUSTERS
VON WACHSTUMSFAKTOREN
WACHSTUMSFAKTOR-SYNTHESE (TGFB1, TGFSS2, BFGF, PDGF-A,
PDGF-B) IN DER NODULAEREN PALMARFIBROMATOSE
DIE EXPRESSION VON WACHSTUMSFAKTORREZEPTOREN
KORRELATION VON WACHSTUMSFAKTOR- UND WACHSTUMSFAKTOR
REZEPTORNACHWEIS-
APOPTOSENACHWEIS MITTELS TUNEL-METHODE UND IMMUN-
HISTOCHEMISCHER DETEKTION APOPTOSE-ASSOZIIERTER ANTIGENE
NACHWEIS VON APOPTOSE-ASSOZIIERTER DNA-FRAGMENTATION
MITTELS TUEA/EL-METHODE
NACHWEIS DER APOPTOSE-ASSOZIIERTEN ANTIGENE BCL-2 UND
31
32
32
32
32
33
33
33
33
34
35
35
35
36
37
37
38
38
APO-1/FAS (CD 95)
38
CHARAKTERISIERUNG PRIMAERER ZELLKULTUREN VON
FIBRO- / MYOFIBROBLASTEN DER NODULAEREN PALMARFIBROMATOSE 38
HUMANE FIBRO-/MYOFIBROBLASTEN DER NODULAEREN
PALMARFIBROMATOSE IN KULTUR 38
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER
PRIMAEREN ZELLKULTUREN 39
IMMUNHISTOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER EXPRESSION VON
PHAENOTYPMARKERN UND MATRIXPROTEINEN 39
DIE ULTRASTRUKTURELLE VERTEILUNG DER TENASCINDEPOSITION 40
IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS DER EXPRESSION DER
INTEGRINKETTEN A1-6, AV, SS1, SS3, UND SS4 41
IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS DER EXPRESSION AUSGEWAEHLTER
WACHSTUMSFAKTOREN UND WACHSTUMSFAKTORREZEPTOREN 41
ERGEBNISSE DER VERLAUFSUNTERSUCHUNGEN IN
DREIDIMENSIONALEN KOLLAGENGELKULTUREN
42
4. DISKUSSION
45
4
.
1
.
HERAUSBILDUNG DES MYOFIBROBLASTENPHAENOTYPS UND
MODULATION DER EXTRAZELLULIREN MATRIX IN DER NODULAEREN
PALMARFIBROMATOSE
45
4
.
2
.
MATRIXREZEPTOREN VOM TNTEGRINTYP IN DER NODULAEREN
PALMARFIBROMATOSE ^
52
4
.
3
. WACHSTUMSFAKTOREN UND WACHSTUMSFAKTORREZEPTOREN IN
DER NODULAEREN PALMARFIBROMATOSE 53
4
.
4
. APOPTOSEPHAENOMENE IN DER NODULAEREN PALMARFIBROMATOSE 56
4
.
5
. KONZEPTIONELLE UEBERLEGUNGEN ZUR REGULATION DER
GEWEBSNEUBILDUNG IN DER NODULAEREN PALMARFIBROMATOSE 58
5. ZUSAMMENFASSUNG \ = 60
6
. LITERATURVERZEICHNIS 62
7. TABELLEN UND ABBILDUNGEN
76
8
. VERZEICHNIS DER VERWENDETEN ABKUERZUNGEN
112
9
. VERZEICHNIS DER CHEMIKALIEN, PUFFER-, FAERB-, UND
FIXIERUNGSLOESIFAGEN
114 |
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