Inhibition der Cholesterinkristallisation in der Galle beim Menschen: Isolierung, Charakterisierung und pathogenetische Bedeutung biliärer Inhibitorproteine
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINFUEHRUNG ZUR PATHOGENESE DER CHOLESTERINGALLENSTEINE.1
1.1. HAUPTBESTANDTEILE DER GALLE. 2
1.2. UEBERSAETTIGUNG DER GALLE, GLEICH|EWICHTSTHERMODYNAMIK.3
1.2.1. UEBERSAETTIGUNG DER GALLE MIT CHOLESTERIN.3
1.2.2. URSACHEN DER UEBERSAETTIGUNG DER GALLE MIT CHOLESTERIN.7
1.2.3. UEBERSAETTIGUNG DER GALLE MIT PIGMENT.10
1.2.4. UEBERSAETTIGUNG DER GALLE MIT KALZIUM.12
1.3. KINETIK DER NUKLEATION UND DES WACHSTUMS VON
CHOLESTERINKRISTALLEN.13
1.3.1. PROMOTOR- UND INHIBITORFAKTOREN DER KRISTALLNUKLEATION.14
1.3.2. BILIAERE PROMOTOR- UND INHIBITORPROTEINE.15
1.3.3. DIE BEDEUTUNG VON GALLENBLASENMUZIN FUER DIE KRISTALLISATION VON
CHOLESTERIN IN GALLENBLASENGALLE. 17
1.4. STOERUNG DER GALLENBLASENMOTILITAET - REAKTIONSZEIT.18
2. AUFGABENSTELLUNG.21
3. MATERIAL UND METHODEN.23
3.1. GALLENBLASENGALTE.23
3.2. CHEMIKALIEN. 24
3.3. QUANTITATIVE ANALYTIK. 25
3.4. MODELLSYSTEME.28
3.4.1. HERSTELLUNG VON MODELLGALLE.28
3.4.2. HERSTELLUNG VON CHOLESTERIN-MONOHYDRATKRISTALLEN.30
3.4.3. HERSTELLUNG EINHEITLICHER CHOLESTERIN/PHOSPHOLIPID-VESIKEL.31
3.4.4. PRAEPARATION DER KRISTALLABSORBIERENDEN PROTEINE.32
3.4.5. RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN.34
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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II
3.5. BIOCHEMISCHE ARBEITSTECHNIKEN.35
3.5.1. PRAEPARATION VON GALLENBLASENMUZIN.35
3.5.2. LECTIN-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE. 35
3.5.3. PRAEPARATIVE SDS-POTYACRYLAMID-GEIELEKTROPHORESE.38
3.5.4. ANALYTISCHE SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE.42
3.5.5. ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG IM IMMOBILISIERTEN PH-GRADIENTEN.
43
3.5.6. ZWEIDIMENSIONALE ELEKTROPHORESE. 45
3.5.7. ENZYMATISCHE DEGLYKOSYLIERUNG.46
3.5.8. ENZYMATISCHE PROTEOLYSE.47
3.5.9. IMMUNOAFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE. 48
3.5.10. IMMUNOBIOTTING. 48
3.5.11. ENZYME-IINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA).49
3.6. STATISTISCHE VERFAHREN. 50
4. ERGEBNISSE .51
4.1. CHOLESTERINKRISTALLISATIONSTEST.51
4.1.1. METHODISCHER ANSATZ.51
4.1.2. SPEZIFISCHE PHOTOMETRISCHE MESSUNG DER KRISTALLVERMITTELTEN
* TRUEBUNG.52
4.1.3. STANDARDKURVE.54
4.1.4. EIGENSCHAFTEN DER KRISTALLWACHSTUMSKURVE.55
4.1.5. EINFLUSS VON GALLENBLASENMUZIN UND APOLIPOPROTEIN A-L AUF DIE
CHOLESTERINKRISTALLISATION.58
4.2. KOEXISTENZ ANTAGONISTISCHER PROTEINE IN STEINFREIER GALLE.60
4.2.1. ISOLIERUNG LECTIN-GEBUNDENER PROTEINGEMISCHE AUS
GALLENBLASENGALLE.60
4.2.2. EINFLUSS DER LECTIN-GEBUNDENEN PROTEINE AUF DIE
CHOLESTERINKRISTALLISATION. 62
4.2.3. SEQUENTIELLE LECTIN-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE. 68
III
4.3. CHOLESTERIN-KRISTALLBINDENDE PROTEINE.73
4.3.1. IDENTIFIZIERUNG DER KRISTALLBINDENDEN PROTEINE. 73
4.3.2. MODIFIKATION DER CHOLESTERINKRISTALLMORPHOLOGIE. 76
4.3.3. ISOLIERUNG DER KRISTALLBINDENDEN PROTEINE.79
4.4. CHARAKTERISIERUNG DER KRISTALLBIR|DENEN PROTEINE. 62
4.4.1. BIOCHEMISCHE PARAMETER. 82
4.4.2. EINFLUSS DER KRISTALLBINDENDEN PROTEINE AUF DIE CHOLESTERIN-
KRISTALLWACHSTUMSKURVE.83
4.4.3. SPEZIFITAET DES PROTEINVERMITTELTEN INHIBITOREFFEKTES.86
4.4.4. IDENTITAET DER ^RISTALLBINDENDEMLNHIBITORPROTEINE. 89
4.5. VERGLEICH DER EFFEKTOREIGENSCHAFTEN DER HUMANEN SEKRETORISCHEN
IMMUNGLOBULINE A AUS GALLE UND AUS KOLOSTRUM.91
5. DISKUSSION. 94
5.1. STELLENWERT DER CHOLESTERINWACHSTUMSTESTS.94
5.2. TRENNVERFAHREN ZUR ISOLIERUNG BILIAERER INHIBITORPROTEINE.96
5.3. CHOLESTERIN-KRISTALLBINDENDE INHIBITORPROTEINE.97
5.4. AENDERUNG DER CHOLESTERIN-KRISTALLMORPHOLOGIE UNTER DEM EINFLUSS VON
INHIBITORPROTEINEN.100
5.5. IDENTITAET DER KRISTALLBINDENDEN INHIBITORPROTEINE.102
6. ZUSAMMENFASSUNG. 104
7. BEDEUTUNG DER ERGEBNISSE FUER DIE PATHOGENESE UND PRAEVENTION VON
GALLENSTEINEN.108
8. LITERATURVERZEICHNIS.113
9. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS. 126
10. DANKSAGUNG
128 |
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