Isolierung und Charakterisierung von Sinusendothelzellen der Schweineleber, sowie Entwicklung von Methoden zur Erfassung von Schäden unter Hypoxie und Reoxigenierung:
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1
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
6
1.1
ZELLEN
DER
LEBERSINUS
6
1.2
BEDEUTUNG
VON
HYPOXIE-ZREOXIGENIERUNGSSCHAEDEN
DER
LEBER
9
1.3
HYPOXIE-/REOXIGENIERUNGSSCHAEDEN
DER
VERSCHIEDENEN
10
LEBERZELLPOPULATIONEN
1.4
PATHOPHYSIOLOGIE
VON
HYPOXIE
UND
REOXIGENIERUNG
12
1.5
METHODEN
DER
SINUSENDOTHELZELLISOLIERUNG
AUS
LEBERN
14
1.5.1
DAS
ENZYM
KOLLAGENASE
15
1.6
VIABILITAETSKRITERIEN
FUER
SINUSENDOTHELZELLEN
16
1.7
IN
VZFRO-KONSERVIERUNGSMODELLE
AN
ENDOTHELZELLKULTUREN
16
1.8
FRAGE-UND
THEMENSTELLUNG
DER
VORGELEGTEN
ARBEIT
17
2
MATERIAL
UND
METHODEN
18
2.1
SINUSENDOTHELZELLMODELL
18
2.1.1
SINUSENDOTHELZELLISOLIERUNG
18
2.1.2
ISOLIERUNG
ARTERIELLER
UND
VENOESER
ENDOTHELZELLEN
VOM
SCHWEIN
21
2.1.3
ISOLIERUNG
MENSCHLICHER
NABELVENENENDOTHELZELLEN
21
2.1.4
SINUSENDOTHELZELLKULTUR
21
2.1.5
KULTUR
ARTERIELLER
UND
VENOESER
ENDOTHELZELLEN
22
2.1.6
AKTIVIERUNG
DER
ENDOTHELZELLEN
22
2.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
SINUSENDOTHELZELLEN
23
2.2.1
PHASENKONTRASTMIKROSKOPIE
23
2.2.2
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
23
2.2.3
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE
24
2.2.4
FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
24
2.2.5
NACHWEIS
DES
ACETYL-LDL
REZEPTOR
ANTIGENS
26
2.2.6
SOLUBILISIERUNG
DER
ZELLEN
26
2.2.7
PROTEINBESTIMMUNG
27
2.2.8
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
27
2.2.9
FAERBUNGEN
VON
SDS-GELEN
29
2.2.10
IMMUNBLOTTING
29
2
2.3
MODELL
DER
IN
VITRO
-HYPOXIE
UND
-REOXIGENIERUNG
33
2.3.1
VERSUCHSAUFBAU
33
2.3.2
BESTIMMUNG
DER
ENZYMFREISETZUNG
34
2.3.3
BESTIMMUNG
DER
TRYPANBLAU-AUFNAHME
34
2.3.4
BESTIMMUNG
DER
ZELLABLOESERATE
35
2.3.5
MORPHOLOGISCHE
BEURTEILUNG
35
2.3.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
DATEN
35
2.4
MODELL
DER
GRANULOZYTENADHAESION
AN
GEFAESSENDOTHELZELLEN
36
UND
SINUSENDOTHELZELLEN
DER
LEBER
NACH
HYPOXIE/
REOXIGENIERUNG
2.4.1
GRANULOZYTENISOLIERUNG
36
2.4.2
MYELOPEROXIDASEBESTIMMUNG
37
2.4.3
YY
VERSUCHSAUFBAU
37
2.4.4
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
DATEN
38
3
ERGEBNISSE
39
3.1
ZELLISOLIERUNG
39
3.1.1
SINUSENDOTHELZELLISOLIENING
39
3.1.2
SINUSENDOTHELZELLKULTUR
39
3.1.3
ISOLIERUNG
ARTERIELLER
UND
VENOESER
ENDOTHELZELLEN
VOM
SCHWEIN
40
3.1.4
ISOLIERUNG
UND
KULTUR
MENSCHLICHER
NABELVENENZELTEN
41
3.2.
CHARAKTERISIERUNG
UND
IDENTIFIZIERUNG
DER
ZELLEN
43
3.2.1
PHASENKONTRASTMIKROSKOPIE
43
3.2.2
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
44
3.2.3
TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE
46
3.2.4
NACHWEIS
DES
LDL-REZEPTORS
47
3.2.5
AUSSCHLUSS
DES
VON
WILLEBRAND-FAKTORS
48
3.2.6
NACHWEIS
DER
PHAGOZYTOSEFAEHIGKEIT
48
3.2.7
NACHWEIS
VON
E-SELEKTIN
.
51
3.2.8
AUSSCHLUSS
VON
P-SELEKTIN
53
3.3
ETABLIERUNG
EINES
MODELLS
DER
IN
VITRO-HYPOXIE
UND
54
REOXIGENIERUNG
3.3.1
ENZYMFREISETZUNG
54
3.3.2
TRYPANBLAU-AUFNAHME
55
3.3.3
ZELLABLOESERATE
57
3
3.3.4
MORPHOLOGISCHE
BEURTEILUNG
3.4
GRANULOZYTENADHAESION
AN
GEFAEBENDOTHELZELLEN
UND
SINUSENDOTHELZELLEN
DER
LEBER
NACH
HYPOXIE/
REOXIGENIERUNG
4
DISKUSSION
4.1
SINUSENDOTHELZELLISOLIERUNG
4.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
SINUSENDOTHELZELLEN
4.3
EIGNUNG
DER
IN
VI/RO-ZELLKULTUR
FUER
HYPOXIE-UNTERSUCHUNGEN
4.3.1
MODELL
DER
IN
VITRO-HYPOTHERMIE
UND
-HYPOXIE
4.3.2
MODELL
DER
IN
VITRO-GRANULOZYTENADHAESION
AN
GEFAESSENDOTHELZELLEN
UND
SINUSENDOTHELZELLEN
DER
LEBER
NACH
HYPOXIE/REOXIGENIERUNG
4.4
AUSBLICK
8
SS
8
8
AE
OEL
A
A
A
&
5
ZUSAMMENFASSUNG
5.1
SUMMARY
6
LITERATURVERZEICHNIS
84
7
PUBLIKATIONSLISTE
95
8
DANKSAGUNG
96
9
LEBENSLAUF
97 |
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