Quantitative Untersuchungen tumorassoziierter Proteolysefaktoren (Kathepsin B und D, uPA, uPA-Rezeptor, PAI-1) mittels Durchflußzytofluorometrie (FACScan):
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1997
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GLIEDERUNG
SEITE
1.
EINLEITUNG
1.1
DIE
BEDEUTUNG
VON
PROTEASEN,
IHRER
INHIBITOREN
UND
REZEPTOREN
BEI
TUMORINVASION
UND
METASTASIERUNG
5
1.2
DIE
ASPARTYLPROTEASE
KATHEPSIN
D
7
1.3
DIE
CY
STEINPROTEASE
KATHEPSIN
B
7
1.4
DIE
SERINPROTEASE
UROKINASE-TYP
PLASMINOGEN-AKTIVATOR
(UPA)
8
1.5
DER
PLASMINOGEN-AKTIVATOR-INHIBITOR
1
(PAI-1)
9
1.6
DER
UROKINASE-TYP
PLASMINOGENAKTIVATOR-REZEPTOR
(UPA-R)
10
1.7
DIE
KLINISCH-ONKOLOGISCHE
BEDEUTUNG
TUMORASSOZIIERTER
PROTEOLYSEFAKTOREN
11
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
2.1
MATERIAL
13
2.1.1
REAGENZIEN
13
2.1.2
ANTIKOERPER
13
2.1.3
ELISA-KITS
14
2.1.4
ZELLEN
14
2.2
GERAETE
15
2.2.1
DAS
DURCHFLUSSZY
TOFLUOROMETER
FACSCAN
15
2.2.2
DAS
KONFOKALE
LASER-SCAN-MIKROSKOP
CLSM
17
2.3
METHODEN
18
2.3.1
ZELLKULTUR
UND
PRAEPARATION
DER
BLUTLYMPHOZYTEN
18
2.3.2
ETHANOLFIXIERUNG
19
2.3.3
DURCHFLUSSZYTOFLUOROMETRISCHE
BESTIMMUNG
VON
KATHEPSIN
B
UND
D,
UPA,
UPA-R
UND
PAI-1
19
2.3.4
AUSWERTUNG
DER
DURCHFLUSSZYTOFLUOROMETRISCHEN
MESSUNGEN
20
2.3.5
QUANTITATIVER
ENZYMIMMUNOASSAY
FUER
UPA
UND
UPA-R
21
2.3.6
LASERMIKROSKOPISCHER
NACHWEIS
VON
KATHEPSIN
B
22
3.
ERGEBNISSE
3.1
AUSWIRKUNGEN
DER
DETEKTOIEINSTELLUNG
UND
DER
KOMPENSATIONS
EINSTELLUNG
AUF
DIE
FLUORESZENZINTENSITAETEN
BEI
DURCHFLUSSZYTOFLUO
ROMETRISCHEN
MESSUNGEN
23
3.2
GEHALT
TUMORASSOZIIERTER
PROTEOLYSEFAKTOREN
(KATHEPSIN
B
UND
D,
UPA,
UPA-R
UND
PAI-1)
IN
VERSCHIEDENEN
TUMORZELLINIEN
UND
IN
PBL
NACH
BESTIMMUNG
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOFLUOROMETRIE
(EINFARBENFLUO
RESZENZANALYSE)
27
3.3
GEHALT
TUMORASSOZIIERTER
PROTEOLYSEFAKTOREN
(KATHEPSIN
B
UND
D,
UPA,
UPA-R
UND
PAI-1)
IN
VERSCHIEDENEN
TUMORZELLINIEN
UND
IN
PBL
NACH
BESTIMMUNG
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOFLUOROMETRIE
(ZWEIFAR
BENFLUORESZENZANALYSE).
VERGLEICH
MIT
DER
EINFARBENFLUORESZENZANALYSE
29
3.3.1
KATHEPSIN
D
30
3.3.2
KATHEPSIN
B
33
3.3.3
UPA
36
3.3.4
UPA-R
39
3.3.5
PAI-1
42
3.4
GEHALT
TUMORASSOZIIERTER
PROTEOLYSEFAKTOREN
(UPA,
UPA-R)
IN
VERSCHIEDENEN
TUMORZELLINIEN
UND
IN
PBL
NACH
BESTIMMUNG
MITTELS
ELISA
45
3.5
DETEKTION
TUMORZELLASSOZIIERTER
PROTEOLYSEFAKTOREN
MITTELS
KONFOKALER
LASERMIKROSKOPIE
47
4.
DISKUSSION
49
5.
AUSBLICK
54
6.
ZUSAMMENFASSUNG
55
ANHANG
56
LITERATURVERZEICHNIS
65
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
75
TABELLENVERZEICHNIS
77 |
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