Verfügbarkeit: Erstellung eines transgenen Tiermodelles für die Alzheimer-Krankheit in Ratten

Erstellung eines transgenen Tiermodelles für die Alzheimer-Krankheit in Ratten:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Scheel, Per-Olaf (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	1997
Schlagworte:	Ratte Tiermodell Transgene Tiere Alzheimerkrankheit Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	VIII, 168 S. Ill., graph. Darst.

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS I. EINLEITUNG 1. DIE ALZHEIMERSCHE KRANKHEIT 1 2. MOLEKULARE FAKTOREN DER ALZHEIMER-KRANKHEIT 2 2.1 DAS AMYLOID-VORLAEUFER-PROTEIN (APP) 2 2.2 DIE PROZESSIERUNG VON APP UND DAS SSA4-PEPTID 4 2.3 ANDERE MOLEKULARE FAKTOREN DER ALZHEIMER-KRANKHEIT 7 3. DER 5HT1 A-SEROTONIN-REZEPTOR-PROMOTOR 9 4. ZIELSETZUNG 9 II. MATERIAL UND METHODEN 11 1. MIKROORGANISMEN UND DEREN KULTURBEDINGUNGEN 11 2. MAUSSTAEMME 11 3. RATTENSTAEMME 11 4. MOLEKULARBIOLOGISCHE TECHNIKEN 11 4.1 DNA-TECHNIKEN 11 4.1.1 MINIPLASMID-MINIPRAEPARATION (VERAENDERT NACH MANIATIS 12 ET AL. 1989) 4.1.2 MIDIPLASMIDPRAEPARATION NACH QUIAGEN 13 4.1.3 GESAMT-DNA-ISOLIERUNG AUS GEWEBEN 14 4.1.3.1 ISOLIERUNG GENOMISCHER DNA AUS 14 SCHWANZSPITZEN NACH HOGAN ET AL. 4.1.3.2 ISOLIERUNG VON DNA AUS GEWEBEN MIT DEM 15 QIAMP TISSUE-KIT (QUIAGEN) 4.1.4 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 16 4.1.5 DNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 17 4.1.6 RESTRIKTION VON DNA 18 4.1.7 ISOLIERUNG VON DNA AUS PRAEPARATIVEN AGOROSEGELEN 18 4.1.7.1 ISOLIERUNG VON DNA MIT GLASS-MAX (STRATAGENE) 18 4.1.7.2 ISOLIERUNG VON DNA MIT GENE CLEAN (BIO 101) 19 4.1.7.3 ISOLIERUNG VON DNA MIT DEM MICROCON 50 SYSTEM 20 (AMICON) 4.1.8 LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN 20 4.1.9 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN 21 4.1.10 TRANSFER VON DNA AUF NYLONMEMBRANEN (SOUTHERN 21 BLOT) 4.1.11 HYBRIDISIERUNG VON DNA-MEMBRANEN MIT RADIOAKTIV 22 MARKIERTEN SONDEN 4.1.11.1 RADIOAKTIVE HYBRIDISIERUNG MIT QUICKHYB 22 (STRATAGENE) INHALTSVERZEICHNIS 4.1.11.2 RADIOAKTIVE HYBRIDISIERUNG IN EINER 23 NATRIUMPHOSPHAT-LOESUNG 4.1.12 NICHT-RADIOAKTIVE HYBRIDISIERUNG VON DNA-MEMBRANEN 24 MIT OLIGONUKLEOTIDEN 4.1.13 DETEKTION VON BIOTINYLIERTEN OLIGONUKLEOTIDEN 25 4.1.14 AUTORADIOGRAPHIE 26 4.1.14.1 AUTORADIOGRAPHIE MIT ROENTGENFILMEN 26 4.1.14.2 AUTORADIOGRAPHIE MIT DEM PHOSPHORSCREEN 26 4.1.15 FREIWASCHEN ODER ' STRIPPEN ' VON MEMBRANEN 26 4.1.16 AMPLIFIZIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN MIT PCR 27 4.1.17 ETHANOLFAELLUNG VON DNA 28 4.1.18 HERSTELLUNG KOMPETENTER BAKTERIENZELLEN FUER DIE 29 TRANSFORMATION 4.1.19 TRANSFORMATION KOMPETENTER BAKTERIENZELLEN 29 4.1.20 ELEKTROELUTION VON DNA-FRAGMENTEN FUER DIE 30 MIKROINJEKTION 4.2 DNA-TECHNIKEN 31 4.2.1 ISOLIERUNG VON RNA NACH CHOMCZYNSKI & SACCHI (1987) 32 4.2.2 ISOLIERUNG VON RNA NACH CHIRGWIN (1979) 33 4.2.3 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON RNA 34 4.2.4 ELEKTROPHORESE VON RNA IN FORMALDEHYD-AGAROSEGELEN 34 (NACH MANIATIS ET AL.) 4.2.5 ELEKTROPHORESE VON RNA IN PHOSPHAT-AGAROSEGELEN 35 4.2.6 TRANSFER VON RNA AUF NYLONMEMBRANEN MIT "PRESSURE 36 BLOT* VON STRATAGENE (NORTHERN BLOT) 4.2.7 TRANSFER VON RNA AUF NYLONMEMBRANEN MITTELS 37 KAPILLARBLOT (NORTHERN BLOT) 4.2.8 HYBRIDISIERUNG VON RNA MIT RADIOAKTIV MARKIERTEN DNA 37 FRAGMENTEN 4.2.9. BEHANDLUNG VON RNA MIT DNASE I 37 4.2.10 RT-PCRVONRNA 38 4.2.11 ETHANOLFAELLUNG VON RNA 39 5. PROTEINANALYSEN 40 5.1 PROTEINISOLIERUNG 40 5.1.1 PROTEINISOLIERUNG AUS GEWEBEPROBEN 40 5.1.2 PROTEINISOLIERUNG AUS ZELLEN 41 5.2 ANREICHERUNG VON PROTEINEN 41 5.2.1 ACETONFAELLUNG VON PROTEINEN 41 5.2.2 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON PROTEINEN 42 -II INHALTSVERZEICHNIS 5.2.3 IMMUNPRAEZIPITATION VON PROTEINEN 42 5.2.3.1 IMMUNPRAEZIPITATION NICHT-RADIOAKTIV MARKIERTER 43 PROTEINE 5.2.3.2 IMMUNPRAEZIPITATION RADIOAKTIV MARKIERTER 44 PROTEINE 5.3 AUFTRENNUNG VON PROTEINEN MITTELS DER POLYACRYLAMID 45 GELELEKTROPHORESE 5.3.1 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE NACH LAEMMLI 45 (1970) 5.3.2 TRIS-TRICIN-SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE NACH 47 SCHAEGGER UND JAGOW (1987) 5.4 TRANSFER VON PROTEINEN AUF EINE TRAEGERMEMBRAN (WESTERN 49 BLOT) 5.5 FREIWASCHEN DER TRAEGERMEMBRAN VON ANTIKOERPERN 50 5.6 FIXIEREN VON SDS-POLYACRYLAMID-GELEN 51 5.7 ANTIKOERPER 51 6. HERSTELLUNG TRANSGENER TIERE 52 6.1 SUPEROVULATION DER OOZYTEN-SPENDERTIERE 53 6.1.1 SUPEROVULATION VON MAEUSEN 53 6.1.2 SUPEROVULATION VON RATTEN 54 6.2 VORBEHANDLUNG DER LEIHMUETTER FUER DEN RETRANSFER 56 6.2.1 VORBEHANDLUNG DER LEIHMUETTER BEI DER MAUS 56 6.2.2 VORBEHANDLUNG DER LEIHMUETTER BEI DER RATTE 56 6.3 ISOLIERUNG VON OOZYTEN AUS SUPEROVULIERTEN WEIBCHEN (NACH 57 HOGAN ET AL., 1986) 6.4 MIKROINJEKTION VON OOZYTEN 59 6.5 RETRANSFER VON OOZYTEN IN LEIHMUETTER 63 6.6 SCHWANZBIOPSIE POTENTIELL TRANSGENER NACHKOMMEN 65 6.7 ISOLIERUNG VON EMBRYONEN AUS MAEUSEN 65 6.8 FIXIERUNG VON MAUS-EMBRYONEN 66 6.9 FAERBUNG VON EMBRYONEN MIT BLUO-GAL 66 7. ZELLKULTUR 67 7.1 ISOLIERUNG UND KULTIVIERUNG PRIMAERER CEREBELLARER NEURONEN 67 7.2 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON PRIMAEREN CEREBELLAREN 68 NEURONEN 8. MATERIALIEN 69 8.1 CHEMIKALIEN 69 8.2 RADIOCHEMIKALIEN 70 -IN INHALTSVERZEICHNIS 8.3 ENZYME 70 8.3.1 RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN 70 8.3.2 DNA-MODIFIZIERENDE ENZYME 70 8.3.3 ANDERE ENZYME 71 8.4 REAGENZIEN FUER DIE ZELLKULTUR 71 8.4.1 ZELLKULTURMEDIEN 71 8.4.2 ZUSAETZE FUER DIE ZELLKULTURMEDIEN 71 8.5 ROENTGENFILME 71 III. EXPERIMENTE UND ERGEBNISSE 72 1. FUER DIE MIRKROINJEKTION VERWENDETE CDNA-KONSTRUKTE 72 1.1 CDNA-KONSTRUKTE FUER DIE MIKROINJEKTION IN RATTEN-OOZYTEN 72 1.2 CDNA-KONSTRUKTE FUER DIE MIKROINJEKTION IN MAUS-OOZYTEN 74 2. CHARAKTERISIERUNG TRANSGENER TIERE 75 2.1 IDENTIFIZIERUNG TRANSGENER TIERE 75 2.1.1 IDENTIFIZIERUNG TRANSGENER TIERE MIT PCR 75 2.1.1.1 IDENTIFIZIERUNG TRANSGENER RATTEN DES CMV-NSE 75 APP 751 SCHWEDISCH KONSTRUKTES MIT PCR 2.1.1.2 IDENTIFIZIERUNG TRANSGENER RATTEN DES CMV 77 SPA4CT KONSTRUKTES 2.1.1.3 IDENTIFIZIERUNG TRANSGENER MAEUSE DES M5HT1A 78 LAC Z-REPORTERGENKONSTRUKTES 2.1.2 IDENTIFIZIERUNG TRANSGENER TIERE MIT SOUTHERN BLOT 79 2.1.2.1 SOUTHERN BLOT MIT DEN CMV-NSE-APP 751 79 SCHWEDISCH-LINIEN 2.1.2.2 SOUTHERN BLOT MIT DEN CMV-SPA4CT-LINIEN 81 2.1.2.3 SOUTHERN BLOT MIT DEN M5HT1A-/AC Z-MAUSLINIEN 83 2.1.3 AUFBAU TRANSGENER RATTEN BZW. MAUS-LINIEN 85 2.2 KOPIEZAHLBESTIMMUNG TRANSGENER LINIEN 85 2.2.1 KOPIEZAHLBESTIMMUNG DER CMV-NSE-APP 751 86 SCHWEDISCH-RATTENLINIEN 2.2.2 KOPIEZAHLBESTIMMUNG BEI DEN CMV-SPA4CT 87 RATTENLINIEN 2.2.3 KOPIEZAHLBESTIMMUNG EINER M5HT1A-/AC Z-MAUSLINIE 89 2.3 EXPRESSIONSNACHWEIS MIT NORTHERN BLOT 90 2.3.1 EXPRESSIONSNACHWEIS MIT NORTHERN BLOTS BEI EINER CMV 90 NSE-APP 751 SCHWEDISCH RATTENLINIE 2.3.2 EXPRESSIONSNACHWEIS MIT NORTHERN BLOTS BEI DEN CMV 93 SPA4CT-RATTENLINIEN 2.4 EXPRESSIONSNACHWEIS MIT RT-PCR 93 -IV INHALTSVERZEICHNIS 2.4.1 EXPRESSIONSNACHWEIS MIT RT-PCR DER CMV-NSE-APP 93 751 SCHWEDISCH RATTENLINIEN IN GEHIRN UND NIERE 2.4.2 EXPRESSIONSNACHWEIS MIT RT-PCR DER CMV-SPA4CT 97 RATTENLINIEN IN GEHIRN UND NIERE 2.5 OLIGONUKLEOTIDHYBRIDISIERUNGEN MIT DEN SPEZIFISCHEN RT 99 PCR-FRAGMENTEN 2.5.1 OLIGONUKLEOTIDHYBRIDISIERUNG MIT DEN RT-PCR 99 FRAGMENTEN DER CMV-NSE-APP 751 SCHWEDISCH RATTENLINIEN 2.5.2 OLIGONUKLEOTIDHYBRIDISIERUNG MIT DEN RT-PCR 101 FRAGMENTEN DER CMV-SUEA4CT-RATTENLINIEN 2.6 WESTERN BLOT ANALYSEN TRANSGENER RATTENLINIEN 103 2.6.1 WESTERN BLOT ANALYSEN MIT GEHIRN UND NIERE VON EINER 103 CMV-NSE-APP 751 SCHWEDISCH RATTENLINIE 2.6.2 WESTERN BLOT ANALYSEN MIT GEHIRN UND NIERE VON EINER 106 CMV-SPA4CT RATTENLINIE 2.7 IMMUNPRAEZIPITATIONSANALYSEN TRANSGENER RATTENLINIEN 106 2.7.1 IMMUNPRAEZIPITATION MIT GEHIRN UND NIERE EINER CMV 107 NSE-APP 751 SCHWEDISCH-RATTENLINIE 2.7.2 IMMUNPRAEZIPITATION DER HIRNAREALE EINER CMV-NSE-APP 111 751 SCHWEDISCH-RATTENLINIE 2.7.3 IMMUNPRAEZIPITATION VON ORGANEN EINER CMV-NSE-APP 112 751 SCHWEDISCH-RATTENLINIE 2.7.4 IMMUNPRAEZIPITATIONSANALYSEN DER CMV-SPA4CT 113 RATTENLINIEN 2.8 EMBRYONENFAERBUNG VON MAEUSE DER M5HT1 MAC Z-LINIEN 114 2.9 GEWICHTSKURVEN HOMOZYGOTER M5HT1A-ZAC Z-MAEUSE 114 2.10 PHAENOTYPISCHE BESCHREIBUNG ADULTER HOMOZYGOTER TIERE 117 EINER M5HT1A-/ACZ-MAUSLINIE 2.11 PHAENOTYPISCHE BESCHREIBUNG ADULTER HOMOZYGOTER TIERE 118 EINER M5HT1A-/ACZ-MAUSLINIE 3. PRIMAERZELLKULTUR TRANSGENER RATTENNEURONE 120 3.1 KULTIVIERUNG PRIMAERER CEREBELLARER NEURONE 120 3.2 PROTEINANALYSE PRIMAERER CEREBELLARAR NEURONE AUS 123 TRANSGENEN RATTENLINIEN 3.2.1 PROTEINANALYSE PRIMAERER CEREBELLARER NEURONE EINER 123 CMV-NSE-APP 751 SCHWEDISCH-RATTENLINIE 3.2.2 PROTEINANALYSE PRIMAERER CEREBELLARER NEURONE DER 124 CMV-SPA4CT-RATTENLINIEN 3.2.3 PROTEINANALYSE PRIMAERER CEREBELLARER NEURONE AUS 127 WILDTYP-RATTEN -V INHALTSVERZEICHNIS IV. DISKUSSION 128 1. DIE KONSTRUKTE 130 1.1 CMV-SPA4CT 130 1.2 CMV-NSE-APP 751 SCHWEDISCH 131 1.3 M5HT1A-/ACZ 133 2. DIE RNA-EXPRESSION 133 2.1 CMV-SPA4CT IN RATTEN 134 2.2 CMV-NSE-APP 751 SCHWEDISCH IN RATTEN 134 2.3 EXPRESSION DURCH DEN M5HT1A-REZEPTOR-PROMOTOR 135 3. DIE PROTEINANALYSE 136 3.1 M5HT1A-/ACZ IN MAEUSEN 136 3.2 CMV-SPA4CT RATTENLINIE 138 3.3 CMV-NSE-APP 751 SCHWEDISCH-RATTEN 139 4. ANALYSEN PRIMAERER CEREBELLARER NEURONE 143 4.1 CMV-SPA4CT-RATTENLINIEN 143 4.2 CMV-NSE-APP 751 SCHWEDISCH 144 V. ZUSAMMENFASSUNG 146 VI. LITERATURVERZEICHNIS 149 LEBENSLAUF 166 -VI
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