Zytokinexpression in T-Helferzellen: Muster, Kinetik und Prägung
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INHALTSVERZEICHNIS
SETTE
1
EINLEITUNG
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
10
2.1
MAEUSE
UND
ZELLEN
2.2
STIMULATION
VON
T-ZELLEN
IN
VITRO
1
0
2.3
ANTIKOERPER
11
2.4
KOPPLUNG
VERSCHIEDENER
HAPTENE
UND
FLUOROCHROME
AN
ANTIKOERPER
1
2
2.5
MAGNETISCHE
ZELLSORTIERUNG
14
2.6
DIE
TECHNOLOGIE
DER
ZELLULAEREN
AFFINITAETSMATRIX
1
6
2.7
NACHWEIS
VON
ZELLOBERFLAECHEN-ASSOZIIERTEM
IFN-Y
17
2.8
MAGNETOFLUORESZENTE
LIPOSOMEN
17
2.9
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN
17
2.10
IMMUNFLUORESZENZANALYSEN
19
2.11
ELISA
FUER
IL-2,
IL-4,
IL-5,
IL-10
UND
IFN-Y
DER
MAUS
19
3
ERGEBNISSE
3.1
EXPERIMENTELLE
SYSTEME
ZUR
STIMULATION
VON
TH-ZELLEN
DER
MAUS
IN
VITRO
21
3.1.1
STIMULATION
VON
TH-ZELLEN
IN
VITRO
MIT
DEM
SUPERANTIGEN
SEB
22
3.1.1.1
ANALYSE
DER
ZYTOKINEXPRESSION
AKTIVIERTER
TH-ZELLEN
MITTELS
INTRAZELLULAERER
IMMUNFLUORESZENZ
24
3.1.1.2
KINETIKEN
DER
EXPRESSION
VON
IL-2,
IFN-Y
UND
IL-10
IN
SEB
AKTIVIERTEN
TH-ZELLEN
26
3.1.1.3
DIFFERENTIELLE
INDUKTION
VON
ZYTOKINEN
IN
SEB-AKTIVLERTEN
TH-ZELLEN
27
3.1.2
ANTIGEN-SPEZIFISCHE
STIMULATION
VON
TH-ZELLEN
IN
VITRO
28
3.1.2.1
STIMULATION
VON
OVA-TCR*9
TH-ZELLEN
IN
VITRO
MIT
OVAE323-339
2
8
3.1.2.2
VERGLEICH
VON
POLYKLONALER
MIT
ANTIGEN-SPEZIFISCHER
RESTIMULATION
VON
OVA-SPEZIFISCHEN
TH-ZELLEN
3
0
3.1.2.3
ANALYSE
DER
ZYTOKINPRODUKTION
VON
TH-ZELLEN
EX
VIVO
32
3.1.2.4
ISOLIERUNG
CD62L+
(NAIVER)
TH-ZELLEN
34
3.1.2.5
DIFFERENTIELLE
INDUKTION
VON
ZYTOKINEN
IN
OVA-AKTIVIERTEN
TH-ZELLEN
38
3.2
KOPRODUKTION
VON
IL-2,
IL-4,
IL-5,
IL-10
UND
IFN-Y
IN
INDIVIDUELLEN
T-ZELLEN
39
3.2.1
KOPRODUKTION
VON
ZYTOKINEN
IN
SEB
BZW.
SEB+IL-4-AKTIVLERTEN
TH-ZELLEN
39
3.2.2
KOPRODUKTION
VON
ZYTOKINEN
IN
OVA+IL-12&IL-4-AKTIVIERTEN
TH-ZELLEN
42
3.2.3
KOPRODUKTION
VON
ZYTOKINEN
IN
HUMANEN
T-ZELLEN
44
3.2.3.1
ANALYSE
VON
HUMANEN
TT-AKTIVIERTEN
T-ZELLEN
44
3.2.3.2
ANALYSE
TT-SPEZIFISCHER
TH-ZELLKLONE
48
3.3
SEQUENTIELLE
PRODUKTION
VON
IL-2,
IFN-Y
UND
IL-10
IN
INDIVIDUELLEN
SEB
AKTIVIERTEN
TH-ZELLEN
(I)
50
3.3.1
IN
DER
PRIMAEREN
SEB-KULTUR
KOPRODUZIEREN
NUR
WENIGE
ZELLEN
IL-2,
IFN-Y
UND
IL-10
ZU
EINEM
ZEITPUNKT
50
3.4
METHODEN
ZUR
ANALYSE
UND
SORTIERUNG
LEBENDER
ZELLEN
ANHAND
IHRER
ZYTOKIN
EXPRESSION
5
2
3.4.1
DIE
TECHNOLOGIE
DER
ZELLULAEREN
AFFINITAETSMATRIX:
ANALYSE
UND
SORTIERUNG
LEBENDER
ZELLEN
ANHAND
SEZEMIERTER
ZYTOKINE
5
2
3.4.2
SPEZIFISCHE
EXPRESSION
VON
IFN-Y
AUF
DER
ZELLOBERFLAECHE
VON
IFN-Y
PRODUZIERENDEN
T-ZELLEN.
57
3.5
SEQUENTIELLE
PRODUKTION
VON
IL-2,
IFN-Y
UND
IL-10
IN
INDIVIDUELLEN
SEB
AKTIVIERTEN
TH-ZELLEN
(II)
60
3.5.1
ISOLIERUNG
IL-2-SEZERNIERENDER
TH-ZELLEN
60
3.5.2
SEQUENTIELLE
PRODUKTION
VON
IFN-Y
UND
IL-10
DURCH
INDIVIDUELLE
IL-2
PRODUZIERENDE
ZELLEN
62
3.5.3
ISOLIERUNG
IFN-Y-EXPRIMIERENDER
TH-ZELLEN
64
3.5.4
SEQUENTIELLE
PRODUKTION
VON
IL-10
DURCH
INDIVIDUELLE
IFN-Y
EXPRIMIERENDE
ZELLEN
6
4
3.6
PRAEGUNG
VON
INDIVIDUELLEN
TH-ZELLEN
DER
MAUS
AUF
DIE
PRODUKTION
VON
IFN-Y
GEGENUEBER
IL-4
UND
IL-10
65
3.6.1
POLARISIERUNG
VON
NAIVEN
TH-ZELLEN
IN
EINE
TH1-AEHNLICHE
ZELLPOPULATION
65
3.6.2
ISOLIERUNG
LEBENDER
IFN-Y-EXPRIMIERENDER
TH1-ZELLEN
66
3.6.3
KONVERSION
ODER
PERSISTENZ
?
67
3.6.3.1
EXPANSION
DER
OVA-TCR+TH-ZELLEN
NACH
DER
SORTIERUNG
67
3.6.3.2
PERSISTENZ
EINES
TH1-AEHNLICHEN
PHAENOTYPS
NACH
NEUTRALER
BZW.
KONSERVIERENDER
RESTIMULATION
6
8
3.6.3.3
INDUKTION
VON
IL-4
UND
IL-10
IN
IFN-Y-EXPRIMIERENDEN
TH1-ZELLEN
71
4
DISKUSSION
4.1
HETEROGENITAET
DER
KOEXPRESSION
VON
IL-2,
IL-4,
IL-5,
IL-10
UND
IFN-Y
IN
INDIVIDUELLEN
TH-ZELLEN
-
MEHR
ALS
TH1
UND
TH2
I
7
5
4.1.1
DAS
TH1/TH2-KONZEPT
75
4.1.2
ANALYSE
DER
ZYTOKINEXPRESSION
DURCH
INTRAZELLULAERE
IMMUNFLUORESZENZ
75
4.1.3
ES
GIBT
MEHR
ALS
TH1
UND
TH2
I
76
4.1.4
HETEROGENITAET
DER
ZYTOKINEXPRESSION
IN
KLONIERTEN
TH-ZELLPOPULATIONEN
78
4.2
INDIVIDUELLE
SEB-AKTIVIERTE
TH-ZELLEN
KONTROLLIEREN
DURCH
DIE
SEQUENTIELLE
PRODUKTION
VON
IL-2,
IFN-Y
UND
IL-10
IHRE
EIGENE
FUNKTION
80
4.2.1
DAS
BAKTERIELLE
SUPERANTIGEN
SEB
80
4.2.2
SEB
INDUZIERT
DIE
EXPRESSION
VON
IL-10
IN
EINER
TH1-AEHNLICHEN
IMMUNANTWORT
8
0
4.2.3
SEQUENTIELLE
PRODUKTION
VON
IL-2,
IFN-Y
UND
IL-10
NACH
SEB-STLMULATION
81
4.2.4
KOEXPRESSION
VON
IL-2,
IFN
Y
UND
IL-10
IN
INDIVIDUELLEN
SEB
AKTIVIERTEN
TH-ZELLEN
8
2
4.3
DIE
TECHNOLOGIE
DER
ZELLULAEREN
AFFINITAETSMATRIX
8
4
4.4
SPEZIFISCHE
EXPRESSION
VON
ZELLOBERFLAECHEN-ASSOZILERTEM
IFN-Y
AUF
IFN-Y
EXPRIMIERENDEN
T-ZELLEN
84
4.5
PRAEGUNG
VON
INDIVIDUELLEN
TH-ZELLEN
DER
MAUS
AUF
DIE
PRODUKTION
VON
IFN-Y
GEGENUEBER
IL-4
UND
IL-10
86
4.5.1
IST
EINE
KONVERSION
VON
TH1-ZELLEN
IN
TH2-ZELLEN
MOEGLICH
?
86
4.5.2
IL-4
KANN
IN
INDIVIDUELLEN
IFN-Y-EXPRIMIERENDEN
TH1
-ZELLEN
DIE
EXPRESSION
VON
IL-4
UND
IL-10
INDUZIEREN
86
4.5.3
KONVERSION
UND
PERSISTENZ
87
4.5.4
POTENTIELLE
MECHANISMEN
DER
PRAEGUNG
VON
TH
1
-ZELLEN
88
5
ZUSAMMENFASSUNG
91
6
LITERATURVERZEICHNIS
92 |
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