Abhängigkeit der Genexpression in juxtaglomerulären Zellen vom Stimulationsgrad des Renin-Angiotensin-Systems:
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
A.
EINLEITUNG
1
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
7
1.
MATERIAL
7
1.1.
GERAETE
7
1.2.
VERBRAUCHSMATERIAL
8
1.3.
CHEMIKALIEN
9
1.4.
RADIOCHEMIKALIEN
12
1.5.
ENZYME
UND
BIOCHEMIKALIEN
12
1.5.1.
ENZYME
1.5.2.
BIOCHEMIKALIEN
INHALTSVERZEICHNIS
1.6.
PUFFER
UND
LOESUNGEN
II
14
1.6.1.
ISOOSMOTISCHER
PUFFER
1.6.2.
PUFFER
UND
LOESUNGEN
FUER
DIE
GELELEKTROPHORESE
1.6.3.
ENZYMPUFFER
1.6.4.
LOESUNGEN
ZUR
ISOLIERUNG
VON
TOTAL-RNA
1.6.5.
LOESUNGEN
ZUR
ELUTION
DER
DIFFERENTIELLEN
BANDEN
AUS
DEM
POLYACRYLAMIDGEL
1.6.6.
GELE
1.6.7.
BEHANDLUNG
DER
GEL
UND
THERMOSTATIERPLATTE
1.6.8.
PUFFER
ZUR
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
1.6.9.
PUFFER
ZUR
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
1.6.10.
MEDIEN
1.7.
TIERE
19
1.8.
COMPUTERPROGRAMME
19
2.
METHODEN
2.1.
METHODEN
ZUR
STIMULIERUNG
BZW.
SUPPRIMIERUNG
DES
RENIN-MRNA-SPIEGELS
20
20
2.1.1.
CLIPBEHANDLUNG
2.1.2.
NA-DIAET
2.1.3.
BEHANDLUNG
MIT
LOSARTAN
INHALTSVERZEICHNIS
_
III
2.2.
MIKRODISSEKTION
VON
GLOMERULI
MIT
AFFERENTEN
21
ARTERIOLEN
2.3.
ISOLIERUNG
VON
TOTAL-RNA
22
2.4.
BESTIMMUNG
DER
RNA-KONZENTRATION
23
2.5.
SPEZIFISCHE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
23
2.5.1.
REVERSE-TRANSKRIPTASE(RT)-REAKTION
2.5.2.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
2.5.3.
KONTROLLE
DER
PCR
2.6.
DIFFERENTIELLE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
26
2.6.1.
REVERSE-TRANSKRIPTASE(RT)-REAKTION
2.6.2.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
2.6.3.
AUFTRENNUNG
DER
AMPLIFIZIERTEN
DNA-FRAGMENTE
IN
EINEM
POLYACRYLAMIDGEL
2.7.
ELUIERUNG
DER
DIFFERENTIELLEN
BANDEN
AUS
29
DEM
POLYACRYLAMIDGEL
2.8.
AMPLIFIZIERUNG
DER
ELUIERTEN
DNA-FRAGMENTE
30
2.9.
REINIGUNG
DER
DNA-FRAGMENTE
31
2.10.
ELUTION
DER
BANDEN
AUS
DEM
LMP-GEL
31
INHALTSVERZEICHNIS
IV
2.11.
KLONIERUNG
32
2.11.1.
LINEARISIERUNG
DES
VEKTORS
2.11.2.
CIP-BEHANDIUNG
DES
GESCHNITTENEN
VEKTORS
2.11.3.
KLENOW-BEHANDLUNG
DES
VEKTORS
2.11.4.
BLUNT
END
LIGATION
2.11.5.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
2.11.6.
TRANSFORMATION
IN
E.
COLI
2.11.7.
SELEKTION
POSITIVER
KLONE
2.11.8.
ISOLIERUNG
DER
PLASMID-DNA
2.11.9.
DOPPELVERDAU
DER
PLASMID-DNA
2.12.
SEQUENZIERUNG
DER
DIFFERENTIELLEN
FRAGMENTE
36
2.12.1.
MAXI-PREP
2.12.2.
SEQUENZIERUNG
C.
ERGEBNISSE
38
1.
UNTERSUCHUNG
DER
MEDIATOREN,
DIE
BEI
DER
38
UMWANDLUNG
VON
JG-ZELLEN
EINE
ROLLE
SPIELEN
1.1.
ISOLIERUNG
VON
GLOMERULI
MIT
AFFERENTEN
39
ARTERIOLEN
INHALTSVERZEICHNIS
V
1.2.
BESTIMMUNG
DER
GENEXPRESSION
VON
RENIN
39
IN
GLOMERULI
MIT
AFFERENTEN
ARTERIOLEN
DURCH
RT-PCR
1.3.
DIFFERENTIELLE
PCR
40
1.3.1.
AUSWAHL
DER
BEDINGUNGEN
FUER
DIE
DIFFERENTIELLE
PCR
1.3.2.
DIFFERENTIELLE
PCR
MIT
TOTAL-RNA
AUS
GLOMERULI
MIT
AFFERENTEN
ARTERIOLEN
1.4.
DIFFERENTIELLE
DNA-FRAGMENTE
42
1.5.
ELUTION
DER
FRAGMENTE
UND
KALTE
PCR
43
1.6.
KLONIERUNG
44
1.7.
SEQUENZIERUNG
45
1.8.
HOMOLOGIEVERGLEICH
46
1.9.
UEBERPRUEFUNG
DES
DIFFERENTIELLEN
CHARAKTERS
46
DES
ISOLIERTEN
GENS
1.9.1.
DIE
SPEZIFISCHEN
PRIMER
1.9.2.
SPEZIFISCHE
PCR
I.9.2.I.
GESAMTNIEREN-RNA
1.9.2.2.
RNA
VON
AFFERENTEN
ARTERIOLEN
INHALTSVERZEICHNIS
VI
2.
UNTERSUCHUNG
DER
GENEXPRESSION
VON
B-NOS
48
UND
CGK
II
IN
RENIN-STIMULIERTEN
BZW.
RENIN-SUPPRIMIERTEN
NIEREN
2.1.
WIE
VERHAELT
SICH
DER
MRNA-LEVEL
VON
B-NOS
49
NIEREN
MIT
UNTERSCHIEDLICH
STARKER
RENIN
GENEXPRESSION?
2.1.1.
GESAMTNIEREN-RNA
2.1.2.
RNA
VON
AFFERENTEN
ARTERIOLEN
2.2.
BESTEHT
BEI
DER
GENEXPRESSION
VON
CGK
II
50
IN
RATTENNIEREN
EINE
BEZIEHUNG
ZU
RENIN?
2.2.1.
GESAMTNIEREN-RNA
2.2.2.
RNA
VON
AFFERENTEN
ARTERIOLEN
D.
DISKUSSION
52
E.
ZUSAMMENFASSUNG
56
F.
LITERATURVERZEICHNIS
57 |
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