Die Biogenese mitochondrial kodierter Proteine: funktionelle Charakterisierung der Sortierung, Faltung und Assemblierung
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
3
PROTEINTRANSLOKATION
IN
BAKTERIEN
.
3
PROTEINTRANSLOKATION
IN
EUKARYOTEN
.
6
PROTEINTRANSLOKATION
VOM
ZYTOSOL
INS
ENDOPLASMATISCHE
RETIKULUM
.
6
DIE
ENTSTEHUNG
VON
MITOCHONDRIEN
UND
CHLOROPLASTEN
.
7
PROTEINTRANSLOKATION
IN
CHLOROPLASTEN
.
8
PROTEINTRANSLOKATION
AUS
DEM
ZYTOSOL
IN
MITOCHONDRIEN
.
9
PROTEINSYNTHESE
UND
SORTIERUNG
MITOCHONDRIAL
KODIERTER
PROTEINE
.
12
MOLEKULARE
CHAPERONE
.
16
DIE
BEDEUTUNG
MOLEKULARER
CHAPERONE
BEI
DER
PROTEINTRANSLOKATION
.
18
DAS
MITOCHONDRIALE
CHAPERONSYSTEM
.
19
FRAGESTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
.
20
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
21
VERWENDETE
STAEMME
VON
E.
COLI
UND
S.
CEREVISIAE
(HEFE)
.
21
MOLEKURARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
22
PLASMIDREINIGUNG
.
22
AMPLIFIZIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MITTELS
.POLYMERASE-KETTENREAKTION"
.
23
KLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
24
RESTRIKTIONSVERDAU
.
24
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
.
24
AUFFUELLEN
VON
5'-UEBERSTEHENDEN
ENDEN
.
25
LIGATION
.
25
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.
COLI-BAKTERIEN
.
25
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI-BAKTERIEN
MITTELS
ELEKTROPORATION
.
26
ELEKTROPHORESE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
26
ELEKTROELUTION
VON
DNA
MITTELS
SALZFALLE
.
27
SYNTHESE
MITOCHONDRIALER
VORLAEUFERPROTEINE
IN
VITRO
.
27
TRANSKRIPTION
.
27
TRANSLATION
IN
RETIKULOZYTENLYSAT
.
28
KONSTRUKTION
DER
EXPRESSIONSPLASMIDE
FUER
DIE
COXII-FUSIONSPROTEINE
.
28
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
30
ANZUCHT
VON
S.
CEREVISIAE
.
30
ISOLIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
AUS
S.
CEREVISIAE
.
31
"
S-MARKIERUNG
MITOCHONDRIALER
TRANSLATIONSPRODUKTE
IN
VIVO
.
31
ALKALISCHER
ZELLAUFSCHLUSS
.
32
IMPORT
VON
PROTEINEN
AUS
RETIKULOZYTENLYSAT
.
32
NACHBEHANDLUNG
VON
MITOCHONDRIEN
MIT
PROTEASE
.
33
MARKIERUNG
MITOCHONDRIALER
TRANSLATIONSPRODUKTE
IN
ISOLIERTEN
MITOCHONDRIEN
.
33
HERSTELLUNG
VON
MITOPLASTEN
DURCH
OSMOTISCHEN
SCHOCK
.
34
FRAKTIONIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
DURCH
ULTRASCHALL
.
34
FRAKTIONIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
DURCH
ALKALISCHE
BEHANDLUNG
.
35
ABTRENNUNG
AGGREGIERTER
MITOCHONDRIENPROTEINE
.
35
ISOLIERUNG
MITOCHONDRIALER
RIBOSOMEN
.
35
EXTRAKTION
DES
CYTOCHROM
C-OXIDASE-KOMPLEXES
.
36
FAELLUNG
VON
PROTEINEN
MIT
TCA
.
36
GELELEKTROPHORESE
UND
TRANSFER
AUF
NITROZELLULOSE-MEMBRANEN
VON
PROTEINEN
.
37
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
37
NATIVE
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
NACH
SCHAEGGER
UND
JAGOW
.
37
INHALTSVERZEICHNIS
2
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
GELEN
.
39
KOLLOIDALE
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
GELEN
.
39
SILBERFAERBUNG
VON
GELEN
.
39
AUTORADIOGRAPHIE,
FLUOROGRAPHIE
UND
DENSITOMETRIE
.
40
TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
NITROZELLULOSEMEMBRANEN
.
40
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
41
HERSTELLUNG
SPEZIFISCHER
ANTISEREN
IN
KANINCHEN
.
41
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
AUF
NITROZELLULOSEMEMBRANEN
("WESTERN
BLOT*)
.
41
IMMUNFAELLUNG
UNTER
STRINGENTEN
BEDINGUNGEN
.
42
KOIMMUNFAEILUNG
.
42
CHEMIKALIEN
UND
GERAETE
.
43
CHEMIKALIEN
.
43
GERAETE
.
44
3.
ERGEBNISSE
.
45
MARKIERUNG
MITOCHONDRIALER
TRANSLATIONSPRODUKTE
MIT
35S
.
45
DIE
BEDEUTUNG
VON
HITZESCHOCKPROTEINEN
FUER
DIE
MITOCHONDRIALE
PROTEINSYNTHESE
.
47
DIE
BEDEUTUNG
VON
MT-HSP70
FUER
MITOCHONDRIAL
KODIERTE
PROTEINE
.
47
IN
ABWESENHEIT
VON
FUNKTIONELLEM
MT-HSP70
IST
DIE
PROTEINSYNTHESE
DEUTLICH
BEEINTRAECHTIGT
.
48
MT-HSP70
BINDET
AN
NEUSYNTHETISIERTE
MITOCHONDRIALE
TRANSLATIONSPRODUKTE
.
51
MT-HSP70
ERHAELT
VAR1
IN
EINEM
ASSEMBLIERUNGSFAEHIGEN
ZUSTAND
.
53
MT-HSP70
SCHUETZT
VAR1
VOR
AGGREGATION
BEI
ERHOEHTER
TEMPERATUR
.
57
MT-HSP70
SPIEAE
EINE
WICHTIGE
ROLLE
FUER
DIE
STABILITAET
NEUSYNTHETISIERTER
UNTEREINHEITEN
DER
ATPASE
.
60
MT-HSP70
ERMOEGLICHT
DIE
BILDUNG
DES
54
KDA-OLIGOMERS
DER
ATPASE
.
63
DIE
ANREICHERUNG
KERNKODIERTER
PROTEINE
FUEHRT
ZU
EINER
EFFIZIENTEREN
BILDUNG
DER
48
UND
54
KDA
OLIGOMERE
.
65
NICHTASSEMBLIERTE
ATPASESS-UNTEREINHEIT
IST
INSTABIL
UND
WIRD
SCHNELL
ABGEBAUT
.
66
DIE
BEDEUTUNG
VON
MT-HSP60
FUER
DIE
ASSEMBLIERUNG
VON
VAR1
.
68
DIE
BEDEUTUNG
DES
KOCHAPERONS
MDJLP
FUER
DIE
ASSEMBLIERUNG
VON
VAR1
.
72
ZUR
TOPOGENESE
DER
UNTEREINHEFT
II
DER
CYTOCHROM
C-OXIDASE
.
73
FUER
DIE
SORTIERUNG
VON
COXII
UEBER
DIE
INNENMEMBRAN
WIRD
EIN
MEMBRANPOTENTIAL
BENOETIGT
.
74
COXII
KANN
IN
MITOPLASTEN
KORREKT
SORTIERT
WERDEN,
ERREICHT
ANSCHLIESSEND
ABER
KEINE
PROTEASERESISTENTE
KONFORMATION
.
79
DIE
SORTIERUNG
VON
COXII
IN
DEN
INTERMEMBRANRAUM
IST
UNABHAENGIG
VON
EINER
ASSEMBLIERUNG
IN
DEN
CYTOCHROM
C-OXIDASE-KOMPLEX
.
79
IMPORT
UND
SORTIERUNG
VON
PSU9(1-66)PRECOXII(1-74)-DHFR
.
83
IN
DIE
INNENMEMBRAN
INSERIERTES
COXII(1-74)-DHFR
WIRD
DURCH
PROTEASEN
DER
YTA-FAMILIE
ABGEBAUT
.
86
IMPORT
UND
EXPORTSCHRITT
SIND
ZWEI
UNABHAENGIGE
EREIGNISSE
.
88
IMPORT
UND
SORTIERUNG
VON
PSU9(1-66)PRECOXII(1-41)-DHFR
.
92
4.
DISKUSSION
.
97
DIE
BEDEUTUNG
VON
MT-HSP70
UND
MDJLP
FUER
DIE
MITOCHONDRIALE
PROTEINSYNTHESE
.
97
SORTIERUNG
UND
TOPOGENESE
MITOCHONDRIALER
TRANSLATIONSPRODUKTE
.
106
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.115
6.
LITERATUR
.
117
ABKUERZUNGEN
.132 |
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| spelling | Herrmann, Johannes Verfasser aut Die Biogenese mitochondrial kodierter Proteine funktionelle Charakterisierung der Sortierung, Faltung und Assemblierung von Johannes Herrmann 1996 136 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 1996 Saccharomyces cerevisiae - Chondrom <Genetik> - Membranproteine - Proteintransport Saccharomyces cerevisiae - Mitochondrium - Proteinbiosynthese - Polypeptidketten bindende Proteine Mitochondrium (DE-588)4124939-2 gnd rswk-swf Proteintransport (DE-588)4273577-4 gnd rswk-swf Proteinbiosynthese (DE-588)4175987-4 gnd rswk-swf Polypeptidketten bindende Proteine (DE-588)4311255-9 gnd rswk-swf Chondrom Genetik (DE-588)4374630-5 gnd rswk-swf Saccharomyces cerevisiae (DE-588)4178812-6 gnd rswk-swf Membranproteine (DE-588)4130026-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Saccharomyces cerevisiae (DE-588)4178812-6 s Mitochondrium (DE-588)4124939-2 s Proteinbiosynthese (DE-588)4175987-4 s Polypeptidketten bindende Proteine (DE-588)4311255-9 s DE-604 Chondrom Genetik (DE-588)4374630-5 s Membranproteine (DE-588)4130026-9 s Proteintransport (DE-588)4273577-4 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007521266&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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