Palmitoylierung humaner Endothelin-Rezeptoren: ein Modell für die modulare Regulation intrazellulärer Signaltransduktion
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INHALTSVERZEICHNIS
A
ZUSAMMENFASSUNG/SUMMARY
1
B
EINLEITUNG
3
B.2
AUFGABENSTELLUNG
10
B.1
REZEPTOREN
3
B.L
1
G-PROTEIN
GEKOPPELTE
REZEPTOREN
3
B.L.
1.1
STRUKTUR
3
B.L.
1.2
SIGNALTRANSDUKTION
4
B.L.
2
ENDOTHELIN-REZEPTOREN
4
B.L
2
1
VORKOMMEN
4
B.
1.2.2
SIGNALTRANSDUKTION
5
B.1.2
3
POSTTRANSLATIONALE
MODIFIKATIONEN
9
C
MATERIAL
UND
METHODEN
11
C.L
MATERIALIEN
11
C.1.1
GERAETE
11
C.1.2
SUBSTANZEN
12
C.2
METHODEN
13
C.2.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
13
C.2.1.1
REINIGUNG
VON
DNA
13
C
2.1.1
1
PLASMID-DNA-PRAPARATION
AUS
MAXIKULTUREN
13
C.2.1.
1.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
MINIKULTUREN
14
C2
1.1
3
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
15
C2
1
1.3.1
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
15
C2
1.1.3.2
ISOLIERUNG
VON
DNA
MITTELS
ELEKTROELUTION
15
C.2.1.1
3.3
ISOLIERUNG
VON
DNA
MITTELS
GLASMILCH
16
C.2.1.
1.4
PHENOLISIERUNG
VON
DNA
16
C.2
1
1
5
PHOTOMETRISCHE
MENGEN
UND
REINHEITSBESTIMMUNG
17
C.2.
1.2
AMPLIFIZIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
DURCH
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
17
C.2.
1.3
ORTSGERICHTETE
MUTAGENESE
17
C.2
1
4
RESTRIKTIONSANALYSE
18
C.2.1.
5
SEQUENZIERUNG
18
C2
1
5
1
SEQUENZIERREAKTION
18
C.2
1.5
2
VERTIKAL-ELEKTROPHORESE
19
C.2
1
6
KLONIERUNG
IN
VEKTOREN
19
C2
1
6
1
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
VEKTOR-DNA
19
C
2
1
6.2
HERSTELLUNG
VON
KOMPETENTEN
BAKTERIEN
19
C
2.1
6
3
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIEN
20
C
2.1.7
HYBRIDISIERUNG
20
C.2.
1.7.1
[
32
P]-MARKIERUNG
VON
DNA
DURCH
'RANDOM
PRIMING'
20
C
2.1.72
HYBRIDISIERUNG
VON
BAKTERIENKOLONIEN
21
C.2.2
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
22
C22
1
BESTIMMUNG
MITTELS
BICINCHONINIC
ACID-PROTEIN'-ASSAY
22
C222
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
22
C223
WESTERN
BLOTTING
23
C224
AMIDOSCHWARZFARBUNG
VON
PROTEINEN
AUF
PVDF-MEMBRANEN
23
C225
COOMASSIE
BRILLIANT
BLUE-FARBUNG
VON
PROTEINEN
IN
POLYACRYLAMIDGELEN
23
C2
2.6
FLUORO-UND
AUTORADIOGRAPHIE
VON
POLYACRYLAMIDGELEN
23
C.2.3
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
24
C23
1
IMMUNOPRINT
24
C232
IMMUNPRAZIPITATION
24
C.2.4
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
25
C24
1
ZELLKULTUR
25
C24
1
1
INSEKTENZELLKULTUR
25
C24
1
1
L
KULTIVIERUNG
VON
INSEKTENZELLEN
25
C24
1
12
EINFRIEREN,
LAGERUNG
UND
AUFTAUEN
VON
INSEKTENZELLEN
25
C24
1
13
HERSTELLUNG
VON
REKOMBINANTEN
BACULOVIREN
26
C.2
4
1
1
4
LAGERUNG,
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
REKOMBINANTEN
BACULOVIREN
26
C24
1
1.5
INFEKTION
VON
INSEKTENZELLEN
MIT
REKOBINANTEN
BACULOVIREN
26
C24
1
2
MAMMALIAZELLKULTUR
27
C24
121
KULTIVIERUNG
VON
MAMMALIAZELLINIEN
27
C
2.4
1
22
EINFRIEREN,
LAGERUNG
UND
AUFTAUEN
VON
MAMALIAZELLINIEN
27
C2.4
2
TRANSFEKTION
VON
DNA
IN
MAMMALIAZELLINIEN
28
C.24
2
1
C
ALCIUMPHOSPHAT-T
RANSFEKTION
28
C242.2
LIPOFEKTION
29
C
2.4
2
3
BESTIMMUNG
DER
TRANSFEKTIONSAUSBEUTE
MITTELS
/3-GALAKTOSIDASE-ASSAY
29
C
2.4
2.4
HERSTELLUNG
VON
KLONALEN
ZELLINIEN
30
C2424
1
SELEKTION
MIT
DOMINANTEN
MARKERGEN
30
C
2
4
2
4.2
SELEKTION
DURCH
KOMPLEMENTATION
30
C.2.5
SONSTIGE
METHODEN
30
C25
1
METABOLISCHE
MARKIERUNG
DES
REZEPTORPROTEINS
IN
INSEKTENZEILEN
30
C25
1
1
METABOLISCHE
MARKIERUNG
MIT
[
'
HJPALMITINSAURE
30
C25
1
2
METABOLISCHE
MARKIERUNG
MIT
[
3
'
S]CYSTEIN
UND
[
3
'
S]METHIONIN
31
C252
BINDUNG
UND
VERDRAENGUNG
VON
[
L2!
I]ENDOTHELIN-L
31
C
2
5
2
1
BESTIMMUNG
AN
ADHARENTEN
ZELLEN
31
C
2
5
2
2
BESTIMMUNG
AN
SUSPENSIONSZELLEN
31
C253
INOSITOLPHOSPHAT-HYDROLYSE
32
C2
5
3
1
MESSUNG
VON
GESAMTINOSITOLPHOSPHATEN
32
C
2
5
3
2
MESSUNG
VON
INOSITOLPHOSPHATFRAKTIONEN
32
C
2.5
4
CYTOPLASMATISCHES
CALCIUM
33
C2
5
4
1
BESTIMMUNG
AN
ADHARENTEN
ZELLEN
33
C
2
5
4
2
BESTIMMUNG
AN
SUSPENSIONSZELLEN
33
C255
CAMP-BESTIMMUNG
34
C256
ARACHIDONSAUREFREI
SETZUNG
34
C257
['HJTHYMIDIN-EINBAU
34
C
2
5
8
INTERNALISIERUNG
35
D
ERGEBNISSE
36
D.L
HERSTELLUNG
VON
MUTAGENEN
REZEPTOR-CDNAS
37
D.2
REKOMBINANTE
EXPRESSION
DER
ENDOTHELIN-REZEPTOREN
38
D.2.
1
BACULOVIRUS-EXPRESSIONSSYSTEM
SF9-ZELLEN
38
D.2.
1.1
KONSTRUKTION
UND
ISOLIERUNG
REKOMBINANTER
BACULOVIREN
38
D
2.1
2
NACHWEIS
DER
REKOMBINANTEN
ENDOTHELIN-REZEPTORPROTEINE
IN
SF9-ZELLEN
39
D.2.
1.2.1
EXPRESSIONSNACHWEIS
DER
REKOMBINANTEN
ENDOTHELIN-REZEPTOR-TYPEN
IM
IMMNUNO
39
PRINT
D
2.1.2.2
BINDUNGSNACHWEIS
DER
REKOMBINANTEN
ENDOTHELIN-REZEPTOR-TYPEN
41
D2.2
TRANSIENTES
EXPRESSIONSSYSTEM:
COS7-ZELLEN
41
D
2.2.1
KONSTRUKTION
DER
EXPRESSIONSVEKTORENFUR
DIE
TRANSIENTE
EXPRESSION
42
D.2.2.2
TRANSIENTE
EXPRESSION
DER
ENDOTHELIN-REZEPOR-TYPEN
IN
COS7-ZELLEN
43
D
2.3
STABILES
TRANSFEKTIONSSYSTEM:
CHO-ZELLEN
43
D.2
3.1
SELEKTION
MIT
DOMINANTEM
MARKERGEN
44
D.2.3.2
SELEKTION
DURCH
KOMPLEMENTATION
45
D.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
ENDOTHELIN-REZEPTOR-TYPEN
46
D3.I
POSTTRANSLATIONALE
MODIFIKATION:
PALMITOYLIERUNG
46
D.3
2
FUNKTIONALER
VERGLEICH
DER
ENDOTHELIN-REZEPTOR-TYPEN
UND
DEREN
MUTANTEN
48
D.3.2.1
BINDUNG
48
D.3.2.2
UEBER
PHOSPHOLIPASE
C0-VERMITTELTE
SIGNALTRANSDUKTION
49
D
3.2.2.1
INOSITOLPHOSPHATFREISETZUNG
50
D.3
2.2.2
CYTOPLASMATISCHE
CALCIUMFREISETZUNG
51
D.3.2.3
UEBER
ADENYLATZYKLASE-VERMITTELTE
SIGNALTRANSDUKTION
54
D.3.2.4
ARACHIDONSAEUREFREISETZUNG
56
D.3.2.5
ENDOTHELIN
1
-VERMITTELTE
WIRKUNGEN
AUF
DIE
MITOGENESE
57
D.3.2.5.1
PROMITOGENE
WIRKUNG
57
D.3
2
5
2
ANTIMITOGENE
WIRKUNG
58
D
3.2.6
INTERNALISIERUNG
58
D.4
LOKALISATION
DER
FUER
DEN
GAQ-SIGNALTRANSDUKTIONSWEG
VERANTWORTLICHEN
60
CYSTEIN-RESTE
D
4
1
HERSTELLUNG
KLONIERUNG
UND
REKOMBINANTE
EXPRESSION
DER
ETAC2-MUTANTE
IN
60
SF9-ZELLEN
D4
2
UNTERSUCHUNG
DER
FUNKTIONELLEN
GAQ-KOPPLUNG
61
E
DISKUSSION
UND
AUSBLICK
62
E.L
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DES
PALMITOYLIERUNGSBEREICHES
DER
62
ENDOTHELIN-REZEPTOR-TYPEN
E.
1.1
BEDEUTUNG
DER
PALMITOYLIERUNG
FUER
DIE
STRUKTURAUSBILDUNG
62
E
1
2
EINFLUSS
DER
PALMITOYLIERUNG
AUF
DIE
SIGNALTRANSDUKTION
62
E.
1.3
BEDEUTUNG
DER
PALMITOYLIERUNG
AUF
DIE
REZEPTORDESENSITISIERUNG
64
E.2
SIGNALTRANSDUKTION
DES
ETA-REZEPTORS
6S
E
2
1
ARACHIDONSAEUREFREISETZUNG
65
E
2.2
MITOGENE
WIRKUNGEN
65
E
2
2.1
PROMITOGENE
WIRKUNG
65
E
2
2.2
ANTIMITOGENE
WIRKUNG
66
E.3
AUSBLICK
67
F
LITERATURVERZEICHNIS
69
G
ANHANG
76
G.
1
NUKLEOTIDSEQUENZEN
DER
VERWENDETEN
PRIMER
76
G2.
KLONIERUNGEN
77
G.2.
1
ETA-REZEPTOR-CDNA
77
G.2.2
ETA1215A-REZEPTOR-CDNA
78
G.2.3
ETA1215S-REZEPTOR-CDNA
79
G
2.4
ETAC2-REZEPTOR-CDNA
80
G.2.5
ETB-REZEPTOR-CDNA
81
G.2.6
ETB1215S-REZEPTOR-CDNA
82
G.3
AMINOSAEURESEQUENZEN
84
G.3
1
HUMANE
ENDOTHELIN-REZEPTOR-TYPEN
84
G.3.2
PEPTIDE
86
H
ABKUERZUNGEN
87
I
LEBENSLAUF
88
J
DANKSAGUNG
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| spelling | Horstmeyer, Angelika Sophie Verfasser aut Palmitoylierung humaner Endothelin-Rezeptoren ein Modell für die modulare Regulation intrazellulärer Signaltransduktion Angelika Sophie Horstmeyer 1996 IV, 89 S. graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Gießen, Univ., Diss., 1996 Endothelin (DE-588)4255702-1 gnd rswk-swf Palmitoylierung (DE-588)4402134-3 gnd rswk-swf Rezeptor (DE-588)4049722-7 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Endothelin (DE-588)4255702-1 s Rezeptor (DE-588)4049722-7 s Palmitoylierung (DE-588)4402134-3 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007510650&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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