Transkriptionsregulation und Chromatinanordnung in der bidirektionalen Kontrollregion der Hefegene GCY1 und RIO1:
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1996
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M
-
YYYY
.
P
R
R
1
.
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
I.
EINLEITUNG
.
1
1.
PROMOTORELEMENTE
IN
HEFE
.
1
1.1.
BASALE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
UND
RNA-POLYMERASE
II
.
2
GENERELLE
REGULATIONSFAKTOREN
.
4
SPEZIFISCHE
GENREGULATOREN
.
5
CHROMATIN
.
8
DIE
INTERGENISCHE
REGION
DER
GENE
GCY1
UND
RIO1
.
11
AUFGABENSTELLUNG.
12
MATERIAL
.
13
FEINCHEMIKALIEN
UND
BEZUGSQUELLEN
.
13
RADIOCHEMIKALIEN
.
15
ENZYME
.
15
MEDIEN
.
15
E.
COLI
MEDIUM
.
15
HEFEMEDIEN
.
16
PUFFER
.
16
HEFESTAEMME
.
16
E.
CO/ASTAEMME
.
17
HELFERPHAGE
.
17
PLASMIDE
.
17
OLIGONUKLEOTIDE
.
17
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
IN
VITRO
MUTAGENESEN
.
17
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
PCR
.
18
SEQUENZIERPRIMER
.
18
METHODEN
.
19
ARBEITEN
MIT
E.
COLI
.
19
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.
CO/AZELLEN
.
19
TRANSFORMATION
VON
E
COLI.
.
19
PROTEINPRAEPARATION
AUS
E
COLI
.
19
HERSTELLUNG
VON
DAUERKULTUREN
.
20
ARBEITEN
MIT
HEFE
.
20
HEFETRANSFORMATION
.
20
.
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
HEFEZELLEN
.
20
.
EINZELKOLONIEMETHODE
.
20
.
CO-LOSS/CO-RETENTION-TEST
.
21
HERSTELLUNG
VON
DAUERKULTUREN
.
21
HERSTELLUNG
VON
PROTEINEXTRAKTEN
FUER
ENZYMTESTS
.
21
KERNPROTEINEXTRAKTION
AUS
HEFEZELLEN
.
22
.
PRAEPARATION
EINER
GROBEN
KERNFRAKTION
.
22
.
PROTEINEXTRAKTION
AUS
DER
GROBEN
KERNFRAKTION
.
23
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.
23
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.
23
QUANTITATIVER
SS-GALAKTOSIDASE-AKTIVITAETSTEST
.
23
ELEKTROPHORESE-METHODEN
.
24
4.1.
DNA-ELEKTROPHORESE
.
24
4.1.1.
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
24
4.1.2.
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
24
4.1.3.
ELEKTROELUTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
25
4.2.
PROTEINGELELEKTROPHORESE
.
25
5.
ARBEITEN
MIT
DNA
.
25
5.1.
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.
COLI
.
25
5.2.
ISOLIERUNG
VON
SHUTTLE-PLASMID-DNA
AUS
HEFE
.
26
5.3.
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
HEFE
.
26
5.4.
RESTRIKTIONEN
.
26
5.5.
MODIFIKATION
LINEARER
DNA-MOLEKUELE
.
27
5.5.1.
ABBAU
5'-UEBERHAENGENDER
ENDEN
.
27
5.5.2.
AUFFUELLREAKTION
VON
5'-UEBERHAENGENDEN
ENDEN
.
27
5.5.3.
PHOSPHATASE-BEHANDLUNG
LINEARAR
DNA-MOLEKUELE
.
27
5.6.
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
27
5.7.
IN
VITRO
MUTAGENESE
.
28
5.7.1.
PRAEPARATION
VON
EINZELSTRANG-DNA
AUS
E.
COLI
.
28
5.7.2.
PHOSPHORYLIERUNG
DER
OLIGONUKLEOTIDE
.
28
5.7.3.
HYBRIDISIERUNG
DER
OLIGONUKLEOTIDE
AN
SSDNA
.
28
5.7.4.
SYNTHESE
DES
ZWEITEN
STRANGES
.
29
5.8.
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
.
29
5.8.1.
PCR-ABLAUF
.
29
5.8.2.
BEHANDLUNG
DER
PCR-PRODUKTE
MIT
PROTEINASE
K
.
29
5.8.3.
TAILINGREAKTION
VON
PCR-AMPLIFIKATEN
.
30
5.9.
SEQUENZANALYSE
VON
DNA
.
30
5.9.1.
SEQUENZREAKTION
.
30
5.9.2.
HERSTELLUNG
DES
SEQUENZGELS
UND
GELLAUF
.
30
5.10.
SOUTHERN
BLOT
UND
HYBRIDISIERUNG
.
31
5.11.
ALKALISCHER
VAKUUMBLOT
.
31
6.
ARBEITEN
MIT
RNA
.
31
6.1.
RNA-EXTRAKTION
AUS
HEFE
.
31
6.2.
BESTIMMUNG
DER
5'-ENDEN
VON
TRANSKRIPTEN
.
32
7.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
33
7.1.
ABSCHAETZUNG
DER
DNA-KONZENTRATION
IM
GEL
.
33
7.2.
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
.
33
8.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
33
8.1.
ENDMARKIERUNG
.
33
8.1.1.
AUFFUELLEN
5-UEBERHAENGENDER
ENDEN
MIT
A-[
32
P]DNTP.
33
8.1.2.
MARKIERUNG
DURCH
TAQ-DNA-POLYMERASE
.
33
8.1.3.
MARKIERUNG
MIT
Y-[
32
P]ATP
.
34
8.2.
RANDOM
PRIMED
DNA
LABELING
.
34
9.
GELRETARDATIONSASSAY
.
34
10.
IN
VIVO
DNASEL
FOOTPRINTING
.
35
10.1.
SPHAEROPLASTIERUNG
DER
HEFEZELLEN
.
35
10.2.
SPALTUNG
VON
CHROMATIN
MIT
DNASEL
.
36
IV.
ERGEBNISSE
.
37
1.
ANALYSE
DES
BASALEN
PROMOTORS
VON
GCY1
.
37
1.1.
MUTATION
DER
TATA-BOX
VON
GCY1
.
37
1.2.
BESTIMMUNG
DER
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTE
VON
GCY1
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
KOHLENSTOFFQUELLE
.
40
2.
IN
VITRO
MUTAGENESE
DER
ENHANCERREGIONEN
VON
GCY1
.42
2.1.
ANALYSE
DER
UAS
GAL
IM
PROMOTOR
VON
GCY1
.
42
2.2.
VERSUCHE
ZUR
WIRKUNG
VON
REBLP
IM
PROMOTOR
VON
GCY1
.
44
2.2.1.
EINFUEHRUNG
EINER
PROMOTORPROXIMALEN
REBLP-BINDESTELLE
NACH
DELETION
DER
NATUERLICHEN
REBLP-ZIELSEQUENZ
.
47
2.2.2.
EINFUEHRUNG
EINER
REBLP-BINDESTELLE
IN
DAS
KONSTRUKT
PGCY-UAS
MU
T
.
49
2.2.3.
SYNERGISTISCHE
WIRKUNG
VON
UAS
GAL
UND
REBLP
AUF
DIE
BASALEXPRESSION
VON
GCY1
.
51
2.2.4.
EINFUEHRUNG
EINER
ABFLP
BZW.
RAPLP-BINDESTELLE
.
52
3.
UNTERSUCHUNG
DER
REBLP-BINDESTELLE
DURCH
GELRETARDATION
.
54
3.1.
NACHWEIS
DER
SPEZIFISCHEN
BINDUNG
VON
REBLP
AN
DEN
GCYI-PROMOTOR
.
54
3.2.
BINDUNGSUNTERSUCHUNGEN
NACH
DELETION
DER
REBLP-BINDESTELLE
.
58
3.3.
SPEZIFISCHE
BINDUNG
VON
REKOMBINANTEM
REB1-PROTEIN
AUS
E.
COLI
.
60
4.
UNTERSUCHUNG
DES
DNA-BIEGUNGSVERHALTENS
VON
REBLP
.
64
5.
UNTERSUCHUNG
DES
PROMOTORS
VON
RIO1
.
75
5.1.
VERKUERZUNG
DES
5'-FLANKIERENDEN
BEREICHS
VON
RIO1
DURCH
PCR
.
75
5.2.
GELRETARDATIONSVERSUCHE
MIT
DEM
R/01-PROMOTORFRAGMENT
H2-R1
.
78
5.3.
BESTIMMUNG
DER
TRANSKRIPTIONSSTARTSTELLEN
VON
RIO1
.
79
5.4.
BESTIMMUNG
DER
INITIATIONSSTELLEN
VON
RIO1
NACH
EINFUEHRUNG
EINER
TATA-BOX
.
80
6.
ANALYSE
DER
CHROMATINSTRUKTUR
DER
INTERGENISCHEN
REGION
VON
GCY1
UND
RIO1
.
84
6.1.
UNTERSUCHUNG
DER
CHROMATINSTRUKTUR
AUSGEHEND
VOM
CODIERENDEN
BEREICH
VON
GCY1
.
85
6.2.
UNTERSUCHUNG
DER
CHROMATINSTRUKTUR
AUSGEHEND
VOM
CODIERENDEN
BEREICH
VON
RIO1
.
88
V.
DISKUSSION
.
93
1.
IDENTIFIZIERUNG
DER
TATA-BOX
ALS
EINZIGES
BASALES
PROMOTORELEMENT
VON
GCY1
.
93
2.
BEDEUTUNG
DER
UAS
GAL
FUER
DIE
EXPRESSION
VON
GCY1
.
95
3.
ANALYSE
DER
REBLP-BINDESTELLE
IM
PROMOTOR
VON
GCY1.
96
4.
UNTERSUCHUNG
DES
DNA-BIEGUNGSVERHALTENS
VON
REBLP
.
101
5.
ANALYSE
DES
RIO
7-PROMOTORS
.
103
6.
CHROMATINSTRUKTUR DER
INTERGENISCHEN
REGION
VON
GCY1
UND
RIO1
.
105
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
.
108
VII.
LITERATURVERZEICHNIS
.
111
ANHANG:
DANKSAGUNG
UND
LEBENSLAUF |
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| spelling | Angermayr, Michaela Verfasser aut Transkriptionsregulation und Chromatinanordnung in der bidirektionalen Kontrollregion der Hefegene GCY1 und RIO1 von Michaela Angermayr 1996 [6], 123 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 1996 Saccharomyces cerevisiae - Katabolitrepression - Galactose - Chromatin Galactose (DE-588)4155818-2 gnd rswk-swf Katabolitrepression (DE-588)4452070-0 gnd rswk-swf Saccharomyces cerevisiae (DE-588)4178812-6 gnd rswk-swf Chromatin (DE-588)4010152-6 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Saccharomyces cerevisiae (DE-588)4178812-6 s Katabolitrepression (DE-588)4452070-0 s Galactose (DE-588)4155818-2 s Chromatin (DE-588)4010152-6 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007503959&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
| spellingShingle | Angermayr, Michaela Transkriptionsregulation und Chromatinanordnung in der bidirektionalen Kontrollregion der Hefegene GCY1 und RIO1 Saccharomyces cerevisiae - Katabolitrepression - Galactose - Chromatin Galactose (DE-588)4155818-2 gnd Katabolitrepression (DE-588)4452070-0 gnd Saccharomyces cerevisiae (DE-588)4178812-6 gnd Chromatin (DE-588)4010152-6 gnd |
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