Isolierung und molekularbiologische Charakterisierung der Bakteriophagen von enterohämorrhagischen Escherichia coli (EHEC):
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1
MATERIAL
9
2.1.1
UNTERSUCHTE
BAKTERIENSTAEMME
9
2.1.1.1
POSITIV-UND
NEGATIVKONTROLLEN
9
2.1.1.2
EHEC-STAEMME
10
2.1.2
CHEMIKALIEN
11
2.1.3
ENZYME
UND
X-DNA
11
2.1.4
GERAETE
11
2.1.5
HYBRIDISIERUNGSZUBEHOER,
FAERBE-UND
MARKIERUNGSKITS
12
2.1.6
SONDEN
12
2.1.7
VERWENDETE
KULTURMEDIEN
13
2.1.7.1
LB-MEDIUM
ZUR
ANZUECHTUNG
VON
E.
COLI
W31
10
13
2.1.7.2
MODIFIZIERTES
LB-MEDIUM
13
2.1.8
LOESUNGEN
UND
PUFFER
14
2.1.8.1
ELEKTROPHORESE
14
2.1.8.2
DNA-TRANSFER
AUF
NYLON-MEMBRAN
14
2.1.8.3
EXTRAKTION
DER
BAKTERIOPHAGEN-DNA
15
2.1.8.4
HYBRIDISIERUNG
UND
FAERBUNG
DER
SONDEN-DNA
16
2.1.9
ELEKTROPHORESEGELE
17
2.2
METHODEN
17
2.2.1
PRAEPARATION
DER
BAKTERIOPHAGEN-DNA
17
2.2.1.1
PROTEINASE
K-SPALTUNG
19
2.2.1.2
CSCI-GRADIENT
19
2.2.2
AUSPLATTIEREN
DES
BAKTERIOPHAGENLYSATES
22
2.2.3
SPALTUNG
DER
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
22
2.2.4
GELELEKTROPHORESE
23
2.2.5
DNA-TRANSFER
VOM
AGAROSEGEL
AUF
EINE
NYLON-MEMBRAN
(SOUTHERN-BLOT)
23
2.2.6
HYBRIDISIERUNG
UND
FAERBUNG
DER
SONDEN-DNA
24
2.2.7
HERSTELLUNG
DER
X-DNA-SONDE
25
3
ERGEBNISSE
27
3.1
PLAQUEBILDUNG
BEI
EHEC
NACH
MITOMYCIN
C-BEHANDLUNG
27
3.2
OPTIMIERUNG
DER
METHODE
ZUR
ISOLIERUNG
DER
TOXIN
KONVERTIERENDEN
BAKTERIOPHAGEN
28
3.2.1
VERGLEICH
DER
AUFBEREITUNG
DER
BAKTERIOPHAGEN-DNA
UEBER
DEN
CSCI-GRADIENTEN
UND
UEBER
DIE
PROTEINASE
K-SPALTUNG
28
3.2.2
OPTIMIERUNG
DER
AUFARBEITUNG
UEBER
DEN
CSCI-GRADIENTEN
30
3.3
RESTRIKTIONSENZYMANALYSE
DER
BAKTERIOPHAGEN-DNA
31
3.3.1
RESTRIKTIONSFRAGMENTWERTE
DER
BAKTERIOPHAGEN
TCP
H19J
UND
TCP
933W
32
3.3.2
VERGLEICH
DER
RESTRIKTIONSFRAGMENTWERTE
DER
BAKTERIOPHAGEN
TCP
H19J
UND
TCP
933W
MIT
DEN
RESTRIKTIONSFRAGMENTWERTEN
VON
BAKTERIOPHAGEN
ANDERER
EHEC-STAEMME
35
3.4
HYBRIDISIERUNG
DER
BAKTERIOPHAGEN-DNA
MIT
STX1
UND
STX2
SONDEN
37
3.4.1
VERGLEICH
DER
BAKTERIOPHAGEN
TCP
H19J
UND
TCP
933W
37
3.4.2
VERGLEICH
DER
BAKTERIOPHAGEN
TCP
H19J
UND
TCP
933W
MIT
DEN
BAKTERIOPHAGEN
ANDERER
EHEC-STAEMME
41
4
DISKUSSION
44
5
ZUSAMMENFASSUNG
50
6
LITERATURVERZEICHNIS
51 |
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