Molekularbiologische Untersuchungen des Wachstumsfaktorenrezeptors FGFR-1 am unveränderten und mikroembolisierten Schweinemyokard mit Überblick über die Literatur:
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INHALTSVERZEICHNIS
KAPITEL:
SEITE:
1
EINLEITUNG
1
2
LITERATURUEBERSICHT
4
2.1
KLASSIFIZIERUNG
VON
FGF-REZEPTOREN
4
2.1.1
FGF-REZEPTORARTEN
4
2.1.2
NOMENKLATUR
VON
FGF-REZEPTOREN
4
2.1.3
IDENTIFIZIERUNG
DER
EINZELNEN
FGF-REZEPTOREN
5
2.2
AUFBAU
UND
FUNKTION
VON
FGFR-1
5
2.3
ALTERNATIVES
SPLEISSEN
7
2.4
GROESSENANGABEN
11
2.5
GEWEBEVERTEILUNG
11
2.6
FUNKTION
VON
FGF-REZEPTOREN
13
2.7
LIGANDEN
VON
FGFRRL
14
2.8
HEPARIN
BZW.
HEPARANSULFATPROTEOGLYKANE
(HSPGS)
16
2.9
SIGNALKASKADE
18
2.10
MIKROEMBOLISIERUNGSPROJEKT
21
3
EIGENE
UNTERSUCHUNGEN
23
3.1
MATERIAL
UND
METHODEN
23
3.1.1
UNTERSUCHUNGSMATERIAL
23
3.1.1.1
RATTEN
23
3.1.1.2
SCHWEINE
23
3.1.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
23
3.1.2.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
AUS
RIBONUKLEASE-REICHEM
GEWEBE
23
3.1.2.2
GEL-ELEKTROPHORESE
25
3.1.2.3
BLOT-HYBRIDISIERUNGEN
27
3.1.2.3.1
NORTHERN-BLOT
27
3.1.2.3.1.1
PRAEHYBRIDISIERUNG
28
3.1.2.3.1.2
MARKIEREN
EINER
HYBRIDISIERUNGSSONDE
29
3.1.2.3.1.3
PAPIERCHROMATOGRAPHIE
30
3.1.2.3.1.4
HYBRIDISIERUNG
31
3.1.2.3.1.5
WASCHEN
EINER
MEMBRAN
31
3.1.2.3.1.6
AUTORADIOGRAPHIE
32
3.1.2.3.1.7
DEHYBRIDISIERUNG
32
3.1.2.3.2
SOUTHEM-BLOT
32
3.1.2.3.2.1
PRAEHYBRIDISIERUNG
33
3.1.2.3.2.2
WASCHEN
DER
MEMBRAN
33
3.1.2.3.2.3
DEHYBRIDISIERUNG
34
3.1.2.4
REVERSE
TRANSKRIPTASE-POLYMERASE-KETTENREAKTION
34
3.1.2.4.1
PRINZIP
DER
RT-PCR
34
3.1.2.4.2
GEWEBE
36
3.1.2.4.3
WAHL
DER
OLIGONUKLEOTIDE
36
3.1.2.4.4
PROGRAMM
38
3.1.2.4.5
OPTIMIERUNG
DAR
REAKTIONSBEDINGUNGEN
39
3.1.2.4.6
KONTAMINATIONSPROBLEME
39
3.1.2.4.7
QUANTIFIZIERUNG
DER
AMPLIFIKA
TE
39
3.1.2.5
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
EINEM
GEL
40
3.1.2.5.1
ISOLIERUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSE-GELEN
40
3.
1.2.5.2
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
GLASMILCH
40
3.1.2.6
KLONIERUNGSTECHNIKEN
41
3.1.2.6.1
KLONIERUNG
IN
EINZELSCHRITTEN
41
3.1.2.6.1.1
RESTRIKTION
VON
VEKTOR-DNA
(PBLUESCRIPT
SK(+))
41
3.1.2.6.1.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
EINES
VEKTORS
42
3.1.2.6.1.3
POLIEREN
EINES
AMPLIFIZIERTEN
PCR-FRAGMENTES
42
3.1.2.6.1.4
KINASIEREN
EINES
PCR-FRAGMENTES
42
3.1.2.6.1.5
LIGATION
43
3.1.2.6.1.6
TRANSFORMATION
43
3.1.2.6.1.7
BLAU-WEISS-SELEKTION
44
3.1.2.6.1.8
MINIKULTUREN
45
3.
1.2.6.2
"BLUNT-END"-KLONIERUNG
MIT
PCR-SCRIPT
SK(+)-KLONIERUNGSKIT
45
3.1.2.7
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
BAKTERIEN
46
3.1.2.7.1
ALKALISCHE
LYSE
46
3.1.2.7.2
WIZARDYY
MINIPREP-KIT
VON
PROMEGA
46
3.1.2.8
RESTRIKTION
VON
PHAGEMID-DNA
47
3.2
ERGEBNISSE
48
3.2.1
NORTHERN-HYBRIDISIERUNG
48
3.2.2
RT-PCR
MIT
SOUTHERN-HYBRIDISIERUNG
56
3.2.3
KLONIERUNG
59
4
DISKUSSION
61
4.1
NORTHERN-BLOT
62
4.2
RT-PCR
UND
SOUTHERN-BLOT
63
4.3.
KLONIERUNG
64
4.4
KRITISCHE
BETRACHTUNG
DER
VEROEFFENTLICHUNGEN
UEBER
DEN
NACHWEIS
VON
FGFR-1
IM
HERZGEWEBE
65
4.4.1
FGFR-1
IN
EMBRYONALEM/FETALEM
HERZGEWEBE
65
4.4.2
FGFR-1
IN
NEONATALEM
HERZGEWEBE
66
4.4.3
FGFR-1
IN
ADULTEM
HERZGEWEBE
66
5
ZUSAMMENFASSUNG
68
SUMMARY
69
6
LITERATURVERZEICHNIS
70
7
ANHANG
80
7.1
SUBSTANZEN
80
7.2
BEZUGSQUELLEN
VON
SUBSTANZEN
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
85
7.3
GERAETE
88
7.4
ABKUERZUNGEN
88
DANKSAGUNG
91 |
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