Mutantenanalyse, evolutionäre Konservierung und Interaktionen des Su(var)3-9-Gens: ein dosisabhängiges Modifikatorgen für Positionseffekt-Variegation bei Drosophila melanogaster
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INHALTSVERZEICHNIS
1 . EINLEITUNG 1
2 . MATERIAL UND METHODEN
2.1. SU(VAR)3-9-ALLELE VON DROSOPHILA MELANOGASTER 7
2.2. AUF KONSERVIERUNG DES SU(VAR)3-9-GENS UNTERSUCHTE ORGANISMENARTEN 7
2.3. VERWENDETE BAKTERIEN* UND HEFESTAEMME 9
2.4. VEKTOREN 9
2.5. DNA-ISOLATION
2.5.1. ISOLATION GENOMISCHER DNA 10
2.5.2. ISOLATION VON PLASMID-DNA
2.5.2.1. PLASMID-MINIPRAEPARATION - 10
2.5.2.2. PLASMID-GROSSPRAEPARATION 10
2.6. PCR-METHODEN
2.6.1. PCR MIT GENOMISCHER DNA 11
2.6.2. PCR MIT DEGENERIERTEN OLIGONUKLEOTID-PRIMERN 12
2.6.3. DIREKTSEQUENZIERUNG VON PCR-FRAGMENTEN 14
2.7. DNA-KLONIERUNGSMETHODEN
2.7.1. DNA-RESTRIKTION 14
2.7.2. DNA-ELEKTROPHORESE UND-ELUTION 14
2.7.3. LIGATION 15
2.7.4. TRANSFORMATION 15
2.8. DNA-SEQUENZIERUNG
2.8.1. PLASMID-SEQUENZIERUNG 15
2.8.2. POLYACRYIAMID-GEL-ELEKTROPHORESE 16
2.9. RADIOAKTIVER NACHWEIS VON NUKLEINSAEUREN
2.9.1. TRANSFER VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSE-GELEN 16
2.9.2. DNA-MARKIERUNG MIT HILFE VON HEXANUKLEOTIDEN (RANDOM-PRIMING) 16
2.9.3. HYBRIDISIERUNG VON DNA UND RNA 16
2.10. ISOLATION VON REKOMBINANTEN KLONEN AUS A-CDNA-BIBLIOTHEKEN 17
2.11. HEFE-DIHYBRID-SYSTEM
2.11.1. AKTIVIERUNGSTEST 17
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2
.
11
.
2
.
2.11.3.
2.11.4.
2
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12
.
3.
3.1.
3.2.
3.3.
3.3.1.
3.3.2.
3.4.
3.5.
3.6.
3.7.
3.8.
3.9.
4
.
4.1.
4.2.
4.3.
4.4.
4.5.
4.6.
5.
6
.
KONSTRUKTION VON SU(VAR)3-9-EXPRESSIONSPIASMIDEN
HEFE-T RANSFORMATION
AKTIVITAETSMESSUNG DER SS-GALAKTOSIDASE
COMPUTERANALYSEN DER DNA- UND PROTEINSEQUENZEN
19
19
19
20
ERGEBNISSE
DER SU(VAR)3-9-LOCUS KODIERT FUER ZWEI PROTEINE MIT UNTERSCHIEDLICHEN
FUNKTIONEN
MOLEKULARE ANALYSE VON SU(VAR)3-9-MUTATIONEN
EVOLUTIONAERE KONSERVIERUNG DES SU(VAR)-3-9-GENS
KONSERVIERUNG DER SU(VAR)3-9-GENSTRUKTUR UND -SEQUENZ IN DER GATTUNG
DROSOPHILA
SU(VAR)3-9-HOMOLOGE SEQUENZEN ANDERER INSEKTENARTEN UND DES MENSCHEN
DIE SET-DOMAENE WIRKT IN SACCHAROMYCES CEREVISIAE ALS
TRANSKRIPTIONSAKTIVATOR
IDENTIFIZIERUNG EINES MIT SU(VAR)3-9 WECHSELWIRKENDEN PROTEINS
KLETT-TRANSKRIPTANALYSEN BEI DROSOPHILA MELANOGASTER
21
23
26
28
34
39
41
PCR-, RESTRIKTIONS- UND SEQUENZANALYSE DER ISOLIERTEN CDNA-KLONE DES
KLETT-GENS
43
DIE ABGELEITETE AMINOSAEURESEQUENZ DES KLETT-PROTEINS
GLIEDERUNG DES SU(VAR)3-9-PROTEINS IN DOMAENEN
DISKUSSION
59
DER SU(VAR)3-9-LOCUS VON DROSOPHILA MELANOGASTER KODIERT FUER ZWEI
PROTEINE
MIT UNTERSCHIEDLICHEN FUNKTIONEN
MOLEKULARE ANALYSE VON SU(VAR)3-9-MUTATIONEN
EVOLUTIONAERE KONSERVIERUNG DES SU(VAR)-3-9-GENS
DIE SET-DOMAENE WIRKT IN HEFE ALS TRANSKRIPTIONSAKTIVATOR
KLETT - EIN MIT SU(VAR)3-9 INTERAGIERENDES PROTEIN
PERSPEKTIVE
ZUSAMMENFASSUNG
LITERATURVERZEICHNIS
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