Die HCMV-Infektion bei immunsupprimierten Patienten: Nachweis von Virusantigen und viralen Nukleinsäuren in Blutleukozyten
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1 EINLEITUNG 1
1.1 HERPESVIREN: DEFINITION, AUFBAU, KLASSIFIKATION
V 1
1.2 GENETISCHE ORGANISATION UND DNA-REPLIKATION DES CMV 3
1.3 EPIDEMIOLOGIE UND PATHOGENESE DER CMV-INFEKTION 6
1.3.1 EPIDEMIOLOGIE DER CMV-INFEKTION 7
1.3.2 LATENTE INFEKTION 8
1.3.3 KLINISCHE MANIFESTATION DER CMV-INFEKTION 8
1.4 DIAGNOSE DER CMV-INFEKTION 10
1.4.1 DIE CMV-SEROLOGIE ~ 10
1.4.2 DIREKTE NACHWEISVERFAHREN EINER CMV-INFEKTION 11
1.5 ROLLE DER PBL BEI DER AKUTEN CMV-INFEKTION 12
2 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 13
2.1 DIAGNOSE DER CMV-INFEKTION BEI NIERENTRANSPLANTIERTEN 13
2.2 NACHWEIS VIRALER TRANSKRIPTE IN PBL 14
3 MATERIALIEN 15
3.1 GERAETE 15
3.2 REAGENZIEN 15
3.3 LOESUNGEN, PUFFER, MEDIEN 16
3.4 ENZYME 17
3.5 VERWENDETE KITS 17
3.6 ANTIKOERPER 17
3.7 ZEHEN 18
4 METHODEN 19
4.1 PATIENTEN 19
4.2 CMV-SEROLOGIE 20
4.3 CMV-KURZZEITKULTUR 20
4.4 CMV-PP65-NACHWEIS IN GRANULOZYTEN 21
4.5 NACHWEIS VON CMV-DNA MITTELS NESTED PCR AUS ZEH-LYSAT 23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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SEITE
4.6 NACHWEIS VIRALER TRANSKRIPTE IN PBL 25
4.6.1 FACS-ANALYSE DER LEUKOZYTEN 25
4.6.2 MRNA-EXTRAKTION 26
4.6.3 REVERSE TRANSKRIPTION 27
4.6.4 UEBERPRUEFUNG DER EFFEKTIVITAET DER MRNA-EXTRAKTION 28
4.6.5 AMPLIFIKATION DER CDNA 29
4.7 NACHWEIS VIRALER DNA UND MRNA IN FACS-GEREINIGTEN LEUKOZYTEN
POPULATIONEN 32
4.7.1 LEUKOZYTENTRENNUNG DURCH FICOLL-PAQUE 32
4.7.2 ANFAERBUNG DER ZELLEN FUER FACS 33
4.7.3 CMV-DNA-NACHWEIS IN LEUKOZYTENPOPULATIONEN 33
4.7.4 CMV-MRNA-NACHWEIS IN LEUKOZYTENPOPULATIONEN 34
4.8 STATISTISCHE METHODEN 36
5 ERGEBNISSE 37
5.1 DIAGNOSE DER CMV-INFEKTION BEI NIERENTRANSPLANTIERTEN 37
5.1.1 PATIENTEN 37
5.1.2 CMV-SPENDER-EMPFAENGER-STATUS UND KLINISCHER VERLAUF 37
5.1.3 SENSITIVITAET UND SPEZIFITAET DER VERSCHIEDENEN DIAGNOSTISCHEN
VERFAHREN 44
5.1.4 PP65-ANTIGENNACHWEIS UND KLINISCHE DIAGNOSE 46
5.1.5 INFEKTIONSMARKER IM VERLAUF DER ANTIVIRALEN THERAPIE 48
5.2 NACHWEIS VON IMMEDIATE EARLY UND LATE TRANSKRIPTEN IN PBL 50
5.2.1 ANALYSE DER LEUKOZYTENPOPULATIONEN 50
5.2.2 SENSITIVITAET DES CMV-CDNA-NACHWEISES 51
5.2.3 NACHWEIS VIRALER TRANSKRIPTE IN PATIENTEN-PBL 54
5.2.3.1 VERGLEICH VON PP65-ANTIGENNACHWEIS MIT DER CDNA-PCR 54
5.2.3.2 NACHWEIS VIRALER MRNA IN ABHAENGIGKEIT VON DER HOEHE DER
ANTIGENAEMIE 55
5.2.3.3 STABILITAET VON CMV-MRNA BZW. PP65-ANTIGEN IN LEUKOZYTEN 56
5.2.3.4 PP65-ANTIGENAEMIE, DNA- UND CDNA-PCR BEI VIER PATIENTENVERLAEUFEN
UNTER ANTI
VIRALER THERAPIE 56
5.3 NACHWEIS VIRALER DNA UND MRNA IN LEUKOZYTENPOPULATIONEN DES BLUTES
58
5.3.1 NACHWEIS VIRALER DNA IN LEUKOZYTENPOPULATIONEN 58
5.3.2 NACHWEIS VIRALER MRNA IN LEUKOZYTENPOPULATIONEN 60
5.3.3 OPTIMIERUNG DES MRNA-NACHWEISES 61
SEITE
6 DISKUSSION 66
6.1 DIAGNOSE DER CMV-INFEKTION BEI NIERENTRANSPLANTIERTEN 66
6.1.1 EINFUEHRUNG VON PP65-ANTIGENAEMIETEST UND CMV-PCR IN DIE
ROUTINEDIAGNOSTIK 66
6.1.2 FRUEHDIAGNOSE DER CMV-INFEKTION BEI NIERENTRANSPLANTATEMPFAENGERN 69
6.1.3 THERAPIEINDIKATION UND VERLAUFSKONTROLLE 71
6.2 VERBESSERUNG DER CMV-DIAGNOSTIK DURCH NACHWEIS VIRALER TRANSKRIPTE ?
71
6.3 VIRALE NUKLEINSAEUREN IN FACS-GEREINIGTEN LEUKOZYTENPOPULATIONEN 73
6.3.1 SCHLUSSFOLGERUNGEN ZUR LOKALISATION DER CMV-REPLIKATION IN
BLUTLEUKOZYTEN 75
7 ZUSAMMENFASSUNG 77
8 LITERATURVERZEICHNIS 78 |
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