Untersuchungen zur Genomorganisation des Egg-Drop-Syndrom-1976-Virus (Stamm 127):
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1996
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5
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
A.
EINLEITUNG
10
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
18
1.
VIRUSMATERIAL
UND
VIRUSVERMEHRUNQ
18
1.1
KULTURMEDIEN
18
2.
VLRUSRELNLAUNA
19
3.
PRAEOARATION
DER
EDS76-VLRUS-DNS
19
3.1
LOESUNGEN
20
4.
RESTRIKTIONSENZVM-ANALVSE
DER
EDS76-VIRUS-DNS
20
4.1
LOESUNGEN
21
5.
REISOLIERUNO
VON
EDS76-VIRUS-DNS-FRAAMENTEN
AUS
22
DEM
AAAROSEGEL
NACH
DEM
"
QIAEX
"
-VERFAHREN
6.
KLONIERUNASEXPERLMENT
23
6.1
CHARAKTERISTIKA
DES
WIRTSSTAMMS
23
6.2
CHARAKTERISTIKA
DES
VEKTORS
23
6.3
LINEARISIERUNG
DES
VEKTORS
24
6.3.1
LIGATIONSKONTROLLE
25
6.4
DEPHOSPHORYLIERUNG
DES
VEKTORS
(CIP-BEHANDLUNG)
25
6.4.1
CIP-KONTROLLE
26
6
4.2
LOESUNGEN
26
6.5
SPALTUNG
DER
EDS76-VIRUS-DNS
26
6
6.6
LIGATION
DER
EDS76-VIRUS-DNS
MIT
DEM
VEKTOR
26
6.6.1
LOESUNGEN
27
6.7
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI-ZELLEN
MIT
REKOMBINANTEN
VEKTOREN
28
6.7.1
TRANSFORMATIONSEFFIZIENZKONTROLLE
28
7.
ISOLIERUNG
UND
VERMEHRUNG
DER
REKOMBINANTEN
VEKTOREN
28
7.1
PRAEPARATION
NACH
BIRNBOIM
UND
DOLY
('KLEIN-LYSATE')
29
7.2
PRAEPARATION
MIT
DEM
'PLASMID
MIDI
KIT'
29
7.3
LOESUNGEN
30
8.
CHARAKTERISIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
VEKTOREN
31
9.
NICHTRADIOAKTIVE
DNS-SEOUENZIERUNO
NACH
SANGER
31
9.1
SCHEMA
DER
SEQUENZIERUNG
UND
CHEMILUMINESZENZ-DETEKTION
32
9.2
ALKALISCHE
DENATURIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
VEKTOR-DNS
32
9.3
DIDESOXY-SEQUENZIERUNG
MIT
BIOTIN-MARKIERTEN
PRIMERN
33
9.3.1
LOESUNGEN
34
9.4
POLYACRYLAMID-SEQUENZGEL
35
9.4.1
LOESUNGEN
36
10.
CHEMILUMINESZENZ-DETEKTION
36
10.1
LOESUNGEN
38
11.
COMPUTERGESTUETZTE
HOMOLOOIESTUDIEN
MIT
ANDEREN
39
ADENOVIREN
C.
ERGEBNISSE
40
1.
REINIGUNG
DES
EDS76-VIRUS
UND
PRAEPARATION
DER
40
VIRALEN
DNS
7
2
CHARAKTERISIERUNG
DER
EDS76-VIRUS-DNS
DURCH
40
RESTRLKTLONSENZVM-ANALVSE
3.
KLONIERUNG
DER
EDS76-VIRUS-DNS
44
3.1
TRANSFORMATIONSERGEBNIS
44
4.
ISOLIERUNG
UND
IDENTIFIZIERUNG
REKOMBINANTER
VEKTOREN
46
5.
VERMEHRUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
REKOMBINANTER
48
VEKTOREN
6.
ETABLIERUNG
UND
OPTIMIERUNG
DER
SEOUENZIERUNG
UND
50
DER
CHEMILUMINESZENZ-DETEKTLON
7.
SEOUENZIERUNG
REKOMBINANTER
VEKTOR-DNS
52
7.1
BASENSEQUENZEN
DER
EDS76-VIRUS-DNS-FRAGMENTE
54
8.
HOMOLOGIESTUDIEN
ZWISCHEN
DEN
GENOMEN
DES
57
EDS76-VLRUS
UND
ANDERER
ADENOVIREN
8.1
HOMOLOGIEN
AUF
NUKLEINSAEUREEBENE
57
8.1.1
NUKLEINSAEUREHOMOLOGIE
DES
STRUKTURPROTEIN
PVIII-GENS
58
8.2
HOMOLOGIEN
AUF
AMINOSAEUREEBENE 59
8.2.1
AMINOSAEUREHOMOLOGIE
DES
NICHTSTRUKTURPROTEINS
L1-52K
59
8.2.2
AMINOSAEUREHOMOLOGIE
DER
PENTONBASE
60
8.2.3 AMINOSAEUREHOMOLOGIE
DES
STRUKTURPROTEINS
PVIII
64
D.
DISKUSSION
67
E.
ZUSAMMENFASSUNG
/
SUMMARY
83
F.
LITERATURVERZEICHNIS
85 |
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