Proteine: Standardmethoden der Molekular- und Zellbiologie: Präparation, Gelelektrophorese, Membrantransfer und Immundetektion
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Springer
1997
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R A. ECKERT JUERGEN KARTENBECK
PROTEINE:
STANDARDMETHODEN
DER MOLEKULAR
UND ZELLBIOLOGIE
PRAEPARATION
, GELELEKTROPHORESE,
MEMBRANTRANSFE
R
UN
D IMMUNDETEKTIO
N
TECHNISCHE HOCHSCHULE DARMSTADT
MI
T 53 ABBILDUNGEN FACHBEREICH 10 - BIOLOGIE
- BIBLIOTHEK
-
SCHNITTSPAHNSTRASE 10
D6
INV.-NR.
/.
SPRINGER
INHALTSVERZEICHNIS
1 PRAEPARATION VON PROTEINEN FUER DIE GELELEKTROPHORESE
1
1.1 ALLGEMEINE EINLEITUNG UND UEBERBLICK 1
1.2 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON PROTEINEN
IN WACHSENDEN KULTURZELLEN 3
1.3 ZELL-LYSE UND DIFFERENTIELLE EXTRAKTION VON PROTEINEN 6
1.4 ISOLIERUNG VON INTERMEDIAERFILAMENT-PROTEINEN
AUS ZELLKULTUREN UND VERSCHIEDENEN GEWEBEN 13
1.4.1 ALLGEMEINE EINLEITUNG UND UEBERBLICK 13
1.4.2 ISOLIERUNG VON INTERMEDIAERFILAMENTEN AUS KULTURZELLEN
DURCH EXTRAKTION MIT PUFFERN HOHER SALZKONZENTRATION 16
1.4.3 ISOLIERUNG VON INTERMEDIAERFILAMENTEN AUS KULTURZELLEN
UNTER BENUTZUNG VON DNASE 17
1.4.4 ISOLIERUNG VON INTERMEDIAERFILAMENT-PROTEINEN
AUS VERSCHIEDENEN GEWEBEN 19
1.4.5 ISOLIERUNG VON INTERMEDIAERFILAMENT-PROTEINEN
VOM CYTOKERATINTYP UND DESMOSOMEN
AUS MEHRSCHICHTIGEM VERHORNTEM EPITHEL 21
1.5 ISOLIERUNG VON GESAMTPROTEIN UND RNA AUS KULTURZELLEN
UND GEWEBEN 24
1.5.1 GTC-CSCL-ULTRAZENTRIFUGATIONSMETHODE 24
1.5.2 SCHNELLMETHODE NACH CHOMCZYNSKI 31
1.6 SYNTHESE UND RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON PROTEINEN
DURCH IN VITRO TRANSLATION VON MESSENGER RNA 35
1.7 ANREICHERUNG SPEZIFISCHER PROTEINE AUS ZELLEXTRAKTEN
ODER AUS IN VITRO TRANSLATIONSANSAETZEN
DURCH IMMUNPRAEZIPITATION 41
1.8 FAELLUNG VON PROTEINEN DURCH ORGANISCHE LOESUNGSMITTEL 49
XII INHALTSVERZEICHNIS
1.8.1 EINLEITUN
G ; ; 49
1.8.2 ACETONFAELLUN
G 50
1.8.3 FAELLUNG MI
T CHLOROFORM-METHANO
L 51
1.9 REINIGUN
G UN
D KONZENTRIERUN
G VO
N PROTEINLOESUNGE
N 52
1.9.1 ALLGEMEINE EINLEITUN
G UN
D UEBERBLIC
K 52
1.9.2 DIALYSE 53
1.9.3 ULTRAFILTRATIO
N MI
T DE
M KONZENTRATORSYSTE
M CENTRICO
N 56
1.9.4 VAKUUMDIALYS
E MI
T KOLLODIUMHUELSE
N 58
1.9.5 KONZENTRIERE
N UN
D TROCKNE
N IN EINE
R ..
.
VAKUUM-KONZENTRATIONS-ZENTRIFUG
E (SPEED VA
C SYSTEM)..
. 59
1.9.6 LYOPHILISIERUN
G (GEFRIERTROCKNUNG
) 61
1.10 QUANTITATIV
E BESTIMMUN
G VO
N PROTEINE
N 62
2 AUFTRENNUNG VO
N PROTEINEN DURCH ELEKTROPHORESE
I
N POLYACRYLAMIDGELEN
67
2.1 KURZ
E EINFUEHRUN
G I
N DI
E ELEKTROPHORETISCHE
N EIGENSCHAFTEN
VO
N PROTEINE
N UN
D DIE STRUKTU
R VO
N POLYACRYLAMIDGELE
N 67
2.2 EINDIMENSIONAL
E SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORES
E 71
2.3 ZWEIDIMENSIONAL
E POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORES
E 93
2.4 FAERBUN
G VO
N PROTEINE
N IN POLYACRYLAMIDGELE
N 111
2.4.1 ALLGEMEINE EINLEITUN
G UN
D UEBERBLIC
K 111
2.4.2 FAERBUN
G MI
T COOMASSI
E BRILLIANTBLAU-FARBSTOFFE
N 112
2.4.3 FAERBUN
G DURC
H SILBERIMPRAEGNIERUN
G 118
2.5 FEHLERSUCH
E 126
2.6 DOKUMENTATIO
N UN
D AUSWERTUN
G
VO
N 1D- UN
D 2D-PAGE-PROTEINAUFTRENNUNGE
N 128
2.6.1 PHOTOGRAPHI
E VO
N GEFAERBTEN GELEN 129
2.6.2 BESTIMMUN
G VO
N MOLEKULARGEWICHTE
N
UN
D ISOELEKTRISCHE
N PUNKTE
N 129
2.6.3 DENSITOMETRIE..
. 132
2.7 ELUTIO
N VO
N PROTEINE
N AU
S POLYACRYLAMIDGELE
N 134
2.7.1 ALLGEMEINE EINLEITUN
G UN
D UEBERBLIC
K 134
2.7.2 ELEKTROPHORETISCH
E ELUTIO
N 135
2.7.3 ELUTIO
N DURC
H DIFFUSION 139
2.8 KONSERVIERUN
G VO
N GEFAERBTEN POLYACRYLAMIDGELE
N
DURC
H TROCKNUN
G ZWISCHEN ZELLOPHANFOLIE
N 140
INHALTSVERZEICHNIS XIII
3 TRANSFER VON PROTEINEN AUS POLYACRYLAMIDGELEN
AUF TRAEGERMEMBRANEN (PROTEIN- ODER WESTERN-BLOTTING)....
143
3.1 ALLGEMEINE EINLEITUNG UN
D UEBERBLICK 143
3.2 TANK-BLOTTING 147
3.3 SEMIDRY-BLOTTING 150
3.4 FAERBUNG VON PROTEINEN AUF BLOT-MEMBRANEN 154
3.4.1 FAERBUNG MIT PONCEAU S , 155
3.4.2 FAERBUNG MIT COOMASSIE BRILLIANTBLAU R-250 157
3.4.3 FAERBUNG MIT TUSCHE (YYINDIA INK ) 159
3.5 ELUTION VON PROTEINEN VON NC- UN
D PVDF-MEMBRANEN 161
3.6 FEHLERSUCHE 162
3.7 LITERATUR 163
4 NACHWEIS VON PROTEINEN AUF BLOT-MEMBRANEN
MIT IMMUNCHEMISCHEN METHODEN
167
4.1 ALLGEMEINE EINLEITUNG UN
D UEBERBLICK 167
4.2
-
VERLAUFSUEBERSICHT DE
R IMMUNCHEMISCHEN DETEKTION
VON ANTIGENEN AUF BLOT-MEMBRANEN 174
4.3 BLOCKIERUNG VON UNSPEZIFISCHEN BINDUNGSSTELLEN
AUF DER BLOT-MEMBRAN 175
4.4 BINDEN DES PRIMAERANTIKOERPER
S 179
4.5 BINDEN DER MARKIERTEN SEKUNDAERANTIKOERPER
BZW. VON PROTEIN A ODER G 182
4.6 BINDUNG VON (STREPT)AVIDIN-KONJUGATEN
ODER (STREPT)AVIDIN-BIOTINYLIERTEN ENZYMKOMPLEXEN
AN BIOTIN-GEKOPPELTE SEKUNDAERANTIKOERPER 185
4.7 DETEKTION VON ENZYM-MARKIERTEN IMMUNKOMPLEXEN
AUF BLOT-MEMBRANEN 186
4.7.1 ALLGEMEINE EINLEITUNG UN
D UEBERBLICK 186
4.7.2 COLORIMETRISCHER NACHWEIS VON PEROXIDASE 188
4.7.3 COLORIMETRISCHER NACHWEIS VON ALKALISCHER PHOSPHATASE...
. 189
4.7.4 NACHWEIS VON PEROXIDASE DURCH CHEMILUMINESZENZ
(ECL-SYSTEM) 193
4.7.5 NACHWEIS VON ALKALISCHER PHOSPHATASE DURC
H
CHEMILUMINESZENZ MIT 1,2-DIOXETANSUBSTRATEN 197
XIV INHALTSVERZEICHNIS
4.8 DETEKTION VON RADIOAKTIVER STRAHLUNG
UND CHEMILUMINESZENZ AUF ROENTGENFILMEN
(AUTORADIOGRAPHIE UND LUMINOGRAPHIE) 204
4.8.1 ALLGEMEINE EINLEITUNG UND UEBERBLICK 204
4.8.2 VORBEHANDLUNG VON GELEN FUER DIE AUTORADIOGRAPHIE
UND FLUOROGRAPHIE 208
4.8.3 EXPOSITION UND ENTWICKLUNG DER ROENTGENFILME 210
4.9 SILBERVERSTAERKUNG VON KOLLOIDALER GOLDMARKIERUNG 213
4.10 IMMUNDETEKTION VON ANTIGENEN AUF BLOT-MEMBRANEN:
ZUSAMMENFASSENDES KURZPROTOKOLL 218
4.11 FEHLERSUCHE 221
ANHANG A
HINWEISE ZUR WASSERQUALITAET
FUER ZELL- UND MOLEKULARBIOLOGISCHE EXPERIMENTE 225
ANHANG
B HERSTELLUNG HAEUFIG BENOETIGTER STAMMLOESUNGEN 229
ANHANG
C SILIKONISIERUNG VON GLAS- UND PLASTIKGERAETEN 231
ANHANG
D PRAEPARATION VON POLYA
+
-RNA (MRNA)
FUER DIE IN VITRO TRANSLATION 233
ANHANG
E IN VITRO MARKIERUNG VON LOESLICHEN PROTEINEN
MIT
125
I (RADIOJODIERUNG MIT CHLORAMIN T) 237
ANHANG F
SICHERHEITSVORSCHRIFTEN FUER DEN UMGANG
MIT RADIOAKTIVEN SUBSTANZEN 241
ANHANG G
MARKERPROTEINE FUER DIE SDS-PAGE
UND ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 245
ANHANG H
AFFINITAETSREINIGUNG VON PRIMAERANTIKOERPERN
DURCH SPEZIFISCHE ADSORPTION AN ANTIGENE
AUFNC-MEMBRANEN 247
ANHANG I
RENATURIERUNG VON PROTEINEN IM POLYACRYLAMIDGEL
NACH SDS-ELEKTROPHORESE 249
ANHANG
J STRUKTURFORMELN HAEUFIG BENUTZTER REAGENTIEN 251
ANHANG K
AUSWAHL VON BUECHERN ZU AEHNLICHEN
UND ERGAENZENDEN METHODEN 255
ANHANG L
BEZUGSQUELLENVERZEICHNIS
FUER HAEUFIG ERWAEHNTE MATERIALIEN 257
INHALTSVERZEICHNIS XV
ANHANG M
ADRESSEN DER IM BUCH ERWAEHNTEN FIRMEN 261
ANHANG N
VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN 267
SACHVERZEICHNIS 271
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| spelling | Eckert, Werner A. Verfasser aut Proteine: Standardmethoden der Molekular- und Zellbiologie Präparation, Gelelektrophorese, Membrantransfer und Immundetektion Werner A. Eckert ; Jürgen Kartenbeck Berlin [u.a.] Springer 1997 XV, 275 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Springer Labormanual Protein Analysis cabt Molecular Biology cabt Proteins isolation & purification Laboratory Manuals Molekularbiologie (DE-588)4039983-7 gnd rswk-swf Labormedizin (DE-588)4073931-4 gnd rswk-swf Methode (DE-588)4038971-6 gnd rswk-swf Proteine (DE-588)4076388-2 gnd rswk-swf Proteine (DE-588)4076388-2 s Molekularbiologie (DE-588)4039983-7 s Methode (DE-588)4038971-6 s DE-604 Labormedizin (DE-588)4073931-4 s Kartenbeck, Jürgen Verfasser aut DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007430396&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
| spellingShingle | Eckert, Werner A. Kartenbeck, Jürgen Proteine: Standardmethoden der Molekular- und Zellbiologie Präparation, Gelelektrophorese, Membrantransfer und Immundetektion Protein Analysis cabt Molecular Biology cabt Proteins isolation & purification Laboratory Manuals Molekularbiologie (DE-588)4039983-7 gnd Labormedizin (DE-588)4073931-4 gnd Methode (DE-588)4038971-6 gnd Proteine (DE-588)4076388-2 gnd |
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