Durchflußzytometrische Untersuchungen des Knochenmarks ovariektomierter Ratten: Studien zur Pathophysiologie der Östrogenmangel-Osteopenie
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I
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
2
LITERATURUEBERSICHT
4
2.1
OSTEOPOROSE
UND
DIE
BEDEUTUNG
VON
OESTROGENEN
IM
4
KNOCHENSTOFFWECHSEL
2.1.1
GESCHICHTLICHES
4
2.1.2
DEFINITION
4
2.1.3
EINTEILUNG,
AETIOLOGIE
UND
PROPHYLAXE
5
2.1.4
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
POSTMENOPAUSALEN
OSTEOPOROSE
9
2.1.5
DIE
RATTE
ALS
MODELL
FUER
DEN
POSTMENOPAUSALEN
KNOCHENVERLUST
12
23
OSTEOKLASTEN
IM
KNOCHENSTOFFWECHSEL
16
2.2.1
PHYSIOLOGIE
DES
KNOCHENS
16
2.2.2
ENTWICKLUNG
DER
OSTEOKLASTEN
17
2.2.2.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
OSTEOKLASTEN
17
2.23.2
URSPRUNG
DER
OSTEOKLASTEN
18
2.2.3
MECHANISMUS
DER
KNOCHENRESORPTION
DURCH
OSTEOKLASTEN
20
23
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
22
3
MATERIAL
UND
METHODEN
25
3.1
TIERMATERIAL
25
33
TIERHALTUNG
25
33
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG
25
3.3.1
OVARIEKTOMIE
DER
WEIBLICHEN
RATTEN
25
3.3.2
VERSUCHSABLAUF
27
II
3.4
AUFARBEITUNG
DES
KNOCHENMARKS
FUER
DIE
28
DURCHFLUBZYTOMETRIE
3.4.1
PRAEPARATION
DES
KNOCHENS
28
3.4.2
GEWINNUNG
DES
KNOCHENMARKS
28
3.4.3
BESTIMMUNG
DER
GESAMTZELLZAHL
29
3.4.4
KRYOKONSERVIERUNG
29
3.5
IMMUNOFLUORESZENZMARKIERUNG
30
3.5.1
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
30
3.5.2
LOESUNGEN
UND
PUFFER
34
3.5.3
INDIREKTE
IMMUNOFLUORESZENZ
35
3.5.3.1
MARKIERUNG
VON
OBERFLAECHENANTIGENEN
35
3.5.3.2
MARKIERUNG
VON
INTRAZELLULAEREN
ANTIGENEN
35
3.5.3.2.1
FIXIERUNG
UND
PERMEABILISIERUNG
MIT
PFA/SAPONIN
36
3.5.3.2.2
PERMEABILISIERUNG
MIT
ALKOHOL
36
3.6
MESSUNG
UND
AUSWERTUNG
36
3.7
LEBEND-TOT-FAERBUNG
37
3.8
ERYTHROZYTOLYSE
38
3.9
STATISTIK
39
4
ERGEBNISSE
40
4.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLPOPULATIONEN
40
4.1.1
DOT-PLOT-DARSTELLUNG
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHER
MESSERGEBNISSE
40
4.1.1.1
LYMPHOZYTENFENSTER
41
4.1.1.2
MYELOPOESE-ZELLEN-FENSTER
41
4.1.2
ERMITTLUNG
DER
FLUORESZENZINTENSITAET
42
4.1.2.1
NEGATIV-KONTROLLE
42
4.1.2.2
LYMPHOZYTEN,
OX-7
(THY
1.1)
MARKIERT
43
4.1.2.3
LYMPHOZYTEN,
KIBIR
MARKIERT
44
4.1.2.4
MAKROPHAGEN/MONOZYTEN,
ED
1
MARKIERT
45
M
4.1.2.5
MYELOPOESE-ZELLEN,
ED
8
MARKIERT
46
4.2
AUSWAHL
GEEIGNETER
ANTIKOERPER
47
43
ANWENDUNG
DER
ANTIKOERPER
IN
VORVERSUCHEN
MIT
OVX-RATTEN
47
4.4
HAUPTVERSUCH
ALS
SEQUENZEXPERIMENT
49
4.4.1
ENTWICKLUNG
DER
KOERPER-,
UTERUSGEWICHTE
UND
DER
ZELLZAHLEN
50
4.4.2
ERGEBNISSE
DER
ZELLZAHL-MESSUNGEN
IM
KNOCHENMARK
52
4.4.3
ERGEBNISSE
DER
ANTIKOERPER-MARKIERUNGEN
IM
EINZELNEN
53
4.4.3.1
ANTIKOERPER
ED
1
53
4.4.3.2
ANTIKOERPER
ED
8
56
4.4.3.3
ANTIKOERPER
OX-7
(THY
1.1
POSITIVE
ZELLEN)
58
4.4.3.4
ANTIKOERPER
KIBIR
61
5
DISKUSSION
64
5.1
ZELLPENNEABILISIERUNG
MIT
PFA
ZUM
NACHWEIS
64
VON
INTRAZELLULAEREN
ANTIGENEN
5.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
KNOCHENMARKS-ZELLPOPULATIONEN
65
BEI
DER
RATTE
53
EINFLUESSE
VON
OVARIEKTOMIE
UND
ESTRADIOL-SUPPLEMENTIERUNG
66
AUF
KOERPER
UND
UTERUSGEWICHT
5.4
POSTOPERATIVE
VERAENDERUNGEN
DER
KNOCHENMARKSZELL
67
POPULATIONEN
5.4.1
LYMPHOZYTEN
67
5.4.2
MYELOPOESE-ZELLEN
69
53
KUENFTIGE
EINSATZMOEGLICHKEITEN
DER
KNOCHENMARKS
71
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
IV
6
ZUSAMMENFASSUNG
72
SUMMARY
7
LITERATURVERZEICHNIS
76
8
DANKSAGUNG
96
9
LEBENSLAUF
98 |
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