Untersuchung ökologischer und methodischer Faktoren beim Nachweis rekombinanter Mikroorganismen im Boden:
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| Format: | Book |
| Language: | German |
| Published: |
Berlin
1996
|
| Series: | Deutschland / Umweltbundesamt: Texte
1996,52 Umweltforschungsplan des Bundesministeriums für Umwelt, Naturschutz und Reaktorsicherheit : Gentechnik |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
---------
J,
-------------------------------------
;
:
:
:
-----------------
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
,
1.1
NOTWENDIGKEIT
DES
NACHWEISES
GENTECHNISCH
VERAENDERTER
MIKROORGANISMEN
(GVMO)
IN
DER
UMWELT
1
1.2
BESONDERHEITEN
DES BODENS,
DIE
DEN
NACHWEIS
VON
MIKROORGANISMEN
IN
DIESEM
LEBENSRAUM
BEEINFLUSSEN
2
,
.3
UEBERBLICK
UND
BEWERTUNG
DER
ZUR
DETEKTION
VON
MIKROORGANISMEN
IN
DER
UMWELT,
SPEZIELL
IM
BODEN,
ZUR
VERFUEGUNG
STEHENDEN
NACHWEISMETHODEN
3
.4
FRAGESTELLUNG
UND
ZIEL
DER
ARBEIT
15
I
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
18
I
P
GERAETE
18
.2
PUFFER
UND
LOESUNGEN
18
I
,
YY
2.3
VERWENDETES
BODENMATERIAL
20
2.6.1
BESCHREIBUNG
DER
TECHNIK
28
.3.1
BESCHREIBUNG
DER
ENTNAHMESTANDORTE
20
2.3.2
AUFARBEITUNG
UND
LAGERUNG
GROESSERER
BODENMENGEN
20
.3.3
PHYSIKALISCHE
UND
CHEMISCHE
BODENKENNDATEN
22
.3.4
WEITERE
AUFARBEITUNG
DES
BODENMATERIALS
22
2.3.5
TROCKENGEWICHT
UND
WASSERGEHALTSBESTIMMUNG
22
.3.6
WASSERKAPAZITAETSEINSTELLUNGEN
,
22
.3.7
BESTIMMUNG
UND
EINSTELLUNG
EINES
BESTIMMTEN
BODEN-PH-WERTS
23
.3.8
1
EINSTELLEN
VERSCHIEDENER
BODENTEMPERATUREN
23
VERWENDETE
ORGANISMEN
UND
ANZUCHTBEDINGUNGEN
24
2.4.1
VERWENDETE
BAKTERIENSTAEMME
24
.4.2
KULTURMEDIEN
UND
ANZUCHTBEDINGUNGEN
25
.4.3
STAMMHALTUNG
26
2.5
ANIMPFUNG
DES BODENS
MIT
DEN
REKOMBINANTEN
BAKTERIEN
27
.5.1
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
IN
EINER
BAKTERIENSUSPENSION
27
2.5.2
EINSTELLEN
DES
BODENS
AUF
DIE
GEWUENSCHTE
ZELLZAHL
27
2.6
NACHWEIS
BIOLUMINESZIERENDER
BAKTERIEN
IM
BODEN
DURCH
EINE
RESTLICHTEMPFINDLICHE
ICCD
(INTENSIFIED
CHARGE
COUPLE
DEVICE)
KAMERA
28
INHALTSVERZEICHNIS
II
2.6.2
DURCHFUEHRUNG
DER
MESSUNG
30
2.7
NACHWEIS
BIOLUMINESZIERENDER
BAKTERIEN
IM
BODEN
DURCH
ROENTGENFILM-EXPOSITION
30
2.8
NACHWEIS
BIOLUMINESZIERENDER
BAKTERIEN
IM
BODEN
DURCH
LUMINOMETERMESSUNGEN
31
2.8.1
PRINZIP
DER
LICHTMESSUNG
IM
LUMINOMETER
31
2.8.2
VERSCHIEDENE
AUFARBEITUNGSTECHNIKEN
ZUR
OPTIMIERUNG
DER
LUMINOMETERMESSUNG
32
2.8.3
QUANTIFIZIERUNG
DURCH
DIE
MPN-LSC-TECHNIK
33
2.8.4
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
VERSUCHSDATEN
34
2.9
NACHWEIS
BIOLUMINESZIERENDER
BAKTERIEN
IM
BODEN
DURCH
-
DNA-EXTRAKTION
UND
ANSCHLIESSENDER
PCR
35
2.9.1
EXTRAKTION
UND
AUFREINIGUNG
DER
DNA
NACH
TEBBE
UND
VAHJEN
35
2.9.2
AUFREINIGUNG
DER
DNA
NACH
SMALLA
ET
AL.
36
2.9.3
EXTRAKTION
VON
BAKTERIENZELLEN
AUS BODEN DURCH
EINE
SACCHAROSE
GRADIENTEN
ZENTRIFUGATION
UND
ANSCHLIESSENDE
PCR
37
2.9.4
EXTRAKTION
VON
DNA
AUS
BODEN
DURCH
DIE
"FREEZE
AND
THAW"
METHODE
38
2.9.5
AUSWAHL
DER
PRIMER
UND
DURCHFUEHRUNG
DER
PCR
39
2.9.6
GELELEKTROPHORESE
DER
DNA
40
2.9.7
PLASMIDISOLIERUNG
MIT
DEM
MINIPREP
KIT
PLUS
40
2.9.8
DNA-EXTRAKTION
AUS
"
LOW-MELTING-AGAROSE"
,
41
2.9.9
UMGANG
UND
ENTSORGUNG
MIT
BZW.
VON
GEFAHRSTOFFEN
UND
GENTECHNISCH
VERAENDERTEN
MIKROORGANISMEN
(GVMO)
41
3.
ERGEBNISSE
44
3.1
VERGLEICH
VERSCHIEDENER
LUMINESZENZ-MESSTECHNIKEN
ZUM
NACHWEIS
ZUX-GEN-MARKIERTER
BAKTERIEN
IM
BODEN
(PHAENOTYP-NACHWEIS)
44
3.1.1
DETEKTION
MITTELS
EINER
RESTLICHTEMPFINDLICHEN
ICCD-KAMERA
44
3.1.1.1
ABHAENGIGKEIT
DES
SIGNALS
VON
VERSCHIEDENEN
EXPOSITIONSZEITEN
44
3.1.1.2
NACHWEISGRENZE
VON
E.COLI
ED8654
(PUCD320)
IN
LB-MEDIUM
46
3.1.1.3
NACHWEISGRENZE
VON
E.
COLI
ED8654
(PUCD320)
DIREKT
IM
BT-BODEN
46
3.1.1.4
NACHWEIS
VON
E.COLI
ED8654
(PUCD320)
IN
BT-BODEN
MITTELS
FASEROPTIK
GEKOPPELTER
ICCD-KAMERA
50
3.1.2
DETEKTION
DURCH
ROENTGENFILM-EXPOSITION
51
3.1.2.1
NACHWEISGRENZE
VON
E.
COLI
ED8654
(PUCD320)
IN
LB-MEDIUM
52
INHALTSVERZEICHNIS
M
3.1.2.2
NACHWEISGRENZE
VON
E.COLI
ED8654
(PUCD320)
DIREKT
IM
AH-BODEN
53
3.1.3
DETEKTION
DURCH
LUMINOMETERMESSUNGEN
53
3.1.3.1
NACHWEISGRENZE
IN
FLUESSIGMEDIUM
UND
BODENSUSPENSION
53
3.1.3.2
ABHAENGIGKEIT
DER
DETEKTION
VON
DER
PROBENAUFARBEITUNGSTECHNIK
5
5
3.1.3.3
SENSITIVITAET
UND
QUANTIFIZIERBARKEIT
DER
LSC-METHODE
58
3.2
DETEKTION
LUX
GEN-MARKIERTER
BAKTERIEN
IM
BODEN
DURCH
DNA-EXTRAKTION
UND
ANSCHLIESSENDER
PCR
(GENOTYP-NACHWEIS)
60
3.3
EINFLUSS
OEKOLOGISCHER FAKTOREN
AUF
DIE
DETEKTIERBARKEIT
UND
DAS
UEBERLEBEN
LUX-GEN
MARKIERTER
BAKTERIEN
IM
BODEN
62
3.3.1
EINFLUSS
DES
WASSERGEHALTS
BZW.
DER
WASSERHALTEKAPAZITAET
AUF
DIE
LUMINOMETRISCHE
NACHWEISBARKEIT
VON
E.COLI
ED8654
(PUCD320)
IM
BODEN
63
3.3.2
EINFLUSS
DES
BODENMATERIALS
AUF
DIE
NACHWEISBARKEIT
VON
E.
CO/Z
ED8654
(PUCD320)
IM
BODEN
64
3.3.2.1
EINFLUSS
AUF
DEN
NACHWEIS
METABOLISCH
AKTIVER
ZELLEN
(DURCH
LUMINOMETERMESSUNGEN)
64
3.3.2.2
EINFLUSS
AUF
DEN
DNA-NACHWEIS
(DURCH
DNA-EXTRAKTION
UND
ANSCHLIESSENDER
PCR)
65
3.3.2.2.1
TEST
WEITERER
EXTRAKTIONS-UND
AUFREINIGUNGSTECHNIKEN
FUER
DNA
AUS
KT-BODENMATERIAL
71
3.3.2.2.2
DNA-NACHWEISBARKEIT
BEI
ZWEI
VERSCHIEDENEN
ANIMPFDICHTEN
73
3.3.2.2.3
DAUER
DER
DNA-NACHWEISBARKEIT
IN
BT-BODENMATERIAL
76
3.3.3
EINFLUSS
DES
PH-WERTS
AUF
DIE
NACHWEISBARKEIT
VON
E.COLI
!
ED8654
(PUCD320)
IM
BODEN
77
3.3.3.1
EINFLUSS
AUF
DEN
NACHWEIS
METABOLISCH
AKTIVER
ZELLEN
78
3.3.3.2
EINFLUSS
AUF
DEN
DNA-NACHWEIS
81
3.3.4
EINFLUSS
DER
TEMPERATUR
AUF
DIE
NACHWEISBARKEIT
VON
E.COLI
ED8654
(PUCD320)
IM
BODEN
83
3.3.4.1
EINFLUSS
AUF
DEN
NACHWEIS
METABOLISCH
AKTIVER
ZELLEN
84
3.3.4.2
EINFLUSS
AUF
DEN
DNA-NACHWEIS
86
3.3.5
EINFLUSS
VON
BAKTERIENART
UND
NAEHRSTOFFZUGABE
AUF
DIE
LUMINOMETRISCHE
DETEKTION
LUX-GEN-MARKIERTER
MIKROORGANISMEN
IM
BODEN
89
J
INHALTSVERZEICHNIS
IV
I
3.3.5.1
UEBERLEBENSFAEHIGKEIT
BZW.
DAUER
DER
NACHWEISBARKEIT
MORPHOLOGISCH
UNTERSCHIEDLICHER
LUX-GEN-MARKIERTER
BAKTERIENARTEN
IN
VERSCHIEDENEN
BODENMATERIALIEN
NACH
NAEHRSTOFLZUGABE
90
3.3.5.1.1
DAUER
DER
NACHWEISBARKEIT
VON
E.
COZZ
ED8654
(PUCD320)
90
3.3.5.1.2
DAUER
DER
NACHWEISBARKEIT
VON
PSEUDOMONASPUTIDA
RB1315
(PUTK9/NAH7)
92
3.3.5.1.3
DAUER
DER
NACHWEISBARKEIT
VON
BACILLUS
SUBTILIS
3G\
8
(PSB340)
95
,
4.
DISKUSSION
97
4.1.
VERGLEICH
VERSCHIEDENER
LUMINESZENZ-MESSTECHNIKEN
ZUM
NACHWEIS
ZIA-GEN-MARKIERTER
BAKTERIEN
IM
BODEN
(PHAENOTYP-NACHWEIS)
98
4.1.1
EINFLUSS
DER
PROBENAUFERBEITUNGSTECHNIK
AUF
DEN
LUMINOMETRISCHEN
NACHWEIS/UX-GEN-MARKIERTER
ZELLEN
IM
BODEN
101
4.1.2
SENSITIVITAET
UND
QUANTIFIZIERBARKEIT
DER
LSC-PROBEN
L
AUFARBEITUNGSTECHNIK
103
4.1.3
RELATIVE
NACHWEISSENSITIVITAET
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
PHAENOTYP-DETEKTIONSMETHODEN/G
BODENMATERIAL
IM
VERHAELTNIS
ZUR
TATSAECHLICH
DETEKTIERTEN
ZELLMENGE/
EINGESETZTER
PROBENMENGE
104
4.2
DETEKTION
ZUX-GEN-MARKIERTER
BAKTERIEN
IM
BODEN
DURCH
DNA-EXTRAKTION
UND
ANSCHLIESSENDER
PCR
(GENOTYP-NACHWEIS)
105
4.3
EINFLUSS
OEKOLOGISCHER
FAKTOREN
AUF
DIE
LUMINOMETRISCHE
DETEKTION
ZIZX-GEN-MARKIERTER
BAKTERIEN
IM
BODEN
109
4.4
EINFLUSS
OEKOLOGISCHER
FAKTOREN
AUF
DIE
DNA-DETEKTION
ZWX-GEN-MARKIERTER
BAKTERIEN
IM
BODEN
116
4.5
VERGLEICHENDE
BEWERTUNG
LUMINOMETRISCHER
UND
DNA
NACHWEISMETHODEN
IHR
ZUX-GEN-MARKIERTE
BAKTERIEN
IM
BODEN
122
4.6
EMPFEHLUNG
FILR
DIE
BEHOERDEN
123
4.7
AUSBLICK
UND
WEITERER
FORSCHUNGSBEDARF
127
5.
ZUSAMMENFASSUNG
128
6.
LITERATUR
132 |
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