Der Einfluss des nichtsteroidalen Antirheumatikums Diclofenac auf humane Osteoblasten und deren Vorläuferzellen hinsichtlich Proliferationsverhalten und phänotypspezifischen Funktionen in vitro:
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1996
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INHALT
1
EINLEITUNG
.
I
1.1
HETEROTOPO
OSSIFIKATION
ALS
KOMPLIKATION
DER
HUEFTENDOPROTHOTLK
.
1
1.1.1
HETEROTOPE
OSSIFIKATION
-
DEFINITION
.
1
1.1.2
AETIOLOGIE
UND
PATHOGENESE
.
1
1.1.3
KLINISCHE
SYMPTOME
UND
DIAGNOSE
.
3
1.1.4
HETEROTOPE
OSSIFIKATION
BEI
HUEFTENDOPROTHETIK
-
INZIDENZ
UND
PRAEDISPONIERENDE
FAKTOREN
.
3
1.1.5
THERAPIE
UND
PROPHYLAXE
.
4
1.2
ZELLULAERE
GRUNDLAGEN
DER
KNOCHENBILDUNG
.
5
1.2.1
OSTEOBLASTEN
-
MORPHOLOGIE.
ZYTOCHEMIE
UND
SPEZIFISCHE
PRODUKTE
.
5
1.2.2
HERKUNFT
DES
OSTEOBLASTEN
.
7
1.2.3
REGULATION
DES
OSTEOBLASTEN
IM
KNOCHENSTOFFWECHSEL
DURCH
GEWEBESPEZIFISCHE
HORMONE
UND
ANDERE
FAKTOREN
.
8
1.2.4
PROSTAGLANDINSYNTHESEHEMMER
.
9
2
FRAGESTELLUNG
.
13
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
15
3.1
MATERIAKON
.
15
3.1.1
GEWEBE
.
15
3.1.2
KULTURMEDIUM
.
15
3.1.3
CHEMIKALIEN
.
15
3.1.4
GEBRAUCHS-UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
18
3.1.5
LABORGERAETAUSSTATTUNG
.
19
3.1.6
SONSTIGES.
.
3.1.7
DICLOFENAC.
8
8
VI
3.2.
METHODEN
.
21
3.2.1
ZELLKULTURMETHODEN
.
21
3.2.1.1
ALLGEMEINES
.
21
3.2.1.2
ANLEGEN
DER
PRIMAERKULTUREN
.
22
3.2.1.2.1
STROMALE
KNOCHENMARKZELLEN
.
22
3.2.1.2.2
OSTEOBLASTEN
.
23
3.2.1.3
MEDIUMWECHSEL
.
25
3.2.1.4
PASSAGE
.
25
3.2.2
ALKALISCHE
PHOSPHATASEFAERBUNG
.
26
3.2.3
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
26
3.2.4
VERSUCHSMETHODEN
-
TESTSYSTEME
AUF
PROLIFERATIONSVERHALTEN
UND
PHAENOTYPSPEZIFISCHE
FUNKTIONEN
.
27
3.2.4.1
VERSUCHSANSATZ
.
27
3.2.4.2
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT
.
28
3.2.4.3
INKORPORATION
VON
BROMODESOXYURIDIN
.
29
3.2.4.4
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.
30
3.2.4.5
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
.
30
3.2.4.5.1
ZELLYSATE
.
30
3.2.4.5.2
ALKALISCHE
PHOSPHATASEMESSUNG
.
31
3.2.4.6
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
.
31
3.2.4.7
OSTEOCALCINBESTIMMUNG
.
32
3.2.4.8
COLLAGENBESTIMMUNG
.
34
3.2.5
STATISTIK
.
35
4
ERGEBNISSE
.
37
4.1
WACHSTUMSVERHALFEN
UND
ZELLMORPHOLOGLE
.
37
4.2
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
38
4.3.
ALKALISCH*
PHOSPHATASEFAERBUNG
.
38
4.4
ERGEBNISSE
DER
TESTSYSTEME
AUF
PROLIFERATIONSVERHALTEN
UND
PHAENOTYPSPEZIFISCHE
FUNKTIONEN
DER
ZELLEN
.
39
4.4.1
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT
.
40
4.4.1.1.
STROMALE
KNOCHENMARKZELLEN
.
40
VII
4.4.1.2
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT
-
OSTEOBLASTEN
.
41
4.4.2
INKORPORATION
VON
BROMODESOXYURIDIN
.
42
4.4.2.1
STROMALE
KNOCHENMARKZELLEN
.
42
4.4.2.2
INKORPORATION
VON
BROMODESOXYURIDIN
-
OSTEOBLASTEN
.
43
4.4.3
ZEITZAHL
.
44
4.4.3.1
ZELLZAHLBESTIMMUNG
AN
STROMALEN
KNOCHENMARKZELLEN
.
44
4.4.3.2
ZELLZAHLBESTIMMUNG
AN
OSTEOBLASTEN
.
45
4.4.3.2.1
ZELLZAHLBESTIMMUNG
-
MESSUNG
1
.
45
4.4.3.2.4
ZELLZAHLBESTIMMUNG
-
MESSUNG
2.
.
46
4.4.4
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
.
47
4.4.4.1
ALKALISCHE
PHOSPHATASEMESSUNG
AN
STROMALEN
KNOCHENMARKZELLEN
.
47
4.4.4.2
ALKALISCHE
PHOSPHATASEMESSUNG
AN
OSTEOBLASTEN
.
48
4.4.4.2.1
ALKALISCHE
PHOSPHATASEMESSUNG
1
.
48
4.4.4.2.2
ALKALISCHE
PHOSPHATASEMESSUNG
2
.
49
4.4.5
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
.
50
4.4.5.1
PROTEINBESTIMMUNG
AN
STROMALEN
KNOCHENMARKZELLEN
.
50
4.4.5.2
PROTEINBESTIMMUNG
AN
OSTEOBLASTEN
.
51
4.4.5.2.1
PROTEINBESTIMMUNG
-
MESSUNG
1
.
51
4.4.5.2.2
PROTEINBESTIMMUNG
-
MESSUNG
2
.
52
4.4.6
OSTEOCALCIN
.
53
4.4.7
COLLAGEN
.
54
4.4.8
VERGLEICH
STROMALE
KNOCHENMARKZELLEN/OSTEOBLASTEN
.
55
5
DISKUSSION
.
65
5.1
BEURTEILUNG
DER
VERWENDETEN
METHODEN
.
65
5.1.1
ZELLKULTUR.
.
65
5.1.2
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT.
.
67
5.1.3
INKORPORATION
VON
BROMODESOXYURIDIN
.
67
5.1.4
ZELLZAHL
.
68
5.1.5
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
.
69
5.1.6
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
.
70
5.1.7
OSTEOCALCINBESTIMMUNG
.
71
5.1.8
COLLAGENBESTIMMUNG
.
71
VIII
5.2
BEURTEILUNG
DER
ERGEBNISSE.
.
72
5.2.1
STROMALE
KNOCHENMARKZELLEN
.
72
5.2.2
OSTEOBLASTEN
.
73
5.2.3
VERGLEICH
STROMALE
KNOCHENMARKZELLEN/OSTEOBLASTEN
.
74
5.3.
DISKUSSION
IM
ZUSAMMENHANG
.
74
5.3.1
BEURTEILUNG
VON
ZELLMORPHOLOGIE
UND
WACHSTUMSVERHALTEN
.
74
5.3.2
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
.
75
5.3.3
BEURTEILUNG
DER
ERGEBNISSE
HINSICHTLICH
IHRER
UEBERTRAGBARKEIT
AUF
IN
VIVO-VERHAELTNISSE
.
78
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
SI
7
LITERATURHINWEISE.
.
83 |
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