Expression von Zellzyklus-regulierenden Proteinen im Zusammenhang mit Proliferation und programmiertem Zelltod von Keratinozyten:
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| Format: | Thesis Microfilm Book |
| Language: | German |
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
EINLEITUNG
A.L ZELLZYKLUSREGULATION.2
A. 1.1 ZYKLINE, ZYKLINABHAENGIGE KINASEN UND INHIBITOREN DER
ZYKLINABHAENGIGEN
KINASEN.2
A. 1.2 P53 UND RB.6
A.2 PROGRAMMIERTER ZELLTOD.14
A.2.1 TERMINALE DIFFERENZIERUNG.14
A.2.2 APOPTOSE.15
A.3 DIE EPIDERMIS - MODELLSYSTEM FUER ZELLZYKLUSREGULATION,
APOPTOSE UND DIFFERENZIERUNG.16
A. 3.1 AUFBAU UND DIFFERENZIERUNG DER EPIDERMIS.16
A.3.2 APOPTOSE IN DER EPIDERMIS.19
A. 4. ZIELSETZUNG.20
MATERIAL
B. L CHEMIKALIEN. 21
B.2 BIOCHEMISCHES MATERIAL.22
B.3 ANTIKOERPER.22
B.3.1 PRIMAERE ANTIKOERPER.22
B.3.2 SEKUNDAERE ANTIKOERPER UND SEREN.23
B.4 RADIOCHEMIKALIEN.23
B.5 MOLEKULARBIOLOGISCHES MATERIAL.24
B.5.1 PLASMIDE.24
B.6 ZELLKULTURMATERIAL.26
B. 6.1 MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR.26
B.7 SONSTIGES MATERIAL.27
B. 8 GERAETE.28
METHODEN
C. L ISOLATION STRATENSPEZIFISCHER ZELLFRAKTIONEN AUS
MAUSEPIDERMIS.29
C. 1.1 PRAEPARATION VON EPIDERMISZELLEN.29
C. 1.2 AUFTRENNUNG VON EPIDERMISZELLEN DURCH
DICHTEGRADIENTEN-ZENTRIFUGATION. 29
C.2 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN.31
C.2.1 KULTIVIERUNG VON KERATINOZYTEN.31
C.2.2 PASSAGIEREN VON KERATINOZYTEN.31
C.2.3 TRANSFEKTION UND KLONIERUNG VON ZELLEN.31
C.2.4 ENTKALZIFIZIERUNG DES SERUMS.32
C.3 ANALYSE ZELLULAERER PARAMETER.33
C.3.1 BESTIMMUNG DER DNA-SYNTHESERATE.33
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
C.3.2 ANALYSE DER ZELLZYKLUSPHASEN-VERTEILUNG.33
C.3.3 KERNFAERBUNG.34
C.4 BIOCHEMISCHE METHODEN.35
C.4.1 HERSTELLUNG VON ZELLEXTRAKTEN FUER DIE GELELEKTROPHORESE.35
C.4.2 PROTEINBESTIMMUNG MIT DEM DC PROTEIN ASSAY.35
C.4.3 SDS-GELELEKTROPHORESE.36
C.4.4 COOMASSIE-FAERBUNG VON SDS-POLYACRYLAMIDGELEN.36
C.4.5 HISTON-KINASE-TEST.37
C.4.6 TRANSGLUTAMINASE-ASSAY.38
C. 4.7 KERATINEXTRAKTION.39
C.4.8 MARKIERUNG VON PROTEINEN MIT 35S-METHIONIN.39
C.4.9 CAT-ASSAY (MANIATIS ET AL., 1989).40
C.4.10 LIPIDEXTRAKTION AUS ZELLEN.41
C.5 IMMUNOLOGISCHE METHODEN
.42
C.5.1 WESTERN-BLOT. 42
C.5.1.1 TRANSFERBEDINGUNGEN.42
C. 5.1.2 ANTIKOERPER-INKUBATION.42
C.5.1.3 DETEKTION MITTELS PEROXIDASE UND "ENHANCED CHEMILUMINESZENS".43
C.5.1.4 "STRIPPEN" VON PVDF-MEMBRANEN.43
C.5.2 IMMUNPRAEZIPITATION. 43
C.5.3 IMMUNFLUORESZENS.45
C.5.3.1 IMMUNFLUORESZENS VON ZELLEN IN KULTUR.45
C.5.3.2 IMMUNHISTOCHEMIE VON GEWEBESCHNITTEN.45
C.5.4 NACHWEIS VON P53 DURCH DURCHFLUSSZYTOMETRIE.46
C.6 MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN
.48
C.6.1 AUFZUCHT UND TRANSFORMATION VON BAKTERIEN.48
C.6.1.1 AUFZUCHT.48
C. 6.1.2 T RANSFORMATION.48
C.6.2 PRAEPARATION VON PLASMID-DNA AUS BAKTERIEN.49
C.6.3 KONZENTRATIONS- UND REINHEITSBESTIMMUNG VON DNA UND RNA.50
C.6.4 APOPTOSE NACHWEIS DURCH DNA-LEITER.50
C.6.5 ISOLIERUNG VON RNA NACH DER AGCP-METHODE.51
C.6.6 RNA-FAELLUNG UND PROBENVORBEREITUNG FUER MIDIGELE.52
C.6.7 PRAEPARATION VON DNA-FRAGMENTEN.52
C.6.8 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN.53
C.6.9 NORTHERN HYBRIDISIEUNG.53
C.6.9.1 DENATURIERENDE AGAROSE-GELELEKTROPHORESE.54
C.6.9.2. NORTHERN-BLOT (RNA-TRANSFER).54
C.6.9.3 NORTHERN HYBRIDISIERUNG MIT IN VITRO MARKIERTER DNA.56
C.6.9.4 STRIPPEN VON NORTHERN-BLOTS.57
C.6.10 REVERSE TRANSKRIPTION VON RNA.57
C.6.11 AMPLIFIKATION VON DNA.57
C.6.12 NICHTDENATURIERENDE GELELEKTROPHORESE VON DNA.59
INHALTSVERZEICHNIS
C.6.13
IN S/M-HYBRIDISIERUNG.59
C.6.13.1 FIXIERUNG UND EINBETTUNG VON GEWEBEN.59
C.6.13.2 HERSTELLUNG VON GEFRIERSCHNITTEN.60
C.6.13.3 VORBEREITUNG DER HYBRIDISIERUNGSPROBE.61
C.6.13.4 VORBEREITUNG DER SCHNITTE FUER DIE HYBRIDISIERUNG.63
C.6.13.5 HYBRIDISIERUNG.64
C.6.13.6 NACHHYBRIDISIEREN UND WASCHEN.,.65
C.6.13.7 AUTORADIOGRAPHIE.65
C. 6.13.8 FAERBUNG DER SCHNITTE.66
ERGEBNISSE
D. L DER NACHWEIS VON WACHSTUMS- UND DIFFERENZIERUNGS
RELEVANTEN FAKTOREN IN FRISCH ISOLIERTEN KERATINOZYTEN.67
D. 1.1 MERKMALE DER DIFFERENZIERUNG.67
D. 1.1.1 MORPHOLOGIE.7,.67
D.L.1.2 TRANSGLUTAMINASE-AKTIVITAET.68
D. 1.1.3 CHOLESTEROL-3-SULFAT.69
D.1.2 ZELLZYKLUS-ANALYSE.69
D. 1.3 EXPRESSION VON ZELLZYKLUS-REGULIERENDEN PROTEINEN.71
D. 1.3.1 ZYKLINABHAENGIGE KINASEN.71
D.L.3.2 ZYKLINE. .72
D.L.3.3 CDK-INHIBITOR P21CIPL.74
D. 1.3.4 HL-KINASE-AKTIVITAET DER ZYKLINABHAENGIGEN KINASEN.75
D.1.4. EXPRESSION DES RETINOBLASTOM-PROTEINS RB.76
D. 1.5 EXPRESSION DES TUMORSUPPRESSORS P53.77
D. 1.5.1 IN SITU-HYBRIDISIERUNG VON HAUTSCHNITTEN MIT EINER P53-PROBE.77
D. 1.5.2 NACHWEIS VON P53-MRNA IN DEN FRAKTIONEN DURCH RT-PCR.78
D. 1.5.3 ANALYSE VON P53 IN DER EPIDERMIS DURCH IMMUNHISTOCHEMIE.79
D. 1.5.4 ANALYSE DER P53-PROTEIN-EXPRESSION MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE.80
D. 1.5.5 ANALYSE VON P53-PROTEIN DURCH IMMUNPRAEZIPITATION.81
D. 1.6 UNTERSUCHUNGEN AN TRANSGENEN MAEUSEN, DIE EIN CAT-GEN UNTER EINEM
P53-PROMOTOR TRAGEN.83
D.2 DIFFERENZIERUNG VON PRIMAEREN KERATINOZYTENKULTUREN.84
D.2.1 DIFFERENZIERUNGSMARKER.84
D.2.1.1 MORPHOLOGIE.84
D.2.1.2 TRANSGLUTAMINASE-AKTIVITAET.85
D.2.1.3 CHOLESTEROL-3-SULFAT.86
D.2.2 PROLIFERATIONSMARKER.88
D.2.2.1 DURCHFLUSSZYTOMETRIE.88
D.2.2.2 DNA-SYNTHESERATE.89
D.2.3 EXPRESSION VON ZELLZYZKLUS-REGULIERENDEN PROTEINEN.90
D.2.3.1 ZYKLINABHAENGIGE KINASEN.90
D.2.3.2 ZYKLINE.91
INHALTSVERZEICHNIS
D.2.3.3 CDK-INHIBITOR P21CIPL.93
D.2.3.4 HL-KINASE-AKTIVITAET DER ZYKLINABHAENGIGEN KINASEN.94
D.2.3.5 RETINOBLASTOM-PROTEIN RB.95
D.2.3.6 TUMORSUPPRESSOR P53.96
D.2,3.6.1 EXPRESSION DER P53-MRNA.96
D.2.3.6.2 EXPRESSION VON P53 PROTEIN.96
D.3 DIFFERENZIERUNGSVERHALTEN VON ZELLEN NACH AUSCHALTUNG VON
P53 UND UNTERPHOSPHORYLIERTEM RB.98
D.3.1 EXPRESSION VON T-ANTIGEN.98
D.3.2 BINDUNG VON RB UND P53 AN T-ANTIGEN.100
D.3.2.1 KOIMMUNPRAEZIPITATION VON RB.100
D.3.2.2 KOIMMUNPRAEZIPITATION VON P53.101
D.3.2.3. KOLOKALISATION VON P53 UND T-ANTIGEN.104
D.3.3 EINFLUSS DER SV40-TRANSFORMATION AUF VERSCHIEDENE DIFFERENZIERUNGS
UND PROLIFERATIONSPARAMETER.106
D. 3.3.1 MORPHOLOGIE UND PROLIFERATIONSFAEHIGKEIT.106
D.3.3.2 ZELLZYKLUS-REGULIERENDE PROTEINE.108
D.3.3.2.1 ZYKLINA.108
D.3.3.2.2 TUMORSUPPRESSORPROTEIN RB.109
D.3.3.2.3 TUMORSUPPRESSORPROTEIN P53.,.110
D.3.3.3 DIFFERENZIERUNGSPARAMETER.110
D.3.3.3.1 TRANSGLUTAMINASE-AKTIVITAET.111
D.3.3.3.2 CHOLESTEROL-3-SULFAT.112
D.3.3.3.3 KERATINMUSTER.113
D.4 APOPTOSE BEI KERATINOZYTEN. 115
D.4.1 UNTERSUCHUNGEN AN FRISCH ISOLIERTEN EPIDERMISZELLEN.115
D.4.1.1 NACHWEIS VON DNA-FRAGMENTIERUNG DURCH GELELEKTROPHORESE.115
D.4.1.2 DURCHFLUSSZYTOMETRIE.115
D.4.2 UNTERSUCHUNGEN AN PRIMAEREN KERATINOZYTENKULTUREN.117
D.4.2.1 MORPHOLOGIE.117
D.4.2.2 NACHWEIS VON DNA-FRAGMENTIERUNG DURCH GELELEKTROPHORESE.118
D.4.2.3 NACHWEIS VON DNA-FRAGMENTIERUNG MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE.119
D.4.2.4 IDENTIFIZIERUNG DER APOPTOTISCHEN ZELLEN ALS KERATINOZYTEN.120
D.4.2.5 APOPTOSERATE IN ABHAENGIGKEIT VON DER ZELLDICHTE.121
D.4.2.6 APOPTOSERATE IN ABHAENGIGKEIT VON DER KALZIUMKONZENTRATION.122
D.4.3 PRIMAERE KERATINOZYTEN UNTER PROLIFERATIONS- UND DIFFERENZIERUNGS
FOERDERNDEN KULTURBEDINGUNGEN.124
D.4.3.1 DNA-FRAGMENTIERUNG IN ZELLRASEN UND UEBERSTAND.124
D.4.3.2 KINETIK.125
D.4.3.3 KERNMORPHOLOGIE IM VERGLEICH VON PRIMAEREN KERATINOZYTEN UNTER
PROLIFERATIONS- UND DIFFERENZIERUNGSFOERDERNDEN KULTURBEDINGUNGEN.127
D.4.3.4 ANALYSE DES CHOLESTEROL-3-SULFAT GEHALTES.128
INHALTSVERZEICHNIS
DISKUSSION
E.L VERGLEICH VON DIFFERENZIERUNG IM GEWEBEVERBAND UND IN
KULTUR.130
E.2 ANALYSE VON ZELLZYKLUS-RELEVANTEN PARAMETERN.131
E.2.1 ZYKLINE, ZYKLINABHAENGIGE KINASEN UND DER INHIBITOR P21 CIP 1.131
E.2.2 EXPRESSION VON RB.134
E.2.3 REGULATION UND MOEGLICHE BEDEUTUNG VON P53.135
E.3 APOPTOSE.141
E.4 SCHLUSSFOLGERUNGEN UND AUSBLICK.147
ZUSAMMENFASSUNG
.148
ABKUERZUNGEN
.150
LITERATUR
152 |
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| author | Rehberger, Petra Andrea |
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| spelling | Rehberger, Petra Andrea Verfasser aut Expression von Zellzyklus-regulierenden Proteinen im Zusammenhang mit Proliferation und programmiertem Zelltod von Keratinozyten von Petra Andrea Rehberger [Mikrofiche-Ausg.] 1996 170 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent h rdamedia he rdacarrier Heidelberg, Univ., Diss., 1996 Mikroform-Ausgabe Mikrofiche-Ausg.: 3 Mikrofiches : 24x Proteine (DE-588)4076388-2 gnd rswk-swf Zelldifferenzierung (DE-588)4067536-1 gnd rswk-swf Genregulation (DE-588)4122166-7 gnd rswk-swf Zellzyklus (DE-588)4129960-7 gnd rswk-swf Keratinozyt (DE-588)4293091-1 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Keratinozyt (DE-588)4293091-1 s Zelldifferenzierung (DE-588)4067536-1 s Proteine (DE-588)4076388-2 s Genregulation (DE-588)4122166-7 s Zellzyklus (DE-588)4129960-7 s DE-604 Reproduktion von Rehberger, Petra Andrea Expression von Zellzyklus-regulierenden Proteinen im Zusammenhang mit Proliferation und programmiertem Zelltod von Keratinozyten 1996 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007390413&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
| spellingShingle | Rehberger, Petra Andrea Expression von Zellzyklus-regulierenden Proteinen im Zusammenhang mit Proliferation und programmiertem Zelltod von Keratinozyten Proteine (DE-588)4076388-2 gnd Zelldifferenzierung (DE-588)4067536-1 gnd Genregulation (DE-588)4122166-7 gnd Zellzyklus (DE-588)4129960-7 gnd Keratinozyt (DE-588)4293091-1 gnd |
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