Wirkungen von Methylnitrosoharnstoff auf Gehirnzellen des Hühnerembryos: Versuche zum Nachweis einer adaptiven Reaktion
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
PROBLEMSTELLUNG
7
2.
EINLEITUNG
8
2.1.
ADAPTIVE
REAKTIONEN
8
2.2.
INDUZIERTE
STRAHLENRESISTENZ
15
2.3.
ZUR
WIRKUNG
VON
ALKYLANTIEN
AUF
DEN
HUEHNEREMBRYO
22
2.3.1.
ALLGEMEINE
GESICHTSPUNKTE
22
2.3.2.
ALKYLIERENDE
UND
VERNETZENDE
AGENTIEN
BEIM
HUEHNEREMBRYO
23
2.3.3.
ZUR
REPARATUR
VON
DNA-ALKYLADDUKTEN
IM
HUEHNEREMBRYO
25
2.4.
N-NITROSO-N-METHYLHAMSTOFF
(METHYLNITROSOHAMSTOFF,
MNU)
27
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
32
3.1.
REAGENTIEN
32
3.2.
LOESUNGEN
35
3.3.
TIERMATERIAL
37
3.4.
VERSUCHSMETHODEN
37
3.4.1.
BEHANDLUNG
DER
HUEHNEREMBRYONEN
37
3.4.1.1.
IN
VITRO-APPLIKATION
VON
METHYLNITROSOHAMSTOFF
(MNU)
37
3.4.1.2.
IN
VIVO-APPLIKATION
VON
MNU
38
3.4.1.3.
IN
VITRO-APPLIKATION
VON
ETHIDIUMBROMID
(EB)
38
3.4.1.4.
IN
VITRO-ROENTGENBESTRAHLUNG
39
3.4.1.5.
IN
VITRO-UV-BESTRAHLUNG
39
3.4.2.
GEWINNUNG
DER
ZELLEN
39
3.4.2.1.
GEHIRNZELLEN
39
3.4.2.2.
LEBERZELLEN
40
3.4.3.
BESTIMMUNG
DER
DNA-SYNTHESE
41
3.4.3.1.
SEMIKONSERVATIVE
DNA-SYNTHESE
(SDS)
41
3.4.3.2.
UNPROGRAMMIERTE
DNA-SYNTHESE
(UDS)
43
3.4.4
O
6
-ALKYLGUANIN-DNA-ALKYLTRANSFERASE
(AT)
43
3.4.5.
VISKOSIMETRIE
ALKALISCHER
ZELLYSATE
45
3.4.6.
3
5.
NUCLEOIDSEDIMENTATION
AUSWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
46
47
4
ERGEBNISSE
48
4.1.
IN
VITRO-VERSUCHE
48
4.1.1.
3
H-DT-EINBAU
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
METHYLNITROSOHAMSTOFF
(MNU)-KONZENTRATION
48
4.1.1.1.
SEMIKONSERVATIVE
DNA-SYNTHESE
(SDS)
48
4.1.1.2.
UNPROGRAMMIERTE
DNA-SYNTHESE
(UDS)
50
4.12.
VISKOSITAET
ALKALISCHER
ZELLYSATE
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MNU
KONZENTRATION
51
4.1.3.
NUCLEOIDSEDIMENTATION
52
4.1.3.1.
NUCLEOIDSEDIMENTATION
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
ZELLDICHTE
52
4.1.32.
NUCLEOIDSEDIMENTATION
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
DIMETHYL
SULFOXID
(DMSO)-KONZENTRATION
53
4.1.33.
NUCLEOIDSEDIMENTATION
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MNU
KONZENTRATION
UND
DER
INKUBATIONSZEIT
55
4.1
3
4.
NUCLEOIDSEDIMENTATION
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
ETHIDIUMBROMID
(EB)-KONZENTRATION
57
4.1
3.5.
NUCLEOIDSEDIMENTATION
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MNU
KONZENTRATION
IN
GEGENWART
VON
EB
58
4.1.4.
O
6
-ALKYLGUANIN-DNA-ALKYLTRANSFERASE
(AT)
61
4.2.
IN
VIVO-VERSUCHE
62
4.2.1.
3
H-DT-EINBAU
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MNU-DOSIS
UND
DER
BEBRUETUNGSZEIT
63
4.2.1.1.
SEMIKONSERVATIVE
DNA-SYNTHESE
(SDS)
63
4.2.1.2.
UNPROGRAMMIERTE
DNA-SYNTHESE
(UDS)
64
4.2.2.
VISKOSITAET
ALKALISCHER
ZELLYSATE
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MNU-DOSIS
UND
DER
BEBRUETUNGSZEIT
65
4.2.3.
NUCLEOIDSEDIMENTATION
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MNU-DOSIS
UND
DER
BEBRUETUNGSZEIT
66
4.2.4.
O
6
-ALKYLGUANIN-DNA-ALKYLTRANSFERASE
(AT)
68
4.3.
VERSUCHE
ZUM
NACHWEIS
EINER
ADAPTIVEN
REAKTION
GEGENUEBER
MNU
70
4.3.1.
'
H-DT-EINBAU
71
43.1.1.
SEMIKONSERVATIVE
DNA-SYNTHESE
(SDS)
71
43.1.2.
UNPROGRAMMIERTE
DNA-SYNTHESE
(UDS)
75
4.3.2.
VISKOSITAET
ALKALISCHER
ZELLYSATE
77
4.4.
VERSUCHE
ZUM
NACHWEIS
EINER
ADAPTIVEN
REAKTION
GEGENUEBER
BESTRAHLUNG
80
4.4.1.
ROENTGENSTRAHLEN
80
4.4.2.
UV-LICHT
84
5.
DISKUSSION
85
6.
ZUSAMMENFASSUNG
95
7
LITERATURVERZEICHNIS
97 |
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