Untersuchungen zur Alzheimerschen Krankheit und Herstellung und Analyse einer für das humane Trypsinogen-IV transgenen Maus:
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
A.
EINLEITUNG
1
A.1.
DIE
ALZHEIMERSCHE
KRANKHEIT
1
A.1.2.
SS-AMYLOID
UND
DAS
AMYLOID-VORLAEUFERPROTEIN
2
A.1.3.
AMYLOID-SEKRETION
UND
PROTEOLYTISCHE
METABOLISIERUNG
4
A.1.4.
APP-MUTATIONEN
UND
FAD
6
A.1.5.
APOLIPOPROTEIN
E
EIN
RISIKOFAKTOR
9
A.2.
PROTEASEN
10
A.2.1.
TRYPSIN
PROTEASEN
12
A.3.
ZIELE
DER
ARBEIT
14
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
15
B.1.
MATERIALIEN
15
B.1.1
CHEMIKALIEN
15
B.1.2.
ENZYME
15
B.1.3.
BAKTERIENSTAEMME
15
B.1.4.
PLASMIDE
UND
BAKTERIOPHAGEN
15
B.1.5.
MAEUSE
15
B.1.6.
MEDIEN
UND
PLATTEN
16
B.1.7.
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
16
B.1.8.
ANTIKOERPER
16
B.1.9.
PUFFER
UND
LOESUNGEN
17
B.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
17
B.2.1.
PLASMIDPRAEPARATIONEN
17
B.2.2
DNA-REINIGUNG
17
B.2.3
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
AUS
GEWEBEN
18
B.2.4.
GELELEKTROPHORESE
18
B.2.5.
TRANSFORMATION
VON
PLASMIDEN
18
B.2.6.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN
1
SS
B.2.7.
SEQUENZIERUNG
DOPPELSTRAENGIGER
DNA
18
B.2.8.
REINIGUNG
VON
LEUKOZYTEN
AUS
BLUT
18
_
INHALTSVERZEICHNIS
B.2.9.
PCR
VON
LEUKOZYTEN
19
B.2.10.
REINIGUNG
VON
DNA
AUS
PARAFFINIERTEN
GEWEBESCHNITTEN
20
B.2.11.
APOLIPOPROTEIN
GENOTYPBESTIMMUNG
20
B.2.12.
HERSTELLUNG
UND
EINSATZ
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA
SONDEN
20
B.2.13.
"SOUTHERN
BLOT"
21
B.2.14.
VERWENDETE
DNA-SONDEN
21
B.2.15.
REINIGUNG
VON
RNA
AUS
GEWEBE
21
B.2.16.
MRNA
ANALYSE
AUS
TRANSGENEN
MAEUSEN
22
B.2.17.
HERSTELLUNG
UND
REINIGUNG
DES
DNA-FRAGMENTES
ZUR
MIKROINJEKTION
23
B.2.18.
"NORTHERN
BLOT"
23
B.2.19.
PROTEINEXTRAKTION
AUS
MAUS-GEWEBE
24
B.2.20.
SDS-POLYACRYAMID
GELELEKTROPHORESE
24
B.2.21.
"WESTERN
BLOT"
24
B.2.22.
IMMUNOHISTOCHEMISCHE
ANALYSE
25
B.3.
EMBRYOLOGISCHE
METHODEN
2
6
B.3.1.
GEWINNUNG
UND
ENTNAHME
VON
BEFRUCHTETEN
MAUS-OOCYTEN
26
B.3.2.
OOCYTEN-MIKROINJEKTION
26
B.3.3.
BETAEUBUNG
VON
MAEUSEN
27
B.3.4.
CHIRURGISCHE
EINGRIFFE
BEI
MAEUSEN
27
B.3.4.1
VASEKTOMIE
27
B.3.4.
2
REIMPLANTATION
VON
INJIZIERTEN
MAUS-OOCYTEN
28
C.
ERGEBNISSE
2
9
C.1.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SSA4-DNA-SEQUENZ
2
9
C.1.1.
ANALYSE
DER
SSA4-DNA-SEQUENZ
AUS
GEWEBESCHNITTEN
29
C.1.2.
ANALYSE
DER
SSA4-DNA-SEQUENZ
AUS
BLUTPROBEN
34
C.2.
APOE-GENOTYP
BESTIMMUNG
DER
SPENDER
VON
GEWEBE
UND
BLUTPROBEN
3
5
C.3.
HERSTELLUNG
UND
ANALYSE
EINER
FUER
DAS
MENSCHLICHE
TRYPSINOGEN-IV
TRANSGENEN
MAUS
3
8
C.3.1.
HERSTELLUNG
DES
INJEKTIONSKONSTRUKTES
38
C.3.2.
HERSTELLUNG
TRANSGENER
MAEUSE
42
C.3.3.
"SOUTHERN
BLOT"
ANALYSE
42
C.3.4.
RNA-ANALYSEN
45
C.3.5.
"WESTERN
BLOT"
ANALYSE
47
INHALTSVERZEICHNIS
C.3.6.
IMMUNOHISTOCHEMISCHE
ANALYSE
VON
GEHIRN-GEWEBESCHNITTEN
48
C.3.6.1.
FAERBUNG
MIT
ANTI-TRYPSIN
ANTIKOERPERN
49
C.3.6.2.
FAERBUNG
MIT
ANTI-GFAP
ANTIKOERPERN
53
C.3.6.3.
FAERBUNG
MIT
EINEM
ANTI-CD11B(CR3)
ANTIKOERPER
57
C.3.6.4.
FAERBUNG
MIT
EINEM
ANTI-SSA4
ANTIKOERPER
59
D.
DISKUSSION
6
2
D.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ALZHEIMERSCHEN
KRANKHEIT
6
2
D.1.1.
MUTATIONEN
IN
DER
SSA4-SEQUENZ
SIND
SEHR
WAHRSCHEINLICH
NICHT
DIE
URSACHE
FUER
EINE
DEUTLICH
GERINGER
ANZAHL
VON
SENILEN
PLAQUES
IM
GEHIRN
62
D.1.2.
APOLIPOPROTEIN-E
GENOTYP
63
D.2.
HERSTELLUNG
EINER
FUER
DAS
HUMANE
TRYPSINOGEN-IV
TRANSGENEN
MAUS
6
5
D.2.1.
DIE
TRANSGENEN
MAEUSE
PRAEGEN
SPEZIFISCH
TRYPSINOGEN-IV
IM
GEHIRN
AUS
66
D.2.2.
DETEKTION
VON
TRYPSINOGEN-IV
IM
ZYTOPLASMA
VON
NERVEN
ZELLEN
AELTERER
TRANSGENER
MAEUSE
66
D.2.3.
DIE
ASTROZYTEN
IM
GEHIRN
VON
TRANSGENEN
TIEREN
ZEIGEN
EINE
DRASTISCH
ERHOEHTE
GFAP-EXPRESSION
67
D.2.4.
BEI
DEN
TRANSGENEN
MAEUSE
SIND
KEINE
VERAENDERUNGEN
DER
MIKROGLIAZELLEN
ZU
BEOBACHTEN
70
D.2.5
SS-AMYLOID
PRODUKTION
IN
DEN
TRANSGENEN
MAEUSEN
71
D.2.6
ALTE
TRYPSINOGEN-IV
TRANSGENE
MAEUSE
ZEIGEN
SUBTILE
VERHALTENSAENDERUNGEN
73
E.
ZUSAMMENFASSUNG
7
4
F.
LITERATURVERZEICHNIS
7
5
G.
ANHANG
8
6
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF |
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