Struktur- und Funktionsanalyse von fla- und mot-Genen aus Rhizobium meliloti:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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| adam_text | O STRUKTUR- UND FUNKTIONSANALYSE VON/7A- UND MOT-GENEN AUS RHIZOBIUM
MELILOTI DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER
NATURWISSENSCHAFTEN (DR.RER.NAT.) DER NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET
III - BIOLOGIE UND VORKLINISCHE MEDIZIN - DER UNIVERSITAET REGENSBURG
VORGELEGT VON JOSEF PLATZER AUS EICHSTAETT REGENSBURG 1996
INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 2 MATERIAL 9 2.1 ORGANISMEN UND
VEKTOREN 9 2.2 HERKUNFT VON CHEMIKALIEN UND ENZYMEN 11 2.3 VERWENDETE
OLIGONUKLEOTIDE 12 2.4 NAEHRMEDIEN UND ANTIBIOTIKA 15 2.4.1 MEDIEN FUER
DIE ANZUCHT VON E.COLI 15 2.4.2 MEDIEN FUER DIE ANZUCHT VON RMELILOTI 16
2.5 PUFFER 17 3 METHODEN 22 3.1 KULTIVIERUNG VON BAKTERIEN 22 3.1.1
ANZUCHT UND LAGERUNG VON E.COLI 22 3.1.2 ANZUCHT VON R. MELILOTI 22
3.1.3 KREUZUNGEN . 22 3.2 ISOLIERUNG UND REINIGUNG VON NUKLEINSAEUREN 23
3.2.1 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA AUS E. COLI 23 3.2.2 ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER DNA AUS RMELILOTI 23 3.2.3 AUFTRENNUNG VON DNA DURCH
AGAROSEGELELEKTROPHORESE 24 3.2.4 ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUS
AGAROSEGELEN UND REINIGUNG - 24 3.2.5 REINIGUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN 24
3.2.6 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN 25 3.3 PCR-M ETHODEN
25 3.3.1 THERMOSTABILE POLYMERASEN 25 3.3.2 REAKTIONSBEDINGUNGEN 26
3.3.3 PCR-MUTAGENESE 26 3.3.4 KLONIERUNG VON PCR-PRODUKTEN ~ 27 3.4
ENZYMATISCHE MODIFIZIERUNG VON DNA 27 3.4.1 BEHANDLUNG VON DNA-ENDEN MIT
KLENOW-POLYMERASE 27 3.4.2 DEPHOSPHORYLIERUNG VON DNA-ENDEN 27 3.4.3
LIGIEREN VON DNA-FRAGMENTEN MIT VEKTOR-DNA , 28 3.5 DNA-SEQUENZANALYSE
28 3.5.1 SEQUENZ-REAKTION 28 3.5.2 SEQUENZ-GELELEKTROPHORESE 28 3.6
NICHT-RADIOAKTIVE SOUTHERN BLOT ANALYSE VON DNA 29 3.6.1 UEBERTRAGUNG VON
DNA AUS AGAROSEGELEN AUF NYLON-FILTER (SOUTHERN BLOT) 29 3.6.2 NICHT
RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA-SONDEN 29 3.6.3 PRAEHYBRIDISIERUNG,
HYBRIDISIERUNG UND DETEKTION 29 3.7 EXPRESSION UND REINIGUNG VON
REKOMBINANTEN PROTEINEN 30 3.7.1 EXPRESSION VON REKOMBINANTEN MOTC IN
E.COLI 30 3.7.2 ANZUCHT DER ZELLEN UND INDUKTION DER REMOTC-EXPRESSION
30 3.7.3 AUFSCHLUSS UND GEWINNUNG VON INCLUSION-BODIES AUS E.COLI 31
3.7.4 CHROMATOGRAPHISCHE REINIGUNG REKOMBINANTEN MOTC-PROTEINS 31
INHALTSVERZEICHNIS 3.7.4.1 REINIGUNG UNTER NATIVEN BEDINGUNGEN 31
3.7.4.2 REINIGUNG UNTER DENATURIERENDEN BEDINGUNGEN 31 3.8
PROTEINCHEMISCHE METHODEN 32 3.8.1 KOPPLUNG SYNTHETISCHER PEPTIDE AN KLH
(KEYHOLE LIMPET HEMOCYANIN) 32 3.8.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION
32 3.8.3 KONZENTRIERUNG VON PROTEINLOESUNGEN 32 3.8.4 AUFTRENNUNG VON
PROTEINEN DURCH SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 33 3.8.5
ANFAERBEN VON SDS-GELEN DURCH COOMASSIE-BLAU 33 3.8.6 TRANSFER
AUFGETRENNTER PROTEINE AUF NITROZELLULOSE-FILTER (WESTERN BLOT) 33 3.8.7
IMMUNCHEMISCHER NACHWEIS VON PROTEINEN DURCH CHEMILUMINESZENZ 33 3.9
PRODUKTION VON ANTIKOERPERN 34 3.9.1 IMMUNISIERUNG VON KANINCHEN 34 3.9.2
GEWINNUNG DER SEREN 34 3.9.3 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE REINIGUNG DER
ROHSEREN 34 3.9.3.1 PROTEIN A SEPHAROSE 34 3.9.3.2 NICKEL-NTA SEPHAROSE
34 3.10 COMPUTERGESTUETZTE AUSWERTUNG DER DNA- UND PROTEINSEQUENZEN 35 4
ERGEBNISSE 36 4.1 KLONIERUNG UND IDENTIFIZIERUNG DER FLA-MOT REGION VON
RHIZOBIUM MELILOTI RULL/001 36 4.2 PHYSIKALISCHE KARTE DER/FA-MOF-REGION
38 4.3 GENE DES BASALKOERPERS 40 4.3.1 DIE PROTEINE DES ZENTRALEN
SCHAFTES 44 4.3.1.1 F/GC (PROXIMALER ZENTRALER SCHAFT) , 44 4.3.1.2 FIGG
(DISTALER ZENTRALER SCHAFT) 46 4.3.2 DIE RING-STRUKTURPROTEINE 47
4.3.2.1 F/GI(P-RING) 47 4.3.2.2 F/GH(L-RING) 49 4.3.3 HILFS- UND
GERUESTPROTEINE DES BASALKOERPERKOMPLEXES 50 4.3.3.1 FLIE (MS-RING
ADAPTER) 50 4.3.3.2 FLGA (P-RING ADAPTER) 51 4.3.4 ZUSAETZLICHE
FUNKTIONEN 53 4.3.4.1 OAEF6. 53 4.3.4.2. FLIL 54 4.3.4.3 FLIP. 55 4.4
GENE DES FLAGELLUMS 58 4.4.1 DIE FLAGELLINGENE. 60 4.4.2 FLAC. 64
4.4.3 ORFL4. 68 4.5 GENE DER MOTORKOMPONENTEN 70 4.5.1 EIGENSCHAFTEN DER
AMINOSAEURESEQUENZEN 72 4.5.1.1 MOTB. 72 4.5.1.2MOTC 74 4.5.1.3 MOTD 75
4.5.2 FUNKTIONELLE ANALYSEN DER MOR-GENE 76 4.5.2.1 MOM. 77 4.5.2.2
MOTC. 78 4.5.2.3 MOIQ. 80 INHALTSVERZEICHNIS III 5 DISKUSSION 82 5.1
GENORGANISATION 82 5.2 DER BASALKOERPER 85 5.3 FILAMENT 86 5.4 DIE
MOTORFUNKTIONEN 90 5.5 AUSBLICK 94 6 ZUSAMMENFASSUNG 96 7
LITERATURVERZEICHNIS 98
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