Untersuchungen zur Metabolisierung von polycyclischen aromatischen Kohlenwasserstoffen durch imperfekte Pilze:
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KOHLENWASSERSTOFFEN DURCH IMPERFEKTE PILZE VOM FACHBEREICH BIOLOGIE DER
UNIVERSITAET KAISERSLAUTERN ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES DOKTOR
DER NATURWISSENSCHAFTEN GENEHMIGTE DISSERTATION (D386) VORGELEGT VON
THOMAS WUNDER VORSITZENDER: PROF. DR. H. HUBER 1. BERICHTERSTATTER:
PROF. DR. H. ANKE 2. BERICHTERSTATTER: PROF. DR. J.A. CULLUM TAG DER
WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE 16. FEBRUAR 1996 KAISERSLAUTERN 1996 1.
EINLEITUNG 1 2. MATERIAL UND METHODEN 6 2.1. CHEMIKALIEN 6 2.2.
NAEHRMEDIEN 8 2.2.1. MEDIEN FUER PILZE 9 2.2.2. MEDIEN FUER BAKTERIEN 10
2.2.3. MEDIEN FUER ZELLKULTUREN 10 2.2.4. PUFFER- UND
SPURENELEMENTLOESUNGEN 11 2.3. VERWENDETE ORGANISMEN 13 2.3.1. PILZSTAEMME
AUS DER STAMMSAMMLUNG 13 2.3.2. PILZISOLATE AUS DEN VERSUCHSBOEDEN 14
2.3.3. TESTSTAEMME FUER DEN REIHENVERDUENNUNGSTEST 15 2.3.4. ZELLKULTUREN
16 2.3.4.1. SUSPENSIONSZELLKULTUREN 2.3.4.2. MONOLAYERKULTUREN 2.3.5.
NEMATODEN : 17 2.4. VERSUCHSBOEDEN 17 2.4.1. HERKUNFT UND
CHARAKTERISIERUNG 17 2.4.2. PAK-GEHALTE DER VERSUCHSBOEDEN 17 2.4.2.1.
BODEN A 18 2.4.2.2. BODEN B 19 2.4.3. BEARBEITUNG UND LAGERUNG 20 2.4.4.
BESTIMMUNG DES BODENWASSERGEHALTES BZW. DER TROCKEN- SUBSTANZ (TS) 21
2.4.5. BESTIMMUNG DER MAXIMALEN WASSERHALTEKAPAZITAET (WHC M AX) 21
2.4.6. ISOLIERUNG, ANREICHERUNG UND QUANTIFIZIERUNG VON MIKRO-
ORGANISMEN 21 2.4.6.1. PILZE 2.4.6.2. BAKTERIEN 22 2.5. ABBAUVERSUCHE IN
SUBMERSKULTUR 22 2.5.1. FERMENTATION IN SCHUETTELKOLBEN 22 2.5.2.
FERMENTATION IM 20L-MASSSTAB 24 2.5.3. BODENSUSPENSIONSKULTUREN
(SLURRY-KULTUREN) 24 2.6. ABBAUVERSUCHE IM BODEN 25 2.6.1. HERSTELLUNG
DER SPOREN- UND BAKTERIENSUSPENSION 25 2.6.2. UNTERSUCHUNGEN ZUM ABBAU
IM BODEN 25 2.7. ANALYTIK 26 2.7.1. PROBENAUFARBEITUNG ZUR QUANTITATIVEN
UND QUALITATIVEN HPLC-ANALYSE 26 2.7.1.1. PROBEN AUS SCHUETTELKOLBEN
21. S.2. FERMENTATIONSPROBEN 2.7.1.3. PROBEN AUS
BODENSUSPENSIONSKULTUREN 2.7.1.4. BODENPROBEN AUS ABBAUVERSUCHEN IM
BODEN 27 2.7.2. HPLC-ANALYTIK 27 2.7.2.1. GERAETE 2.7.2.2.
HPLC-ANALYSENPARAMETER 28 2.7.2.3. QUANTITATIVE UND QUALITATIVE ANALYSEN
30 2.7.3. DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE (DC) 32 2.7.4.
FERMENTATIONSANALYTIK 32 2.7.4.1. ABGASANALYSE 2.7.4.2.
GLUCOSE-/MALTOSEBESTIMMUNG 33 2.7.4.3. MYZELTROCKENGEWICHT 2.7.5.
RADIOAKTIVITAETSANALYTIK 33 2.7.5.1. BESTIMMUNG DER RADIOAKTIVITAET IM
KULTURFILTRAT UND MYZEL 2.7.5.2. ERSTELLUNG VON
RADIO-HPLC-CHROMATOGRAMMEN 34 2.8. ISOLIERUNG UND IDENTIFIZIERUNG VON
METABOLITEN 34 2.8.1. EXTRAKTION DER FERMENTERINHALTE 34 2.8.2.
PRAEPARATIVE SAEULENCHROMATOGRAPHIE 34 2.8.2.1. FESTPHASENEXTRAKTION (SPE)
2.8.2.2. SAEULENCHROMATOGRAPHIE 35 2.8.2.3. PRAEPARATIVE HPLC *. 2.8.3.
SPEKTROSKOPISCHE METHODEN 36 2.8.3.1. UV-SPEKTROSKOPIE 2.8.3.2.
NMR-SPEKTROSKOPIE 2.8.3.3. MASSENSPEKTROMETRIE 2.8.4. ENZYMATISCHE
METHODEN : 36 2.9. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON METABOLITEN 37
2.9.1. TEST AUF ZYTOTOXIZITAET 37 2.9.1.1. MONOLAYERKULTUREN 2.9.1.2.
SUSPENSIONSZELLKULTUREN 2.9.2. MINIMALE INHIBITORISCHE KONZENTRATION IM
REIHENVERDUEN- NUNGSTEST (MI K) 38 2.9.3. TEST AUF NEMATIZIDE WIRKUNG 38
3. ERGEBNISSE 39 3.1. METABOLISIERUNG VON PYREN IN SUBMERSKULTUR 39
3.1.1. METABOLISIERUNG VON PYREN DURCH A. NIGERSK93M 39 3.1.1.1.
FERMENTATION IM 20L-MASSSTAB 40 3.1.1.2. ISOLIERUNG UND IDENTIFIZIERUNG
VON PYRENMETABO- LITEN 42 3.1.1.3. BILANZIERUNG DER METABOLISIERUNG VON
PYREN DURCH EINSATZ VON [4,5,9,10-I4C]PYREN 49 3.1.1.4. UMSETZUNG
ZUGEGEBENER PYRENMETABOLITEN 52 3.1.2. METABOLISIERUNG VON PYREN DURCH
VERSCHIEDENE A. NIGER- STAEMME 54 3.1.2.1. QUANTITATIVE UMSETZUNG VON
PYREN 3.1.2.2. GEBILDETE PYRENMETABOLITEN 3.1.3. METABOLISIERUNG VON
PYREN DURCH VERSCHIEDENE ASPERGILLUS SPECIES 56 3.1.3.1. QUANTITATIVE
UMSETZUNG VON PYREN 3.1.3.2. GEBILDETE PYRENMETABOLITEN 3.1.4.
METABOLISIERUNG VON PYREN DURCH ASPERGILLUS TERREUS ATCC 20542 58
3.1.4.1. FERMENTATION IM 20L-MASSSTAB 3.1.4.2. ISOLIERUNG UND
IDENTIFIZIERUNG NEUER PYRENMETA- BOLITEN AUS KULTUREN VON A. TERREUS 60
3.1.4.3. UMSETZUNG ZUGEGEBENER PYRENMETABOLITEN 66 3.1.5.
METABOLISIERUNG VON PYREN DURCH VERSCHIEDENE ARTEN DER ASPERGILLUS
GLAUCUS-GRUPPE (GATTUNG EUROTIUM) 68 3.1.6. METABOLISIERUNG VON PYREN
DURCH PILZISOLATE AUS KONTAMI- NIERTEM BODEN 70 3.1.6.1. QUANTITATIVE
UMSETZUNG VON PYREN 71 3.1.6.2. GEBILDETE PYRENMETABOLITEN 3.1.7.
METABOLISIERUNGVON PYREN DURCH PENICILLIUM SP. TW 9424 ....74 3.1.7.1.
ISOLIERUNG UND IDENTIFIZIERUNG NEUER PYRENMETA- BOLITEN AUS PENICILLIUM
SP. TW 9424 3.1.7.2. MARKIERUNG MIT [METHYL-3H]SAM 81 3.1.7.3. UMSETZUNG
ZUGEGEBENER PYRENMETABOLITEN 3.2. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG
ISOLIERTER PYRENMETABOLITEN 83 3.2.1. ZYTOTOXIZITAETSTEST : 83 3.2.2.
MINIMALE INHIBITORISCHE KONZENTRATION (MIK) 84 3.2.3. TEST AUF
NEMATIZIDE WIRKUNG 85 3.3. ABBAUVERSUCHE MIT PAK-KONTAMINIERTEM
BODENMATERIAL 86 3.3.1. QUANTIFIZIERUNG UND ANREICHERUNG PAK-ABBAUENDER
BAK- * TERIEN AUS BODEN A 86 3.3.2. ABBAU EINES PAK-GEMISCHES IN
BODENSUSPENSIONS- KULTUREN (SLURRYKULTUREN) 87 3.3.2.1. SLURRY-KULTUREN
MIT BODEN A UND VERSCHIEDENEN PILZSTAEMMEN 3.3.2.2. SLURRY-KULTUREN MIT
BODEN B (FEINPARTIKELFRAKTION) UND AN/GERSK 9317,, 90 3.3.2.3. ZUGABE
VON AUTOKLAVIERTEM BODEN B ZU VORINKU- BIERTEN KULTUREN VON A. NIGERSK
9317 93 3.3.2.4. ABBAU DER AUS BODEN EXTRAHIERTEN PAK DURCH A.
N;GERSK9317 98 3.3.3. PAK-ABBAU IN BODENKULTUREN 99 3.3.4. BILDUNG VON
PYRENMETABOLITEN IN BODENSUSPENSIONSKUL- TUREN UND IM BODEN 102 4.
DISKUSSION 103 4.1. METABOLISIERUNG VON PYREN DURCH ASPERGILLUS
N/GERSK9317 UND WEITERE A. RAGER-STAEMME IN SUBMERSKULTUREN 103 4.2.
METABOLISIERUNG VON PYREN DURCH VERSCHIEDENE ASPERGILLUS SPECIESUND A.
TERREUS ATCC 20542 111 4.3. METABOLISIERUNG VON PYREN DURCH PILZISOLATE
AUS PAK- KONTAMINIERTEM BODEN SOWIE DURCH PENICILLIUM SP. TW9424 115
4.4. ABBAUVERSUCHE MIT PAK-BELASTETEM BODEN 120 4.4.1. PAK-ABBAU IN
BODENSUSPENSIONSKULTUREN 121 4.4.2. PAK-ABBAU IM BODEN 125 4.5. AUSBLICK
125 5. ZUSAMMENFASSUNG 127 6. LITERATUR 129
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