Untersuchungen zur High-density-Lipoprotein-3-(HDL3)-induzierten Signaltransduktion in menschlichen Hautfibroblasten:
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| Format: | Microfilm Book |
| Language: | German |
| Published: |
1996
|
| Edition: | [Mikrofiche-Ausg.] |
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| Item Description: | Münster (Westfalen), Univ., Diss., 1996. - Mikrofiche-Ausg.: 2 Mikrofiches : 24x |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS V
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IX
1 EINLEITUNG
_1
1.1 INTERZELLULARE KOMMUNIKATION 1
1.2 REZEPTOREN 1
1.3 G-PROTEINE 2
1.4 INTRAZELLULARE KOMMUNIKATION DURCH SECOND-MESSENGER 3
1.5 KALZIUM ALS SECOND-MESSENGER 4
1.5.1 KALZIUM-KANAIE 4
1.5.2 ZEITLICHER VERLAUF INTRAZELLULAERER KALZIUM-ANSTIEGE 5
1.5.3 DYSREGULATIONEN IM KALZIUM-STOFFWECHSEL 6
1.6 ZYKLISCHES ADENOSIN-MONOPHOSPHAT ALS SECOND-MESSENGER 6
1.7 ZYKLISCHES GUANOSIN-MONOPHOSPHAT ALS SECOND-MESSENGER 7
1.8 SECOND-MESSENGER-FREISETZUNG AUS PHOSPHATIDYLINOSITOL 7
1.8.1 PHOSPHOLIPASE C 7
1.8.2 PHOSPHATIDYLINOSITOL-HYDROLYSE DURCH PHOSPHOLIPASE C 7
1.8.3 DIAZYLGLYZERIN ALS SECOND-MESSENGER 9
1.9 SECOND-MESSENGER-FREISETZUNG AUS PHOSPHATIDYLCHOLIN 10
1.9.1 PHOSPHATIDYLCHOLIN-SPEZIFISCHE PHOSPHOLIPASE C 10
1.9.2 PHOSPHOLIPASE D 10
1.9.3 INTERKONVERTIERUNG VON DIAZYLGLYZERIN UND PHOSPHATIDSAEURE 11
1.9.4 SEQUENZ DER SIGNAITRANSDUKTION BEI DER
PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE 12
1.9.5 PHOSPHATIDSAEURE ALS SECOND-MESSENGER 12
1.10 STRUKTUR UND FUNKTION VON LIPOPROTEINEN 14
1.11 CHYLOMIKRONEN 14
1.12 VERY-LOW-DENSITY LIPOPROTEINE 15
1.13 LOW-DENSITY LIPOPROTEINE 15
1.14 HIGH-DENSITY LIPOPROTEINE 16
1.14.1 DER YYREVERSE CHOLESTEROL TRANSPORT* 17
1.14.2 SIGNALTRANSDUKTION DURCH HIGH-DENSITY LIPOPROTEINE 17
1.14.3 HIGH-DENSITY-UPOPROTEIN-DEFIZIENZ 19
1.15 DIE TANGIER-KRANKHEIT 19
1.15.1 KLINISCHE BEFUNDE 19
1.15.2 HISTOLOGISCHE BEFUNDE 20
1.15.3 VERAENDERUNGEN DES PLASMA-HDL-STOFFWECHSELS 20
1.15.4 ZELLULAERE LIPIDHOMOEOSTASE IN ZELLEN VON TANGIER-PATIENTEN 20
1.16 FRAGESTELLUNG 21
V
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2 MATERIAL UND METHODEN
_22
2.1 KULTIVIERUNG MENSCHLICHER HAUTFIBROBLASTEN 22
2.1.1 MATERIALIEN 22
2.1.2 BIOPSIE UND KULTIVIERUNG MENSCHLICHER HAUTFIBROBLASTEN 23
2.1.3 SUBKULTIVIERUNG VON MONOLAYERKULTUREN 23
2.1.4 KRYOKONSERVIERUNG VON ZELLEN 24
2.1.5 AUFTAUEN KRYOKONSERVIERTER ZELLEN 24
2.1.6 AUSPLATIEREN DER ZELLEN FUER DIE SECOND-MESSENGER-BESTIMMUNG 24
2.1.7 ZELLZAHLBESTIMMUNG 24
2.2 LIPOPROTEINPRAEPARATION 25
2.3 LIPIDELEKTROPHORESE 25
2.4 PROTEIN-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 26
2.5 NITRIERUNG VON HDL
3 27
2.6 DELIPIDIERUNG VON LIPOPROTEINEN 27
2.7 ISOLIERUNG VON APOLIPOPROTEIN A-L 28
2.8 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 28
2.8.1 MATERIALIEN ' 28
2.8.2 VORBEREITUNG DER PROBEN 29
2.8.3 HERSTELLUNG DES POLYACRYLAMIDGELS 29
2.8.4 DURCHFUEHRUNG DER ISOELEKTRISCHEN FOKUSSIERUNG 30
2.8.5 FAERBUNG DES GELS 30
2.9 PRAEPARATION VON APO-A-I-PROTEOLIPOSOMEN 30
2.10 VORINKUBATION DER AUSPLATIERTEN ZELLEN 31
2.11 MARKIERUNG DER ZELLMEMBRAN MIT LYSO-[
14C]-PHOSPHATIDYLCHOLIN 31
2.12 MARKIERUNG DER ZELLMEMBRAN MIT ("PJPHOSPHORSAEURE 32
2.13 ANSATZ EINER INDUKTIONSLOESUNG MIT HDU 32
2.14 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG ZUR SECOND-MESSENGER-BESTIMMUNG 32
2.14.1 ABLAUF DER VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 32
2.14.2 WASCHSCHRITTE 33
2.14.3 ADDITION DER AGONISTEN 33
2.14.4 VERSUCHSSTOP 33
2.15 LIPIDEXTRAKTION 34
2.16 AUFTRENNUNG DER LIPIDE DURCH DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 34
2.16.1 MATERIAL 34
2.16.2 VORBEREITUNG DER CHROMATOGRAPHIEMATERIALEN 35
2.16.3 AUFTRAEGEN DER PROBEN 35
2.16.4 DOPPELT-EINDIMENSIONALE DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE ZUR
AUFTRENNUNG
DER METABOLITE VON LYSO-[
14C]PHOSPHATIDYLCHOLIN 35
2.16.5 ZWEIDIMENSIONALE DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE ZUR AUFTRENNUNG
DER METABOLITE VON LYSO-[
14C]PHOSPHATIDYLCHOLIN 35
2.16.6 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE ZUR AUFTRENNUNG
DER METABOLITE VON ["PJPHOSPHORSAEURE 36
2.16.7 DETEKTION VON LIPIDEN DURCH ANFAERBUNG DER DC-FOLIEN 36
2.16.8 PRAEPARATION RADIOAKTIVER STANDARDS 37
VI
INHALTSVERZEICHNIS
2.17 AUTORADIOGRAPHIE
37
2.18 ISOLIERUNG DER RADIOAKTIVEN FRAKTIONEN
37
2.19 RADIOCHEMISCHE QUANTIFIZIERUNG 38
2.20
VERSUCHSAUSWERTUNG 38
3 ERGEBNISSE
_39
3.1 OPTIMIERUNG DER METHODIK 39
3.1.1 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON MEMBRANSTAENDIGEM PHOSPHATIDYLCHOLIN 39
3.1.2 WAHL DER MARKIERUNGSZEIT 40
3.1.3 VERTEILUNG DER RADIOAKTIV MARKIERTEN METABOLITE 41
3.1.4 OPTIMIERUNG DER VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 42
3.1.5 OPTIMIERUNG DER LIPIDEXTRAKTION
43
3.1
.6
OPTIMIERUNG DER DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 44
3.1.7 OPTIMIERUNG DER VERSUCHSAUSWERTUNG 44
3.2 HDL
3-VERMITTELTE PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE 48
3.2.1 ZEITKINETIK DER PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE BEIJNDUKTION
MIT VERSCHIEDENEN HDU-KONZENTRATIONEN ~ 48
3.2.2 ZEITKINETIK DER PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE DURCH 30 PG/ML HDL
3
50
3.3 APOLIPOPROTEIN-A-L-VERMITTELTE PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE 51
3.4 BETEILIGUNG DER PHOSPHOLIPASE D AN DER PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE
53
3.5 INHIBIERUNG DER PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE DURCH NITRIERUNG DER
HDL3 56
3.6 EINFLUSS DER PROTEINKINASE C AUF DIE HDLRINDUZIERTE
PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE 57
3.7 HDL
3-VERMITTELTE PHOSPHATIDYLINOSITOL-HYDROLYSE 59
3.8 APO-A-L-PROTEOLIPOSOMEN-VERMITTELTE PHOSPHATIDYLINOSITOL-HYDROLYSE
60
3.9 PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE IN TANGIERFIBROBLASTEN 61
3.9.1 PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE DURCH HDL
3
IN KONTROLL- UND TANGIERFIBROBLASTEN 61
3.9.2 PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE DURCH ENDOTHELIN 1 IN
KONTROLL- UND TANGIERFIBROBLASTEN 63
3.10 UNTERSCHIEDLICHES VERTEILUNGSMUSTER RADIOAKTIV MARKIERTER
METABOLITE VON
LYSO-[
14
C]PHOSPHATIDYLCHOLIN IN KONTROLL- UND TANGIERFIBROBLASTEN 65
4 DISKUSSION
_ 69
4.1 ENTWICKLUNG DER METHODIK 69
4.2 HDL
3- UND APO-A-L-INDUZIERTE PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE 70
4.2.1 AUSWAHL DER HDL-SUBFRAKTION UND DER PROTEOLIPOSOMEN 70
4.2.2 CHARAKTERISIERUNG DER HDLS-INDUZIERTEN SIGNALTRANSDUKTION 70
4.2.3 REGULATION DER HDL
3-INDUZIERTEN SIGNALTRANSDUKTION 71
4.2.4 CHARAKTERISIERUNG DER APOLIPOPROTEIN-A-L-INDUZIERTEN
SIGNALTRANSDUKTION 72
4.2.5 ENTWICKLUNG EINES MODELLS ZUR HDLRINDUZIERTEN SIGNALTRANSDUKTION
73
4.3 UNTERSCHIEDE ZWISCHEN KONTROLL- UND TANGIERFIBROBLASTEN BEI DER
HDLRVERMITTELTEN
PHOSPHATIDYLCHOLIN-HYDROLYSE 76
4.4 UNTERSCHIEDE ZWISCHEN KONTROLL- UND TANGIERFIBROBLASTEN IN DER
METABOLISIERUNG
VON LYSO-[
14
C]PHOSPHATIDYLCHOLIN
77
VII
INHALTSVERZEICHNIS
5 ZUSAMMENFASSUNG 79
6 CHARAKTERISIERUNG DER ZELLSPENDER
_80
6.1 DATEN DER PATIENTEN MIT TANGIER-KRANKHEIT 80
6.1.1 ANAMNESE VON PATIENT J.S. 80
6.1.2 LABORPARAMETER UND HISTOLOGISCHE BEFUNDE VON PATIENT J.S. 80
6.1.3 ANAMNESE VON PATIENT E.G. 82
6.1.4 LABORPARAMETER UND HISTOLOGISCHE BEFUNDE VON PATIENT E.G. 82
6.2 DATEN DER SPENDER DER KONTROLLZELLEN 83
7 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN
_84
7.1 GERAETE 84
7.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 84
8 ABBILDUNGSVERZEICHNIS _ 86
9 LITERATURVERZEICHNIS 88
10 LEBENSLAUF 103
11 DANKADRESSE 104
12 PUBLIKATIONEN 105
VIII |
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