Charakterisierung der Interaktion von Auxin-Bindungsprotein 1 aus Mais (Zea mays L.) mit Plasmamembranen aus Mais-Koleoptilen in vitro:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. EINLEITUNG 1
2. MATERIAL UND METHODEN 11
2.1 MATERIAL 11
2.1.1 PFLANZEN 11
2.1.2 TIERE 11
2.1.3 GERAETE 11
2.1.4 CHEMIKALIEN UND SONSTIGES MATERIAL 12
2.2 METHODEN 13
2.2.1 PROTEINBESTIMMUNG 13
2.2.2 TRICHLORESSIGSAEURE-FAELLUNG 14
2.2.3 CHLOROFORM-METHANOL-FAELLUNG 14
2.2.4 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE)
VON PROTEINEN 14
2.2.5 DIAGONAL-SDS-PAGE 15
2.2.6 SILBERFAERBUNG VON PROTEINEN IN POLYACRYLAMID-GELEN 15
2.2.7 WESTERNBLOTS 16
2.2.8 PRAEPARATION VON ABP AUS MAIS-KOLEOPTILEN 18
2.2.9
IN V/FRO-MARKIERUNG VON ABP 19
2.2.10 SYNTHESE VON PEPTIDEN 20
2.2.11 HERSTELLUNG ANTI-IDIOTYPISCHER ANTIKOERPER 20
2.2.12 PRAEPARATION VON MIKROSOMEN UND PLASMAMEMBRAN-VESIKELN 22
2.2.13 SOLUBILISIERUNG VON MEMBRANPROTEINEN 24
2.2.14
IN VITRO-BINDUNGSSTUDIEN 25
2.2.15 EXPERIMENTE MIT CHEMISCHEN
CROSSLINKEM 27
2.2.16 IMMUNPRAEZIPITATIONEN MIT ANTI-ABP-IGG 28
2.2.17 PEPTID-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 29
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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SEITE
3. ERGEBNISSE 30
3.1 ANTI-IDIOTYPISCHE ANTIKOERPER 30
3.1.1 NACHWEIS ANTI-IDIOTYPISCHER ANTIKOERPER IM ELISA 30
3.1.2 ELISA-KOMPETITIONSSTUDIEN MIT ABP UND PEPTID 1 31
3.1.3 CHARAKTERISIERUNG DER ANTIKOERPER IM IMMUNOBLOT 32
3.1.4 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE ANREICHERUNG DER
ANTI-IDIOTYPISCHEN ANTIKOERPER 33
3.1.5 CHARAKTERISIERUNG DER VON DEN ANTIKOERPERN
ERKANNTEN PROTEINE - 35
3.2
IN W'FRO-BINDUNGSSTUDIEN 36
3.2.1 NACHWEIS DER BINDUNG VON ABP AN PLASMAMEMBRAN-
VESIKEL 36
3.2.2 KOMPETITION MIT SYNTHETISCHEN PEPTIDEN UND
ANTI-IDIOTYPISCHEN IGG 40
3.2.3 CHARAKTERISIERUNG DER BINDUNG VON ABP AN
PLASMAMEMBRAN-VESIKEL 41
3.2.4 PROTEOLYSE-EXPERIMENTE MIT PROTEINASE K 46
3.3
CROSSLINK- STUDIEN 48
3.3.1 KREUZVERNETZUNG VON ABP IN PLASMAMEMBRAN-VESIKELN
UND MIKROSOMEN 49
3.3.2 KREUZVERNETZUNG VON PLASMAMEMBRAN-VESIKEL
GEBUNDENEM ABP 53
3.3.3 KREUZVERNETZUNG VON ABP IN PLASMAMEMBRANPROTEIN-
EXTRAKTEN 56
3.3.4 KREUZVERNETZUNG DES ANTI-LDIOTYP-DETEKTIERTEN PROTEINS P26 57
SEITE
3.4 IMMUNPRAEZIPITATIONEN 58
3.5 PEPTID-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 61
4. DISKUSSION 63
4.1 ANTI-IDIOTYPISCHE ANTIKOERPER 63
4.2
IN WFRO-BINDUNG VON ABP AN PLASMAMEMBRAN-VESIKEL 69
4.3 IDENTIFIZIERUNG VON ABP-BINDUNGSPROTEINEN 79
4.3.1
CROSSLINK-EXPENMENTE 79
4.3.2 IMMUNPRAEZIPITATIONEN 85
4.3.3 PEPTID-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 88
5. ZUSAMMENFASSUNG 91
6
. LITERATURVERZEICHNIS
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