Untersuchung der Bindungseigenschaften von humanem Alpha 2-Makroglobulin und dem Alpha 2-Makroglobulin-Rezeptor:
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINFUEHLUNG
1
1.1 CHARAKTERISIERUNG DES OCJ-MAKROGLOBULINS 1
1.1.1 PHYSIKOCHEMISCHE EIGENSCHAFTEN 1
1.1.2 BILDUNG UND VORKOMMEN 2
1.1.3 KOEDER-REGION 3
1.1.4 THIOL-ESTER 3
1.1.5 REZEPTORERKENNUNGSORT 4
1.2 FUNKTIONEN DES CK-MAKROGLOBULINS 5
1.2.1 AZ-MAKROGLOBULIN ALS PROTEINASEINHIBITOR 5
1.2.2 OCZ-MAKROGLOBULIN ALS ZYTOKIN-BINDENDES PROTEIN 6
1.2.2.1 ZYTOKINE UND REGULATION DER ZYTOKIN-AKTIVITAET 6
1.2.2.2 INTERAKTIONEN ZWISCHEN ZYTOSSNEN UND OO-MAKROGLOBULIN 7
1.2.3 OTZ-MAKROGLOBULIN ALS METALLBINDENDES PROTEIN
9
1.3 KLINISCHE BEDEUTUNG DES OU-MAKIOGLOBULINS 10
1.4 DER O^-MAKROGLOBULIN-REZEPTOR 13
1.4.1 STRUKTUR UND VORKOMMEN 13
1.4.2 LIGANDEN DES A^-MAKROGLOBULIN-REZEPTORS 16
2. AUFGABENSTELLUNGEN UND ZIELE DER ARBEIT 18
3. MATERIALIEN UND METHODEN 19
3.1 LABORCHEMIKALICN 19
3.2 METHODEN 21
3.2.1 ISOLIERUNG UND REINIGUNG VON A
2-MAKROGLOBULIN AUS 21
MENSCHLICHEM PLASMA
3.2.2 AKTIVIERUNG VON OO-MAKROGLOBULIN DURCH METHYLAMIN 21
3.2.3 PRAEPARATION DES OU-MAKROGFOBULIN-REZEPTORS 21
3.2.3.1 KOPPLUNG VON TRANSFORMIERTEM OUE-MAKROGLOBULIN AN
BROMCYANAKTIVIERTE SEPHAROSE 21
3.2.3.2 ISOLIERUNG DES OR-MAKROGLOBULIN-REZEPTORS 23
3.2.4
L25J.MARKIERUNG DES OUE-MAKROGLOBULIN-REZEPTORS 24
3.2.5 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 25
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.2.6 ELEKTROPHORETISCHE METHODEN 26
3.2.6.1 RATE-ELEKTROPHORESE IM POLYACRYLAMIDGEL 26
3.2.6.2 SDS-ELEKTROPHORESE 27
3.2.6.3 POLYACRYLAMIDGEL-GRADIENTEN-ELEKTROPHORESE 28
3.2.7 BESTIMMUNG DER GESAMTKONZENTRATION UND DER KONZENTRATION 30
DES TRANSFOIMIERTEN OO-MAKROGLOBULINS MITTELS EIJSA
3.2.8 VERTEILUNGSEXPERIMENTE IN WAESSRIGEN ZWEI-PHASEN-SYSTEMEN 32
3.2.9 OT
2
-MAKROGLOBULIN-REZEPTOR-BINDUNGSSTUDIEN AN DER FESTPHASE 33
3.2.10 WESTERN BLOT ' 35
4. ERGEBNISSE 37
4.1 REINIGUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES OT
2
-MAKROGLOBULINS 37
4.2 PRAEPARATION DES OO-MAKROGLOBULIN-RCZCPTORS 38
4.3 BINDUNGSSTUDIEN ZWISCHEN OC^MAKROGLOBULIN UND INTERLEUKIN LSS 39
4.3.1 VERTEILUNGSEXPERIMENTE IN WAESSRIGEN ZWEI-PHASEN-SYSTEMEN 39
4.3.2 EINFLUSS VON METALL-IONEN 41
4.4 BINDUNGSSTUDIEN ZWISCHEN OU-MAKROGLOBULIN 47
UND DEM OB-MAKROGLOBULIN-REZEPTOR
4.4.1 VERTEILUNGSEXPERIMENTE IN WAESSRIGEN ZWEI-PHASEN-SYSTEMEN 47
4.4.2 (X
2
-MAKROGLOBULIN-REZEPTOR-BINDUNGSSTUDICN AN DER FESTPHASE 50
4.4.2.1 BINDUNGSANALYSEN AM MODIFIZIERTEN REZEPTOR 52
4.4.2.2 VERDRAENGUNGSANALYSEN 54
4.4.3 BINDUNGSANALYSEN MITTELS WESTERN BLOT UND AUTORADIOGRAPHIE 55
4.5 SSINDUNGSSTUDIEN ZWISCHEN DEM OO-MAKROGLOBULIN-REZEPTOR 56
UND BESTANDTEILEN DES MENSCHLICHEN SERUMS
4.5.1 VERTEILUNGSEXPERIMENTE IN WAESSRIGEN ZWEI-PHASEN-SYSTEMEN 56
4.5.2 OO-MAKROGLOBULIN-REZEPTOR-BINDUNGSSTUDIEN AN DER FESTPHASE 59
4.5.2.1 VERDRAENGUNGSANALYSEN 61
4.5.3 BINDUNGSANALYSEN MITTELS WESTERN BLOT UND AUTORADIOGRAPHIE 63
5. DISKUSSION 65
5.1 WECHSELWIRKUNGEN ZWISCHEN OC-MAKROGLOBULIN 65
UND DEM INTERLEUKIN LSS
5.2 WECHSELWIRKUNGEN ZWISCHEN OO-MAKROGLOBULIN 70
UND DEM (X^-MAKROGLOBULIN-REZEPTOR
5.3 WECHSELWIRKUNGEN ZWISCHEN DEM OUE-MAKROGLOBULIN-REZEPTOR 76
UND BESTANDTEILEN DES MENSCHLICHEN SERUMS
6. ZUSAMMENFASSUNG 80 |
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