Gewinnung schwer exprimierbarer, heterologer Proteine durch Nutzung verschiedener Zellkompartimente von Escherichia coli:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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| Beschreibung: | Bielefeld, Univ., Diss., 1995 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
AUFGABENSTELLUNG
2
2.
THEORETISCHER
TEIL
3
2.1
WICHTIGE
ASPEKTE
DES
STOFFWECHSELS
VON
ESCHERICHIA
COLI
3
2.1.1
TRANSPORT
VON
EISEN
IN
ESCHERICHIA
COLI
3
2.2
ASPEKTE
DER
KULTIVIERUNG
VON
ESCHERICHIA
COLI
5
2.2.1
EINFLUSS
DER
TEMPERATUR
5
2.2.2
EINFLUSS
DES
PH-WERTES
5
2.2.3
SAUERSTOFFVERSORGUNG
DER
ZELLEN
6
2.2
4
WACHSTUMSLIMITIERUNG
DURCH
DIE
BILDUNG
VON
STOFFWECHSELNEBENPRODUKTCN
7
2.3
EXPORT
VON
PROTEINEN
INS
PERIPLASMA
8
2.3.1
SIGNALPEPTIDE
8
2.3.2
EXPORT-RELEVANTE
MERKMALE
VON
ZU
SEKRETIERENDEN
PROTEINEN
9
2.3.3
DER
TRANSPORTWEG
9
2.3.3.1
SECB
10
2.3
3.2
GROEL
UND
GROES
11
2.3.33
SECA
11
23.3.4
SECE
11
2.33.5
SECY
11
2.4
PRODUKTION
VON
PROTEINEN
IN
ESCHERICHIA
COLI
12
2.4.1
UEBEREXPRESSION
EINES
PROTEINS
12
2.4.1.1
PLASMIDSTABILITAET
12
2.4.1.2
PROMOTOREN
12
2.4.1
3
DER
N/RSS-PROMOTOR
13
2.4.1.4
DER
T7-/AC-PROMOTOR
15
24.1.5
BILDUNG
VON
EINSCHLUSSKOERPEM
15
2.4.1.6
AUSWIRKUNGEN
DER
C-QUEILE
AUF
DIE
PRODUKTBILDUNG
15
2.4.2
DIE
AUFARBEITUNG
16
2.5.2.1
MOEGLICHE
AFFINITAETSKOMPLEMENTE
19
SS-GALACTOSIDASE
19
DAS
FLAG-PEPTID
19
PROTEIN
A
20
GLUTATHION
S-TRANSFERASE
20
.
METALLCHELAT
FUSIONSKOMPLEMENTE
20
2.5
ZIELPROTEINE
21
2.5.1
DIE
SS-GALAKTOSIDASE
21
2.5.2
DER
VERKUERZTE
HUMANE
FCYRIII-REZEPTOR
21
2.5.3
DIE
DRITTE
DOMAENE
DES
L-KININOGENS
22
2.5.4
FERREDOXIN
AUS
RHIZOBIUM
MELILOTI
22
3
MATERIAL
UND
METHODEN
24
3.1
GERAETE
24
3.2
LOESUNGEN
FUER
DIE
MOLEKULARBIOLOGIE
24
3.3
LOESUNGEN
FUER
DIE
PROTEINCHEMIE
28
-INHALTSVERZEICHNIS'
3.4
BAKTERIENSTAEMME
30
3.5
PLASMIDE
30
3.6
BAKTERIENKULTIVIERUNG
31
3.6.1
NAEHRMEDIEN
31
3.6.2
ANTIBIOTIKA
33
3.6.3
ANZUCHT
IN
FLUESSIGMEDIUM
ODER
AUF
FESTMEDIUM
33
KULTIVIERUNG
IM
GREINERROEHRCHEN
33
INOKULATIONSKULTUR
IM
SCHUETTELKOLBEN
MIT
ANSTECHNADEL
34
3.6.4
ANLEGEN
VON
GLYCERINKULTUREN
FUER
STAMMSAMMLUNG 34
3.7
DNA-ISOLIERUNG
34
3.7.1
SCHNELLISOHERUNG
VON
PLASMID-DNA
34
3.7.2
ISOLIERUNG
GROESSERER
MENGEN
DNA
34
3.7.3
ISOLIERUNG
GROESSERER
MENGEN
DNA
MIT
QIAGEN
SAEULEN
35
3.8
OLIGONUKLEOTIDE
35
3.8.1
OLIGONUKLEOTID-SYNTHESE
UND
AUFREINIGUNG
35
3.8.2
PHOSPHORYLIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
36
3.8.3
ANNEAHNG
ZWEIER
OLIGONUKLEOTIDE
ZUM
DOPPELSTRANG
36
3.9
KLONIERUNGSTECHNIKEN
36
3.9.1
HYDROLYTISCHE
SPALTUNG
VON
PLASMID-DNA
MIT
36
3.9.2
BEHANDLUNG
MIT
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
36
3.9.3
AUFFUELLEN
VON
5
'
-UEBERHAENGENDEN
ENDEN
MIT
KLENOW-POLYMERASE
37
3.9.4
ENTFERNUNG
VON
3'
-UEBERHAENGENDEN
ENDEN
37
3.9.5
ABBAU
VON
5
'
-UEBERHAENGENDEN
ENDEN
37
3.9.6
ENTFERNUNG
VON
RESTRIKTIONSENZYMEN
UND
DNA-FAELLUNG
37
3.9.7
DNA-GELELEKTROPHORESE
38
3.9.8
PHOTOMETNSCHE
BESTIMMUNG
VON
DNA
38
3.9.9
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
38
3.9.10
EXTRAKTION
VON
DNA
AUS
LMP-GEL
39
3.9.10.1
PHENOL-BEHANDLUNG
39
3.9.10
2
DNA-EXTRAKTION
UNTER
VERWENDUNG
DES
QIAEX-EXTRAKTIONSKITS
39
3.10
TRANSFORMATION
VON
ESCHERICHIA
COLI
39
3.10.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
39
3.10.3
DIREKTTRANSFORMATION
40
3.10.4
MOBILISIERUNG
VON
PLASMIDEN
DURCH
KONJUGATION
40
3.11
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
SANGER
41
3.11.1
VORBEREITUNG
41
3.11.2
DENATURIERUNG
DER
DNA
4
1
3.11.3
SEQUENZIERREAKTION
42
3.11.4
SEQUENZIERUNG
MIT
DIG-MARKIERTEM
PRIMER
UND
DIRECT
BLOTTING
AUF
NITROCELLULOSEMEMBRAN
42
3.12
FERMENTATION
43
3.12.1
VORBEREITUNG
DES
FERMENTERS
44
3.12.2
DURCHFUEHRUNG
DER
FERMENTATION
44
3.12.3
BESTIMMUNG
DER
PLASMIDSTABILITAET
47
3.12.4
ZELLFRAKTIONIERUNG
47
3.13
PROTEINANALYTIK
48
3.13.1
PROTEINFALLUNG
ZUR
AUFKONZENTRIERUNG
48
3.13
2
PROTEINBESTIMMUNG
DURCH
MIKROBIURET-METHODE
48
3.13.3
VERTIKALE
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
NACH
LAEMMLI
49
3.13.4
SILBERFAERBUNG
VON
POLYACRYLAMIDGEIEN
50
INHALTSVERZEICHNIS
3.14.
SPEZIFISCHE
NACHWEISVERFAHREN
50
3.14.1
IMMUNOLOGISCHE
NACHWEISVERFAHREN
50
3.14.1.1
WESTERN-BLOT
50
3.14.2
SPEZIFISCHER
NACHWEIS
FUER
NICHT-HAEM-EISEN-PROTEINE
IN
POLYACRYLAMIDGELEN
51
3.15
ENZYMATISCHE
TESTS
52
3.15.1
SS-GALAKTOSIDASETEST
52
3.152
SS-LACTAMASETEST
52
3.15.3
IN
VIVO
RHIZOBTUM
MELILOTI
NITROGENASE-AKTIVITAETSMESSUNG
(PFLANZENTEST)
52
3.15.3.1
OBERFLAECHENSTERILISATION
VON
LUZEMESAMEN
53
3.15.3.2
INOKULATION
UND
ANZUCHT
DER
LUZERNEKEIMLINGE
53
3.15.3.3
ACETYLEN-REDUKTIONSTEST
53
3.16
POLAROGRAPHISCHE
EISENBESTIMMUNG
53
3.17
EISENBESTIMMUNG
54
3.18.
UV/VIS-SPEKTROSKOPIC
54
3.19
ESR-SPEKTROSKOPIE
54
4
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
56
4.1
KONSTRUKTION
DER
EXPRESSIONSVEKTOREN
56
4.1.1
EXPRESSIONSVEKTOR
ZUR
PRODUKTION
DES
VERKUERZTEN
FCYRIII
56
4.1.1.1
KONSTRUKTION
DES
EXPRESSIONSVEKTORS
PSTIFCG
57
4.1
1.2
DER
EXPRESSIONSVEKTOR
PKD3FCG
60
4.1.
1
.3
KONSTRUKTION
DES
EXPRESSIONSVEKTORS
PFLAGFCG
63
4.
1
.1.4
KONSTRUKTION
DES
EXPRESSIONSVEKLORS
PSTIFCT7
66
4.1
1.5
ERGEBNISSE
DER
KULTIVIERUNGEN
UNTER
VERWENDUNG
DER
KONSTRUIERTEN
EXPRESSIONSVEKTOREN
69
4.1.2
EXPRESSIONVEKTOR
ZUR
PRODUKTION
DES
FERREDOXINS
AUS
RHIZOBIUM
MELILOTI
70
4.2
DIE
EXPRESSION
DES
VERKUERZTEN
FCYRIII-REZEPTORS
82
4.3
ERHOEHUNG
DER
EXPORTEFFIZIENZ
DURCH
COEXPRESSION
93
VON
SEC-PROTEINEN
93
4.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
EFFIZIENZ
DES
AMPICILLIN/SS-LACTAMASE-SYSTEMS
ZUR
PLASMIDSTABILISIERUNG
101
4.5
UEBEREXPRESSION
DES
FERREDOXINS
AUS
RHIZOBIUM
MELILOTI
106
4.5.1
WAHL
EINES
AFFINITAETSKOMPLEMENTS
106
4.5.2
WAHL
EINES
REDUKTIONSMITTELS
106
4.5.3
DIE
EXPRESSIONSSYSTEME
107
4.5.3.1
PROMOTORSTUDIEN
AM
NIRB-PROMOTOR
107
4.5.3.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
OPTIMIERUNG
DER
INDUKTION
116
4.5.3.6
BESTIMMUNG
DER
PLASMIDSTABIHTAET
117
4.5.3.7
AUFARBEITUNG
DES
ROHEXTRAKTES
118
4.5.3.8
EXPRESSION
DES
NATIVEN
FERREDOXINS
UNTER
VERWENDUNG
DES
EXPRESSIONSVEKTORS
PFDXT7
119
4.5.3.9
UEBERPRUEFUNG
DER
IDENTITAET
DES
PROTEINS
121
4.5.3.1
1
UEBERPRUEFUNG
DES
UV/VIS-SPEKTRUMS
124
4.5.3.12
UNTERSUCHUNG
DES
EPR-SPEKTRUMS
125
5.
ZUSAMMENFASSUNG
127
5.1
EXPRESSION
DES
VERKUERZTEN
FCYRIII-REZEPTORS
127
5.2
ERHOEHUNG
DES
EXPORTS
VON
HETEROLOGEN
PROTEINEN
INS
PERIPLASMA
VON
ESCHERICHIA
COLI
DURCH
COEXPRESSION
VON
SEKRETIONSPROTEINEN
129
5.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
EFFIZIENZ
DES
AMPICILLIN/SS-LACTAMASESYSTEMS
ZUR
PLASMIDSTABILISIERUNG
130
5.4
EXPRESSION
UND
AUFREINIGUNG
DES
FERREDOXINS
AUS
RHIZOBIUM
MELILOTI
IN
ESCHERICHIA
COLI
132
6
LITERATUR
135
7.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
153 |
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| spelling | Stiegelmeier, Carsten Verfasser aut Gewinnung schwer exprimierbarer, heterologer Proteine durch Nutzung verschiedener Zellkompartimente von Escherichia coli vorgelegt von Carsten Stiegelmeier 1995 154 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Bielefeld, Univ., Diss., 1995 Kompartimentierung (DE-588)4031972-6 gnd rswk-swf Escherichia coli (DE-588)4070959-0 gnd rswk-swf Ferredoxine (DE-588)4154104-2 gnd rswk-swf Heterologe Genexpression (DE-588)4342015-1 gnd rswk-swf Redoxpotenzial (DE-588)4076577-5 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Escherichia coli (DE-588)4070959-0 s Kompartimentierung (DE-588)4031972-6 s Redoxpotenzial (DE-588)4076577-5 s Ferredoxine (DE-588)4154104-2 s Heterologe Genexpression (DE-588)4342015-1 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007114583&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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