Molekulare Analyse der Induktion tumorspezifischer Immunantworten: Vergleich von Tumor-Resistenz und Suszeptibilität in einem Maus Tumor Modellsystem
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1995
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INHALT
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
A. EINLEITUNG
II.
DIE
1
.
.1
. .3
INLEITUNG. .3
I. ALLGEMEINE EINFUEHRUNG. .4
IMMUNANTWORT .4
ZELLULAERE GRUNDLAGEN. .
4
A) ZYTOTOXISCHE T-LYMPHOZYTEN. .7
B) T-HELFER LYMPHOZYTEN. .G
C) ANTIGEN-PRAESENTIERENDE ZELLEN.'.7.'. 11
2. REGULATION
DER
IMMUNANTWORT. .,,
A)
ZYTOKINE. .
14
B) THL/TH2- REGULATION.17
TUMOR-W IRTS-INTERAKTIONEN LYPLLE .
17
1 DER TUMOR ALS WACHSENDE
UND
METASTASIEREND YYYYYYYY .
2. IRNMUNMODULATORISCHES POTENTIAL VON TUMOOELLE
YY
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY.
IV. IMMUNTHERAPIE VON TUMOREN .
20
1 ADOPTIVER ZELLTRANSFER. .21
2. ERHOEHUNG DER IMMUNOGENITAET VON TUMOREN.^ ^ ^.
22
V. DAS ESB-L-TUMORMODELLSYSTEM .
24
DER ARBEIT. .
25
III
B. ZIELSETZUNG .
C.
MATERIAL UND METHODEN. .
I. VERSUCHSTIERE.
1. MAUSSTAEMME.
2. ANAESTHESIE.
3
UV-B-BESTRAHLUNG
DER MAEUSE.
ZELLBIOLOGISCHE UND IMMUNBI.LOGISEHE VERFAHR
1. ZELLINIEN.
2. KULTIVIERUNG DER ZELLINIEN.
3. PUFFER UND MEDIEN
II.
.25
.25
.25
.25
.26
.26
.26
.27
.28
, ZYTOKINE UND ANTIGENE. . 28
4. MITOGENE
A) STIMULIERENDE REAGENZIEN.
B) ZYTOKINE.
C) MODELLANTIGENE.
D) VIREN.
5.
ZELLPRAEPARATIONEN
EX VIVO.YY.YY-
J R PNIDERMIS AUS DEM OHR
A) PRAEPARATIONEN DER EPIDERM ^ N
B) PRAEPARATION DER EPIDERMALEN ZELLEN AUS
.29
.29
.29
.29
.29
DEM
OHR.30
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/946173982
INHALT
.30
C)
MILZZELLPRAEPARATION
. .
31
6
. INAKTIVIERUNG VON ZEYYEN.3.
A) INAKTIVIERUNG VON MNZZEIIE
V
.31
B) INAKTIVIERUNG VON TUMORZELLEN.YYYYYYYY_YY YY YY YY". .
3 I
7. EPIDERMALE ZELLEN ALS ANTIGEN-PRAESENTRERENDE ZEL YYYY
YY
YYYYYYYYYY.3,
8 PROLIFERATIONSTEST. .
32
9. NACHWEIS VON ZYTOKINEN IN UEBCRXTAENDEN .^ -
A) NACHWEIS VON ZYTOKINEN IN BTO OGTS .
33
MIT HILFE ZYTOKINABHAENGIGER ZELLINIEN.
"'''ZZZ.Z.
YY YY
32
B) NACHWEIS VON ZYTOKINEN IM ELIS . .^
10. NACHWEIS ZYTOTOXISCHER T-LYMPHOZYTEN .^. .
33
A) GENERIERUNG ALLO-ANTIGEN SPEZIFISCHER CTL .
3J
B) GENERIERUNG SYNGENER TUMOR-SPEZ,RISCHER CT .^
I 1. ATPA^F^B^S^^^^HW
6^ VON LANGERHANS ZEHEN IN DER.^
EPIDERMIS
. .35
12. BINDUNGSSTUDIEN. .
13 .
A) ANTIKOERPER UND OBERFLAECHENFAERBUNG VON
SUSPENSIONSZELLEN.
.
W INTRAZELLULAERE FAERBUNG VON ZYTOKINEN.""
) AKTIVIERTEN UND ZYTOKINPRODUZIERENDEN
.35
.35
.36
C) BESTIMMUNG DER AKUVICI^I. , - .
37
ZELLEN.
CCKT
RI S; TUMORZELLEN EX VIVO AUS
14. ISOLIERUNG VON ESBLCI.5S .
40
PRIMAERTUMORGEWEBE UND LEBERMETASTASEN ."'".
40
A) PRAEPARATION VON PRIMAERTUMORGEWE . YY YY YYYY 4Q
B) PRAEPARATION VON TUMORZELLEN ANS UBERMETASTASE .^
C) SORTIERUNG FOCZ POSITIVER TUMORZELLEN.
YYYYYYYYYYYYYY""'.4,
III. MOLEKULARBIOLOGISCHEVERFAHREN^. ^
MLEN 43
1. PRAEPARATION VON DNA UND RNA AUSEUXARY .M
A) DN . .
44
BLRNA-PRAEPARATION.^.^-
IRHERDNA;'.45
2
. RESTRIKTIONS- UND SOUTHEM-BLOT-ANALYSE GEN .46
3
. NOTHEM-BLOT- ANALYSE DER RNA. 48
.48
4. SLOT-BLOT-ANALYSE
DER
RN A. DNA_SONDEN.
5
HYBRIDISIERUNG
MIT
RADIOAKTIV-MARKRERIER,
DNA
SOND
OAMPUFTOTIONUNDREINIGUNGVONDN^VEKM^-^
A)
ELEKTROTRANSFORMATION VON B
B)
MINIPRAEPARATION ZUR PLASMIDANALYSE.
.51
.51
.52
INHALT
C
) MAXIPRAEPARATION VON PLASMID-DNA
D)
PRAEPARATION
DER SPEZIFISCHEN DNA-FRAGMEN.E
AUS
DEN
PLASMIDEN
;PO|YMT.RASE.KETTEN-REAKUON (RT-PCR).
7.
REVERSE-TRANSKRIPTASE-
.54
.55
,55
A) VERWENDETE PCR-STARTERSEQUENZEN .
5
II.
AKTUELLE
.56
.58
.58
.58
.59
.61
.62
.64
.64
B) REVERSE TRANSKRIPTION
C) PCR.
D
' ^ IF ROHRFDER LANGERHANS ZEILEN BEI DER INDUKTION E*NEI^ AN^'
^^""I'UN^^UEND^A^PAEDT^.
2. ELIMINIERUNG DER LANGERHANS ZELLEN IN DER EPTDEMUS DURCH.
^E^KTTKRUV-BESTRAHLUNSSAUF DIE INDUKTION EINER PROETEICTIUEN.
NX^NTIEREND
TE;FUNKTION DER DC IN VIRM
B'BCS CHARTKTERISIERUNG DES ESBL-T-LYMPHOMS.
1. EXPRESSION VON OBERFIAECHENMARKEM.'
A) .
65
B) EXPRESSION VON AKTIVIERUNGSMARKEM.
C) EXPRESSION VON ADHAESIONSMOLEKUELEN.
^
2. REGULATION VON OBERFIAECHENMARKEM. 68
A) EINFLUSS VON T-ZELL-STIMULI
B) EFFEKT DER TNFA STIMULATION AUF DIE EXPRESSION
OBERFIAECHENMARKEM.
C) EFFEKT DER TNFA STIMULATION AUF DIE ADHAESTON VON ESBL
ZELLEN
AN ENDOTHELZELLEN.
3. UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOKINGENEXPRESSION.
4. VERGLEICH DER ZYTOKIN-UND ZYTOKINREZEPTOREXPRESSTON TN.^
PRIMAERTUMOREN UND METASTASEN. ^
77
IN ANALYSE DER TUMOR-SPEZIFISCHEN IMMUNANTWORT
M- ,TVIVO NDUKTION VON ZYTOKIN MRNA IN MILZZELLEN ^ 77
N N 7 MRNA IN MILZZELLEN VON DBA/2 UND
A) EXPRESSION VON 1L-2 MKIN/\
B10D2 MAEUSEN. "YY
B) EXPRESSION VON 1L-2 REZEPTOR A KETTE MRNA IN
MILZZELLEN VON DB ASS UND B10D2 MAEUSEN.
-
C) EXPRESSION VON 1L-4 MRNA IN MILZZELIEN VON DBA/2 UND
B10D2 MAEUSEN.
VON
.70
.73
.74
77
79
.80
INHALT
D) EXPRESSION VON IFNG MRNA IN MILZZELLEN VON DBA/2
UND B10D2 MAEUSEN.81
2. NACHWEIS VON ZYTOKINEN MITTELS INTRAZELLULAERER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE.82
A) NACHWEIS DER ZYTOKINE IN POSITIVKONTROLLEN.82
B) AKTIVIERUNG VON MILZZELLEN
IN VIVO.84
C) NACHWEIS VON ZYTOKINEN IN EX VIVO ISOLIERTEN MILZZELLEN.86
3. INDUKTION VON ZYTOKINEN IN
IN VITRO MLTC.87
A) NACHWEIS VON IL-2 IN
IN VITRO RESTIMULATIONSKULTUREN.87
B) NACHWEIS VON IL-4 IN
IN VITRO RESTIMULATIONSKULTUREN.88
C) NACHWEIS VON IL-7 IN
IN VITRO RESTIMULATIONSKULTUREN.89
4. ZYTOKINPROFIL IN MLC NACH MODIFIZIERUNG DER STIMULATORZELLEN MIT
NDV.90
A) EFFEKT DER NDV-MODIFIZIERUENG AUF DIE INDUKTION VON ALLO-
CTL.91
B) NACHWEIS VON IL-2 IN MLC NACH NDV-MODIFIZIERUNG DER
STIMULATORZELLEN.92
C) NACHWEIS VON IL-4 IN MLC NACH NDV-MODIFIZIERUNG DER
STIMULATORZELLEN.93
D) NACHWEIS VON IL-7 IN MLC NACH NDV-MODIFIZIERUNG DER
STIMULATORZELLEN.94
E. DISKUSSION.96
I. DIE ROLLE DER LANGERHANS ZELLEN.96
II. AKTUELLE CHARAKTERISIERUNG DES ESBL T-ZELL-LYMPHOMS.98
1. DIFFERENZIERUNGSSTADIUM DES ESBL-LYMPHOMS.99
2. ADHAESION UND METASTASIERUNG.100
3. IMMUNREGULATORISCHES POTENTIAL DER ESBL ZELLEN.105
III. ZYTOKININDUKTION WAEHREND DER GENERIERUNG EINER TUMOR-
SPEZIFISCHEN IMMUNANTWORT.105
1. TUMORRESISTENZ UND TUMORSUSZEPTIBILITAET IM ESBL-TUMORMODELL. 106
2. INDUKTION EINER ANTI-ESBL-IMMUNANTWORT.107
F. ZUSAMMENFASSUNG.113
G. LITERATUR.115
H. ANHANG.130
I. LEBENSLAUF.130
II. DANKSAGUNG.131 |
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