Strukturelle und funktionelle Charakterisierung des humanen bronchioloalveolären Epithels: Untersuchungen in der nicht neoplastischen Lunge und in pulmonalen Adenocarcinomen
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INHALTSVERZEICHNIS
EINLEITUNG 1
1.0. DAS ALVEOLAREPITHEL UND DER PULMONALE SURFAKTANT 1
1.1. MORPHOLOGIE DES ALVEOLAREPITHELS UND DES SURFAKTANT 1
1.2. BIOCHEMISCHE ZUSAMMENSETZUNG, FUNKTION UND METABOLISMUS
DES PULMONALEN SURFAKTANT 4
1.3. WEITERE FUNKTIONELLE UND BIOCHEMISCHE CHARAKTERISTIKA
DES ALVEOLAREPITHELS 8
1.4. ONTOGENESE DES ALVEOLAREPITHELS UND DES PULMONALEN
SURFAKTANT 10
2.0. DIE CLARA-ZELLE UND IHRE GEMEINSAMEN CHARAKTERISTIKA
MIT TYP IL-PNEUR^OZYTEN 13
3.0. DIE REGENERATION DES ALVEOLAREPITHELS 15
4.0. DAS ALVEOLAREPITHEL UND DIE EXTRAZELLULAERE MATRIX
IN DER GESUNDEN LUNGE 16
4.1. ZUSAMMENSETZUNG DER EXTRAZELLULAEREN MATRIX IN DEN
ALVEOLARSEPTEN 16
4.2. WECHSELWIRKUNGEN DES ALVEOLAREPITHELS UND DER EXTRA
ZELLULAEREN MATRIX 17
5.0. REGENERATION UND RE-EPITHELIALISIERUNGSVERMOEGEN DES
ALVEOLAREPITHELS IN DER KRANKHAFT VERAENDERTEN LUNGE 18
6.0. INTEGRINE UND FRAGESTELLUNGEN ZU IHRER EXPRESSION
IM ALVEOLAREPITHEL 20
7.0. DAS ALVEOLAREPITHEL UND SEINE BETEILIGUNG BEI DER
IMMUNABWEHR IN DER LUNGENALVEOLE 21
7.1. EPITHELIEN UND DIE MODULATION DER T-LYMPHOZYTAEREN
IMMUNANTWORT 23
7.2. MOEGLICHKEITEN EINER MODULATION DER T-LYMPHOZYTAEREN
IMMUNANTWORT DURCH DAS BRONCHIOLOALVEOLAERE EPITHEL
UND DARAUS RESULTIERENDE FRAGESTELLUNGEN 26
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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8.0. MORPHOLOGISCHE UND FUNKTIONELLE CHARAKTERISTIKA DER
TYP IL-PNEUMOZYTEN UND CLARA-ZELLEN ALS DIFFERENZIERUNGS
MARKER PULMONALER ADENOCARCINOME 29
MATERIAL 31
METHODEN 33
1.0. ISOLIERUNG HUMANER TYP IL-PNEUMOZYTEN 33
1.1. TYP IL-PNEUMOZYTEN PRIMAERKULTUR 35
2.0. FUNKTIONELLE UNTERSUCHUNGSMETHODEN 35
2.1. PRAEPARATION EINES MATRIXSUBSTRATS DURCH EHS-ZELLEN
IN VITRO 35
2.2. PRAEPARATION DER KOLLAGEN-, FIBRONEKTIN- UND LAMININ-SUBSTRATE 35
2.3. ADHAESIONTESTS MIT FRISCH ISOLIERTEN HUMANEN TYP IL-PNEUMOZYTEN 36
2.4. READHAESIONS- UND SPREIZTESTS MIT TYP IL-PNEUMOZYTEN AUS 48
BIS 72 STUNDEN ALTEN PRIMAERKULTUREN 37
2.5. ADHAESIONHEMMTESTS MIT ANTIKOERPERN GEGEN DIE MATRIXSUBSTRATE 38
2.6. ADHAESIONHEMMTESTS MIT ANTIKOERPERN GEGEN INTEGRINE 39
2.7. MIGRATIONTESTS MIT HUMANEN TYP IL-PNEUMOZYTEN 39
3.0. LICHTMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN 41
4.0. IMMUNHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGSMETHODEN 41
4.1. INDIREKTE IMMUNPEROXIDASE METHODE 41
4.2. IMMUNFLUORESZENZ-DOPPEL- UND -EINFACHFAERBUNGEN 42
4.3. MORPHOMETRISCHE AUSWERTUNG DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN
REAKTIONEN 42
5.0. MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGSMETHODEN 43
5.1. RNA-ISOLIERUNG 43
5.2. UEBERPRUEFUNG DER RNA-INTEGRITAET NACH DER ISOLIERUNG 44
5.3. MARKIERUNG DER DNA-OLIGONUKLEOTIDSONDEN MIT
32P 44
5.4. NORTHERN BLOT-ANALYSE 45
5.5. REVERSE TRANSKRIPTION (RT) 46
5.6. POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR) 46
5.7. SOUTHERN BLOT-ANALYSE 48
5.8. KLONIERUNG DER PCR-PRODUKTE IN PLASMIDE 49
5.9. PLASMID-PRAEPARATION 50
5.10. DNA-SEQUENZIERUNG 50
5.11.
IN V/'F/'O-TRANSKRIPTION 51
5.12. RNA-RNA-//? S/FRY-HYBRIDISIERUNG 52
ERGEBNISSE 54
1.0. TYP IL-PNEUMOZYTEN UND IHRE INTERAKTION MIT DER
EXTRAZELLULAEREN MATRIX IN VITRO 54
1.1. ADHAESIONSEIGENSCHAFTEN VON FRISCH ISOLIERTEN TYP IL-PNEUMOZYTEN 54
1.2. ADHAESIONS- UND SPREIZEIGENSCHAFTEN VON TYP IL-PNEUMOZYTEN
AUS 48 BIS 72H ALTEN PRIMAERKULTUREN 55
1.3. ADHAESIONHEMMTESTS 59
1.4. MIGRATION HUMANER TYP IL-PNEUMOZYTEN
IN VITRO 61
2.0. EXPRESSION VON INTEGRINEN IM ALVEOLAREPITHEL UND BEI
PULMONALEN ADENOCARCINOMEN 65
2.1. EXPRESSION VON INTEGRINEN IM EPITHEL DER FETALEN LUNGE 65
2.2. EXPRESSION VON INTEGRINEN IM ALVEOLAREPITHEL DES
NORMALEN ADULTEN LUNGENGEWEBES 66
2.3. EXPRESSION VON INTEGRINEN UND TYP VLL-KOLIAGEN IM
FIBROTISCHEN LUNGENGEWEBE 66
2.4. EXPRESSION VON INTEGRINEN UND TYP VLL-KOLLAGEN IN
PJULMONALEN ADENOCARCINOMEN. 69
3.0. EXPRESSION VON MHC KLASSE IL-ANTIGENEN UND DER CO-STIMULA-
TORISCHEN REZEPTOREN ICAM-1, CD40 UND B7 IM BRONCHIOLO-
ALVEOLAEREN EPITHEL UND IN PULMONALEN ADENOCARCINOMEN 74
3.1. EXPRESSION VON MHC KLASSE IL-ANTIGENEN IM PRAEALVEOLAEREN
EPITHEL DER FETALEN LUNGE UND IM ALVEOLAREPITHEL DER
ADULTEN LUNGE 74
3.2. EXPRESSION VON MHC KLASSE IL-ANTIGENEN IM BRONCHIOLAEREN
EPITHEL DER FETALEN UND ADULTEN LUNGE 77
3.3. EXPRESSION VON ICAM-1, CD 40 UND B7 IM BRONCHIOLOALVEOLAEREN
EPITHEL DER ADULTEN LUNGE 78
3.4. EXPRESSION VON HLA-DR IN PULMONALEN ADENOCARCINOMEN 80
3.5. EXPRESSION DER CO-STIMULATORISCHEN REZEPTOREN ICAM-1 UND
CD40 IN PULMONALEN ADENOCARCINOMEN UND VERGLEICHE ZUR
HLA-DR-EXPRESSION 83
4.0. NACHWEIS VON SP-A UND SURFAKTANT-PROTEIN-MRNAS IN
LUNGENCARCINOMEN UND IHREN METASTASEN 86
4.1. IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS VON SURFAKTANT-PROTEIN A
IN DER ADULTEN LUNGE UND IN PULMONALEN ADENOCARCINOMEN 86
4.2. NACHWEIS DER MRNA VON SURFAKTANT-PROTEINEN UND DES CLARAZELL-
PROTEINS CC16KD IM TUMORFREIEN LUNGENGEWEBE 89
4.3. RT-PCR-UNTERSUCHUNGEN ZUM NACHWEIS DER MRNA VON SURFAKTANT-
PROTEINEN BEI ISOLIERTEN TYP IL-PNEUMOZYTEN UND IN TUMORFREIEM
LYMPHATISCHEM GEWEBE 92
4.4. NACHWEIS DER MRNA VON SURFAKTANT-PROTEINEN IN METASTASEN UND
OKKULTEN MIKROMETASTASEN VON LUNGENCARCINOMEN 95
4.5. NACHWEIS DER MRNA VON SURFAKTANT-PROTEINEN IN METASTASEN EXTRA
PULMONALER CARCINOME 98
DISKUSSION ' 99
1.0. EXPRESSION VON INTEGRINEN IM ALVEOLAREPITHEL UND IHR
EINFLUSS AUF DIE INTERAKTION DER ZELLEN MIT DER
EXTRAZELLULAEREN MATRIX 99
2.0. EXPRESSIONSMUSTER VON MHC KLASSE IL-ANTIGENEN IM
BRONCHIOLOALVEOLAEREN EPITHEL UND IN PULMONALEN
ADENOCARCINOMEN 103
3.0. EXPRESSIONSMUSTER VON ICAM-1 UND CD40 IM BRONCHIOLO
ALVEOLAEREN EPITHEL UND IN PULMONALEN ADENOCARCINOMEN 107
4.0. EXPRESSION VON SURFAKTANT-PROTEINEN IN PULMONALEN
ADENOCARCINOMEN UND IHRE HISTOGENETISCHE DIFFERENZIERUNG 109
5.0. POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) VON SURFAKTANT-PROTEINEN
ZUR IDENTIFIZIERUNG VON METASTASEN PULMONALER ADENOCARCINOME
UND ZUM NACHWEIS OKKULTER MIKROMETASTASEN 111
ZUSAMMENFASSUNG
LITERATUR
115
119 |
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