Rezeptor-unabhängige G-Protein-Aktivierung durch 2-substituierte Histamine und Amiodaron:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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REZEPTOR-UNABHAENGIGE G-PROTEIN-AKTIVIERUNG
DURCH 2-SUBSTITUIERTE HISTAMINE
UND AMIODARON
INAUGURAL-DISSERTATION
VORGELEGT AM
FACHBEREICH PHARMAZIE
DER FREIEN UNIVERSITAET BERLIN
ASTRID HAGELUEKEN
GEB. IN PADERBORN
BERLIN 1995
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 ALLGEMEINE PRINZIPIEN DER SIGNALTRANSDUKTION 1
1.2 HISTAMINREZEPTOREN 1
1.2.1 AGONISTEN UND ANTAGONISTEN 1
1.2.2 SIGNALTRANSDUKTIONSMECHANISMEN 3
1.3 SIGNALTRANSDUKTION IN NEUTROPHILEN GRANULOCYTEN UND HUMANEN
MYELOISCHEN ZELLEN 5
1.3.1 NEUTROPHILE GRANULOCYTEN 5
1.3.2 HL-60-ZELLEN ALS MODELLSYSTEM FUER DIE ANALYSE G-PROTEIN-
VERMITTELTER SIGNALTRANSDUKTION 5
1.3.2.1 HERKUNFT, MORPHOLOGIE UND DIFFERENZIERUNG VON HL-60-ZELLEN 5
1.3.2.2 SIGNALTRANSDUKTIONSVORGAENGE IN HL-60-ZELLEN 6
1.3.3 HEL-ZELLEN 10
1.4 G-PROTEINE , 11
1.4.1 AUFBAU UND FUNKTIONEN VON G-PROTEINEN 11
1.4.2 G-PROTEINAKTIVIERUNGSZYKLUS 11
1.4.3 METHODEN ZUR ERFASSUNG DER G-PROTEIN-AKTIVIERUNG 14
1.4.4 STRUKTURELLE EIGENSCHAFTEN VON G-PROTEINEN 15
1.5 REZEPTOR-VERMITTELTE G-PROTEIN-AKTIVIERUNG: STRUKTURELLE
EIGENSCHAFTEN G-PROTEIN-GEKOPPELTER REZEPTOREN 17
1.6 REZEPTOR-UNABHAENGIGE G-PROTEIN-AKTIVIERUNG DURCH
KATIONISCH-AMPHIPHILE SUBSTANZEN 19
1.7 AMIODARON 24
1.8 BRETYLIUMTOSYLAT 25
2 FRAGESTELLUNGEN 27
3 MATERIALIEN 29
3.1 2-SUBSTITUIERTE HISTAMINE 29
3.2 HERSTELLER- U. LIEFERANTENFIRMEN 29
3.3 BIOCHEMIKALIEN 30
3.4 NUKLEOTIDE 32
IMAGE 3
3.5 ENZYME 32
3.6 RADIOAKTIV MARKIERTE SUBSTANZEN 33
3.7 BIOLOGISCH AKTIVE SUBSTANZEN UND PHARMAKA 33
3.8 MATERIALIEN FUER DIE ZELLKULTUR 34
3.9 MATERIALIEN FUER GELELEKTROPHORESE UND AUTORADIOGRAPHIE 34
3.10 VERSCHIEDENES 35
4 METHODEN 36
4.1 ZELLKULTUR UND VORBEHANDLUNG MIT PERTUSSISTOXIN 36
4.2 BESTIMMUNG DER O; -PRODUKTION IN BT,CAMP-DIFFERENZIERTEN
HL-60-ZELLEN 37
4.3 BESTIMMUNG VON [CA 2+], IN HL-60-ZELLEN UND HEL-ZELLEN 38
4.4 BESTIMMUNG DES CAMP-GEHALTES 40
4.5 ZELLMEMBRANPRAEPARATION 41
4.6 REINIGUNG EINES G/G 0-PROTEINGEMISCHES AUS RINDERHIRNMEMBRANEN 42
4.7 REINIGUNG VON G L2 42
4.8 REINIGUNG VON TRANSDUCIN AUS, RINDERNETZHAUT 42
4.9 PROTEINBESTIMMUNG 43
4.10 REKONSTITUTION VON GEREINIGTEN G-PROTEINEN 44
4.10.1 REKONSTITUTION VON GEREINIGTEN G-PROTEINEN; METHODE I 44
4.10.2 REKONSTITUTION VON GEREINIGTEN G-PROTEINEN; METHODE II 45
4.11 BESTIMMUNG DER HOCHAFFINEN GTPASE-AKTIVITAET 45
4.11.1 BESTIMMUNG DER HOCHAFFINEN GTPASE-AKTIVITAET IN UNVORBEHANDELTEN
ZELLMEMBRANEN - 45
4.11.2 BESTIMMUNG DER HOCHAFFINEN GTPASE-AKTIVITAET IN NEM-VORBEHANDELTEN
HL-60-ZELLMEMBRANEN 46
4.11.3 BESTIMMUNG DER HOCHAFFINEN GTPASE-AKTIVITAET AN GEREINIGTEN
G-PROTEINEN; METHODE I 47
4.11.4 BESTIMMUNG DER HOCHAFFINEN GTPASE-AKTIVITAET AN GEREINIGTEN
G-PROTEINEN; METHODE II 47
4.11.5 BESTIMMUNG DER HOCHAFFINEN GTPASE-AKTIVITAET AN GEREINIGTEM
TRANSDUCIN 47
4.12 BESTIMMUNG DER SPEZIFISCHEN GTP[YS]-BINDUNG 47
4.12.1 BESTIMMUNG DER SPEZIFISCHEN GTP[YS]-BINDUNG AN ZELLMEMBRANEN 47
4.12.2 BESTIMMUNG DER SPEZIFISCHEN GTP[YS]-BINDUNG AN GEREINIGTEN
G-PROTEINEN 48
4.13 PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG VON G;-PROTEIN-A-UNTEREINHEITEN IN
HL-60-ZELLMEMBRANEN 49
IMAGE 4
III
4 14 CLX-KATALYSIERTE ARG-RIPPSYLIERUNG VON
G^-JIJROFEIN-A-TJNTEREINHEITEN IN HL-60-ZELLMEMBRANEN 50
4.15 SDS-PAGE 51
4.16 MESSUNG DER NDPK-AKTIVITAET 51
4.16.1 MESSUNG DER NDPK-AKTIVITAET IN HL-60-ZELLMEMBRANEN 51
4.16.2 MESSUNG DER NDPK-AKTIVITAET IN NDPK AUS RINDERLEBER 52
4.17 PRAEPARATION VON [Y- P]GTP 53
4.18 PRAEPARATION VON [ 32P]AA-GTP 53
4.19 HERSTELLUNG EINER WAESSRIGEN AMIODARON-LOESUNG UND DEREN
GEHALTSBESTIMMUNG 54
4.20 DATENREPRODUZIERBARKEIT 55
5 ERGEBNISSE 56
5.1 G-PROTEIN-AKTIVIERUNG DURCH 2-SUBSTITUIERTE HISTAMINE 56
5.1.1 WIRKUNGEN 2-SUBSTITUIERTER HISTAMINE AUF DIE HOCHAFFINE
GTP-HYDROLYSE IN MEMBRANEN VON BT,CAMP-DIFFERENZIERTEN HL-60-ZELLEN
56
5.1.1.1 STRUKTUR-WIRKUNGSBEZIEHUNGEN - 56
5.1.1.2 EINFLUSS VON H,-UND HJ-REZEPTOR-ANTAGONISTEN 61
5.1.1.3 INTERAKTIONEN MIT MASTOPARAN 61
5.1.1.4 BEEINFLUSSUNG DER NDPK-AKTIVITAET 61
5.1.2 BEEINFLUSSUNG VON [CA^], IN BT 2CAMP-DIFFERENZIERTEN HL-60-ZELLEN
65
5.1.3 ZELLTYP-SPEZIFITAET DER G-PROTEIN-AKTIVIERUNG DURCH 2-SUBSTITUIERTE
HISTAMINE 67
5.1.3.1 HL-60-ZELLEN IN VERSCHIEDENEN DIFFERENZIERUNGSZUSTAENDEN 67
5.1.3.2 HEL-ZELLEN IM VERGLEICH ZU BT,CAMP-DIFFERENZIERTEN
HL-60-ZELLEN 69
5.1.3.3 WEITERE PTX-SENSITIVE G-PROTEINE ENTHALTENDE ZELLTYPEN 69
5.1.4 WIRKUNGEN DER SUBSTANZEN AUF DIE HOCHAFFINE GTP-HYDROLYSE AN
GEREINIGTEN G-PROTEIN-PRAEPARATIONEN 73
5.2 WIRKUNGEN VON AMIODARON UND BRETYLIUMTOSYLAT AUF G-PROTEINE 75
5.2.1 WIRKUNGEN VON AMIODARON UND BRETYLIUMTOSYLAT AUF G-PROTEINE UND
NDPK IN MEMBRANEN VON HL-60-ZELLEN 75
5.2.1.1 HOCHAFFINE GTP-HYDROLYSE 75
5.2.1.2 SPEZIFISCHE GTP[YS]-BINDUNG 78
5.2.1.3 PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG VON GJ-PROTEIN-CE-UNTEREINHEITEN 78
5.2.1.4 CTX-KATALYSIERTE ADP-RIBOSYLIERANG VON
G-PROTEIN-OT-UNTEREINHEITEN 78
IMAGE 5
IV
5.2.1.5 NDPK-AKTIVITAET 83
5.2.2 WIRKUNGEN VON AMIODARON IN INTAKTEN HL-60-ZELLEN 83
5.2.2.1 BEEINFLUSSUNG VON [CA 2*], 83
5.2.2.2 BEEINFLUSSUNG DER O, -PRODUKTION 83
5.2.2.3 BEEINFLUSSUNG DES CAMP-GEHALTES 87
5.2.3 WIRKUNGEN VON AMIODARON UND BRETYLIUMTOSYLAT AUF GEREINIGTE
G-PROTEINE 88
5.2.3.1 HOCHAFFINE GTP-HYDROLYSE AN G/G 0-PROTEINEN UND GL2 88
5.2.3.2 SPEZIFISCHE GTP[YS]-BINDUNG AN G/G O-PROTEINEN UND GI2 88
5.2.3.3 HOCHAFFINE GTP-HYDROLYSE AN GEREINIGTEM TRANSDUCIN 88
6 DISKUSSION 93
6.1 G-PROTEIN-AKTIVIERUNG DURCH 2-SUBSTITUIERTE HISTAMINE 93
6.1.1 UEBERGANG VON H,-REZEPTOR-AGONISMUS ZU EINER
H,-REZEPTOR-UNABHAENGIGEN BEEINFLUSSUNG VON G-PROTEINEN 93
6.1.2 H,-REZEPTOR-UNABHAENGIGE STIMULATION VON G-PROTEINEN DURCH IN
2-POSITION LIPOPHIL SUBSTITUIERTE HISTAMINE 94
6.1.3 IN 2-POSITION LIPOPHIL SUBSTITUIERTE HISTAMINE ALS
REZEPTOR-UNABHAENGIGE G-PROTEIN-AKTIVATOREN 94
6.1.4 HISTAMIN ALS REZEPTOR-UNABHAENGIGER G-PROTEIN-AKTIVATOR IN
BT,CAMP-DIFFERENZIERTEN HL-60-ZELLEN 95
6.1.5 2-SUBSTITUIERTE HISTAMINE ALS DIREKTE G;-PROTEIN-AKTIVATOREN 96
6.1.6 DIFFERENTIELLE G-PROTEIN-AKTIVIERUNG IN INTAKTEN
BTJCAMP-DIFFERENZIERTEN HL-60-ZELLEN UND DEREN MEMBRANEN 96
6.1.7 DIFFERENTIELLE G-PROTEIN-AKTIVIERUNG IN GEREINIGTEN G-PROTEIN-
PRAEPARATIONEN UND MEMBRANEN BT 2CAMP-DIFFERENZIERTER HL-60-ZELLEN 98
6.1.8 ZELLTYPSPEZIFITAET DER G-PROTEIN-AKTIVIERUNG 2-SUBSTITUIERTER
HISTAMINE 99
6.1.9 WESENTLICHE ASPEKTE FUER DIE G-PROTEIN-AKTIVIERUNG DURCH
2-SUBSTITUIERTE HISTAMINE 100
6.2 G-PROTEIN-AKTIVIERUNG DURCH AMIODARON 100
6.2.1 AMIODARON ALS G-PROTEIN-AKTIVATOR IN HL-60-ZELLEN 100
6.2.2 AMIODARON ALS DIREKTER G-PROTEIN-AKTIVATOR 101
6.2.3 MECHANISMUS DER G-PROTEIN-AKTIVIERUNG DURCH AMIODARON 102
6.2.4 AMIODARON ALS AKTIVATOR VERSCHIEDENER TYPEN VON G-PROTEINEN 103
6.2.5 VERGLEICH VON AMIODARON MIT BRETYLIUMTOSYLAT 104
6.2.6 PHARMAKOLOGISCHE BEDEUTUNG UND WESENTLICHE ASPEKTE 104
6.3 DIFFERENTIELLE REZEPTOR-UNABHAENGIGE G-PROTEIN-AKTIVIERUNG 105
IMAGE 6
7 ZUSAMMENFASSUNG IOS
7.1 HINTERGRUND UND FRAGESTELLUNGEN 108
7.2 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 108
7.2.1 2-SUBSTITUIERTE HISTAMINE 108
7.2.2 AMIODARON 109
7.3 SCHLUSSFOLGERUNGEN 110
8 LITERATURVERZEICHNIS IN
DANKSAGUNG 124
LEBENSLAUF 125
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