Untersuchungen zur Interleukin-4-abhängigen Aktivierung des humanen CD23b-Promotors:
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1994 [erschienen] 1995
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INHALT
1.
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2.
EINLEITUNG
.
3
2.1.
INTER
LEUKIN-4
.
3
2.1.1.
INTERLEUKIN-4-PRODUZIERENDE
ZELLEN
UND
FUNKTIONEN
VON
INTERLEUKIN-4
.
3
2.1.2.
AUFBAU
VON
INTERLEUKIN-4
.
7
2.1.3.
DER
INTERLEUKIN-4-REZEPTOR
UND
SEINE
SIGNALTRANSDUKTION
.
8
2.2.
AKTIVIERUNG
VON
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DURCH
DIE
INTERFERONE
.
10
2.3.
DAS
CD23-MOLEKUEL
.
15
2.3.1.
AUFBAU
DES
CD23-MOLEKUELS
.
15
2.3.2.
EXPRESSION
VON
CD23
.
18
2.3.3.
FUNKTIONEN
VON
CD23
.
19
2.4.
AUFGABENSTELLUNG
.
21
3.
MATERIAL
.
22
3.1.
GERAETE
.
22
3.2.
VERBRAUCHSMATERIAL
.
23
3.3.
CHEMIKALIEN
.
23
3.4.
ENZYME
.
25
3.5.
ZELLINIEN
UND
MATERIAL
FUER
DIE
ZELLKULTUR
.
25
3.6.
BAKTERIEN
UND
MATERIAL
FUER
DIE
BAKTERIENKULTUR
.
27
3.7.
NUKLEINSAEUREN
.
27
3.7.1.
PLASMIDVEKTOREN
.
27
3.7.2.
OLIGONUKLEOTIDE
.
28
3.7.3.
SONSTIGE
NUKLEINSAEUREN
.
32
4.
METHODEN
.
33
4.1.
METHODEN
DER
ZELLISOLATION
.
33
4.1.1.
ISOLATION
VON
PERIPHEREN
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
AUS
BLUT
.
33
4.1.2.
KUPPLUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
AN
RINDERERYTHROZYTEN
.
33
4.1.3.
GEWINNUNG
VON
SUBPOPULATIONEN
AUS
PBMNC
.
33
4.2.
METHODEN
DER
RNS-BEARBEITUNG
.
35
4.2.1.
ISOLATION
VON
RNS
AUS
ZELLEN
.
35
4.2.2.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
36
4.2.3.
NORTHERN-BLOT
.
37
4.2.4.
HYBRIDISIERUNG
DER
RNS
MIT
OLIGONUKLEOTIDEN
.
38
4.3.
METHODEN
DER
DNS-BEARBEITUNG
.
40
4.3.1.
ISOLATION
VON
DNS
AUS
ZELLEN
.
40
4.3.2.
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
41
4.3.3.
DNS-FRAGMENTISOLIERUNG
AUS
AGAROSEGELEN
.
41
4.3.4.
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
42
4.3.5.
DNS-FRAGMENTISOLIERUNG
AUS
ACRYLAMIDGELEN
.
43
4.3.6.
VERDAU
VON
DNS
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
43
4.3.7.
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNS-ENDEN
.
44
4.3.8.
LIGATION
VON
DNS-FRAGMENTEN
.
44
4.4.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
45
4.5.
EINFUEHRUNG
VON
GERICHTETEN
PUNKTMUTATIONEN
MIT
HILFE
DER
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
48
4.6.
DNS-SEQUENZIERUNG
.
50
4.7.
TRANSFORMATION
IN
E.
COLI
.
51
4.7.1.
HERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTER
E.
COLI
.
51
4.7.2.
TRANSFORMATION
VON
KOMPETENTEN
E.
COLI
.
51
4.8.
PLASMIDPRAEPARATION
.
52
4.8.1.
PRAEPARATION
KLEINER
MENGEN
.
52
4.8.2.
PRAEPARATION
GROSSER
MENGEN
.
52
4.9.
LUCIF
ERASE-REPORTERGENTEST
.
53
4.9.1.
DNS-TRANSFEKTION
.
53
4.9.2.
ZELLAUFSCHLUSS
.
54
4.9.3.
MESSUNG
DER
LUCIFERASE-AKTIVITAET
.
54
4.9.4.
AUSWERTUNG
.
55
4.10.
GELRETARDIERUNG
.
55
4.10.1.
ISOLATION
VON
KERN
UND
CYTOPLASMAPROTEINEN
.
56
4.10.2.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
DNS-FRAGMENTE
.
57
4.10.3.
BINDUNGSREAKTION
UND
NACHWEIS
.
57
5.
ERGEBNISSE
.
60
5.1.
IDENTIFIZIERUNG
EINES
REGULATIONSELEMENTES
IM
CD23B-PROMOTOR,
WELCHES
DIE
INTERLEUKIN-4-ABHAENGIGE
TRANSKRIPTION
VON
CD23B
UEBERMITTELT
(=
IL-4RE)
.
60
5.1.1.
EXPRESSION
VON
CD23B-MRNS
IN
WI-L2
UND
U937
NACH
INTERLEUKIN-4-STIMULATION
.
60
5.1.2.
CD2
3B-PROMOTORAKTIVITAET
NACH
INTERLEUKIN-4-STIMULATION
.
65
5.1.3.
EINENGUNG
DES
DIE
INTERLEUKIN-4-STIMULATION
VERMITTELNDEN
PROMOTORBEREICHS
.
70
5.2.
CHARAKTERISIERUNG
DES
REGULATIONSELEMENTS
.
79
5.2.1.
UNTERSUCHUNG
DER
SEQUENZSPEZIFISCHEN
PROTEINBINDUNG
.
79
5.2.2.
HOMOLOGE
BINDEMOTIVE
IN
ANDEREN
PROMOTOREN
.
83
5.2.3.
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DES
IL-4RES
.
87
5.3.
DER
NUKLEAR!AKTOR-IL4
(NF-IL4)
.
89
5.3.1.
INDUKTION
VON
NF-IL4
IN
PBMNC-SUBPOPULATIONEN
.
90
5.3.2.
HINWEISE
AUF
DIE
AKTIVIERUNG
VON
NF-IL4
.
94
5.3.3.
AKTIVIERUNG
VON
NF-IL4
DURCH
INTERLEUKIN
13
.
104
6.
DISKUSSION
.
107
6.1.
IDENTIFIZIERUNG
EINES
IL-4RES
IM
HUMANEN
CD23B-PROMOTOR
.
107
6.2.
CHARAKTERISIERUNG
DES
IL-4RES
.
110
6.3.
HINWEISE
AUF
NF-IL4
.
114
6.3.1.
MITWIRKUNG
VON
NF-IL4
AM
KLASSENWECHSEL
ZU
IGE.114
6.3.2.
ANTAGONISTISCHE
GENREGULATION
DURCH
IL-4
UND
IFN-YLL5
6.3.3.
HINWEISE
AUF
DIE
SIGNALTRANSDUKTION
DURCH
IL-4.
117
6.3.4.
INTERLEUKIN
13
AKTIVIERT
NF-IL4
.
121
7.
LITERATUR
.
123
ABKUERZUNGEN
UND
FORMELN
.
139
DANKSAGUNG
.
142
LEBENSLAUF
143 |
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