Charakterisierung osteogener Zellen und deren Beeinflussung durch singuläre Radiatio in vitro:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
ALLGEMEINE
EINLEITUNG
1
1.2.
KNOCHENPRODUZIERENDE
ZELLEN
3
1.2.1.
EXISTENZ
VERSCHIEDENER
ZELLDIFFERENZIERUNGSSTUFEN
VON
OSTEOBLASTEN
3
1.2.2.
EXISTENZ
VERSCHIEDENER
OSTEOBLASTENTYPEN
3
1.2
3.
HERKUNFT
DER
OSTEOBLASTEN
UND
IHRER
PROGENITORZELLEN
4
1.2.4.
OSTEOPROGENITORZELLEN
5
1.3.
KNOCHENZELLKULTUREN
7
1.4.
GENEXPRIMIERUNG
UND
IDENTIFIZIERUNG
VON
OSTEOBLASTEN
8
1.5.
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
(AP)
9
1.5.1.
EIGENSCHAFTEN
UND
VORKOMMEN
9
1.5.2.
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
ALS
MEMBRANASSOZIIERTES
EKTOENZYM
11
1.5.3.
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
UND
OSTEOGENESE
11
1.5.4.
EXPRIMIERUNG
DER
ALKALISCHEN
PHOSPHATASE
IM
DIFFERENZIERUNGSPROZESS
OSTEOINDUKTIVER
ZELLEN
13
1.6.
ZELLKULTUREN
DES
STROMALEN
KNOCHENMARKSYSTEMS
14
1.7.
OSTEOCALCIN
15
1.7.1.
EIGENSCHAFTEN
UND
VORKOMMEN
15
1.7.2.
SERUMKONZENTRATIONSAENDERUNGEN
VON
OSTEOCALCIN
15
1.8.
OSTEOGENESE
16
1.8.1.
OSTEOGENESE
IN
VITRO
16
1.8.2.
MINERALISATION
IN
VITRO
17
1.9.
FRAGESTELLUNG
19
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
20
2.1.
MATERIAL
20
2.1.1.
HUMANES
BIOPSIEMATERIAL
20
2.1.2.
GERAETE
21
2.1.3. CHEMIKALIEN,
MEDIKAMENTE
UND
MEDIEN
22
METHODEN
23
2.2.
2.2.1.
ANLEGEN
VON
PRIMAERKULTUREN
HUMANER
ZELLEN
AUS
VERSCHIEDENEN
B
INDESGE
WEBSFORMEN
23
2.2.1.1.
ANLEGEN
HUMANER
KNOCHENZELLKULTUREN
AUS
FEMURSCHAFTSPONGIOSA
23
2.2.I.2.
ANLEGEN
HUMANER
KNOCHENZELLKULTUREN
AUS
PERIARTIKULAEREN
OSSIFIKATIONEN
24
2.2.I.3.
ANLEGEN
HUMANER
KNOCHENZELLKULTUREN
AUS
DEM
PERIOSTEUM
DES
SCHENKELHALSES
VOM
FEMUR
25
2.2.1.4.
ANLEGEN
HUMANER
FIBROBLASTENKULTUREN
AUS
DEM
MUSCULUS
GLUTAEUS
MEDIUS
25
2.2.I.5.
ANLEGEN
HUMANER
ZELLKULTUREN
AUS
DEM
STROMALEN
KNOCHENMARK
DES
FEMURS
26
2.2.2.
MEDIUM
27
2.2.2.1.
KONDITIONIEREN
DES
MEDIUMS
29
2.2.2.2.
MEDIUMWECHSEL
29
2.2.3.
SUBKULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
30
2.2.4.
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
31
2.2.4.1.
EINFRIEREN
31
2.2.4.2.
AUFTAUEN
32
2.2.5.
ERMITTLUNG
DER
ZELLVERMEHRUNG
IN
ABHAENGIGKEIT
UNTERSCHIEDLICH
AUSGESAETER
ZELLZAHLEN
32
2.2.6.
TESTUNG
DER
KOLONIEBILDUNGSEFFIZIENZ
IN
VITRO
KULTIVIERTER
ZELLEN
33
2.2.6.1.
AUSSAAT
UND
KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN
ZUR
TESTUNG
DER
KOLONIEBILDUNGSEFFIZENZ
33
2.2.6.2.
COOMASIE-BRILLANT
BLAU-FAERBUNG
35
2.2.6.3.
GIEMSAFAERBUNG
35
2.2.7.
NACHWEISMETHODEN
DER
ALKALISCHEN
PHOSPHATASE
36
2.2.7.1.
HISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
36
2.2.7.2.
PHOTOMETRISCHE
MESSUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
AP
37
2.2.7.3.
BERECHNUNG
DER
SPEZIFISCHEN
AKTIVITAET
37
2.2.8.
T
ETRAZYKLINFAERBUNG
38
2.2.9.
OSTEOCALCIN
38
2.2.9.1.
ANSATZ
FUER
DEN
OSTEOCALCINNACHWEIS
38
2.2.9.2.
OSTEOCALCIN-RADIO-IMMUNO-ASSAY
39
2.2.10.
MINERALISATION
IN
VITRO
41
2.2.10.1.
KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN
FUER
DIE
IN
VITRO
MINERALISATION
41
2.2.10.2.
VON
KOSSA
FAERBUNG
ZUM
NACHWEIS
MINERALISIERTER
ZELLAREALE
41
2.2.11.
ZYTOTOXIZITAETSTEST
(MTT)
42
2.2.11.1.
MESSUNG
DER
EXTINKTION
43
2.2.12.
RADIATIO
44
2.2.12.1.
ANSATZ
FUER
DIE
RADIATIO
44
2.2.12.2.
BESTRAHLUNG
DER
ZELLKULTUREN
45
2.2.12.3.
ERMITTLUNG
DER
UEBERLEBENSRATE
NACH
RADIATIO
46
2.2.13.
MITOMYCINC
46
2.2.14.
STATISTISCHE
METHODEN
47
3.
ERGEBNISSE
48
3.1.
ZELLMORPHOLOGIE
UND
SUPRAZELLULAERE
STRUKTURBILDUNG
IN
VITRO
48
3.1.1.
HUMANE
ORTHOTOPE
OSTEOBLASTEN
IN
VITRO
49
3.1.2.
PERIOSTEUM
OSTEOBLASTEN
IN
VITRO
(POB)
50
3.1.3.
HETEROTOPE
OSTEOBLASTEN
IN
VITRO
(HOB)
50
3.1.4.
MORPHOLOGIE
VON
IN
VITRO
KULTIVIERTEN
STROMALEN
KNOCHEMARKZELLEN
52
3.2.
MIGRATION
UND
KONFLUENZ
VON
OSTEOBLASTEN
IN
DER
PRIMAERKULTUR
53
3.3.
PROLIFERATIONSVERHALTEN
IN
VITRO
KULTIVIERTER
HUMANER
ZELLEN
MESENCHYMALEN
URSPRUNGS
54
3.3.1.
PROLIFERATIONSVERHALTEN
VON
HUMANEN
ORTHOTOPEN
OSTEOBLASTEN
(OB)
IN
VITRO
55
3.3.2.
PROLIFERATIONSVERHALTEN
VON
HUMANEN
HETEROTOPEN
OSTEOBLASTEN
(HOB)
IN
VITRO
56
3.3.3.
PROLIFERATIONSVERHALTEN
VON
HUMANEN
FIBROBLASTEN
IN
VITRO
57
3.3.4.
PROLIFERATIONSVERHALTEN
HUMANER
STROMALER
KNOCHENMARKZELLEN
IN
VITRO58
3.4.
KOLONIEBILDUNGSEFFIZIENZ
VON
OSTEOBLASTEN
IN
VITRO
60
3.5.
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
61
3.5.1.
PHOTOMETRISCHE
AKTIVITAETSBESTIMMUNG
61
3.5.2.
HISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
62
3.5.3.
HITZEINHIBITIONSTEST
ZUR
BESTIMMUNG
DER
NICHT-GEWEBSSPEZIFISCHEN
ALKALISCHEN
PHOSPHATASEN
(TNSALP)
BEI
HETEROTOPEN
OSTEOBLASTEN
64
3.5.4.
INDUKTION
DER
ALKALISCHEN
PHOSPHATASE
STROMALER
KNOCHENMARKZELLEN
DURCH
1,25
DIHYDROXYVITAMIN
DA
65
3.6.
TETRAZYKLINFAERBUNG
HETEROTOPER
OSTEOBLASTEN
66
3.7.
OSTEOCALCINAKTIVITAET
HETERO-UND
ORTHOTOPER
OSTEOBLASTEN
IN
VITRO
66
3.8.
KOLLAGEN
UND
KNOCHENSIALOPROTEIN
BESTIMMUNG
67
3.9.
MINERALISATION
HETEROTOPER
OSTEOBLASTEN
IN
VITRO
68
3.10.
RADIATIO
69
3.10.1.
KOLONIEBILDUNGSEFFIZIENZ
NACH
RADIATIO
69
3.10.1.1.
KOLONIEBILDUNGSEFFIZIENZ
ORTHOTOPER
OSTEOBLASTEN
NACH
RADIATIO
70
3.10.1.2.
KOLONIEBILDUNGSEFFIZIENZ
HETEROTOPER
OSTEOBLASTEN
NACH
RADIATIO
71
3.10.1.3.
KOLONIEBILDUNGSEFFIZIENZ
STROMALER
KNOCHENMARKZELLEN
NACH
RADIATIO
73
3.10.2.
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT
NACH
RADIATIO
75
3.10.2.1.
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT
NACH
RADIATIO
ORTHOTOPER
OSTEOBLASTEN
75
3.10.2.2.
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT
NACH
RADIATIO
HETEROTOPER
OSTEOBLASTEN
76
3.10.2.3.
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT
NACH
RADIATIO
HUMANER
STROMALER
KNOCHENMARKZELLEN
77
3.10.2.4.
ZELLZAEHLUNG
NACH
RADIATIO,
BEI
ERREICHEN
DES
EXTINKTIONSPLATEAUS
77
3.10.3.
AKTIVITAET
DER
ALKALISCHEN
PHOSPHATASE
HETEROTOPER
OSTEOBLASTEN
NACH
RADIATIO
77
3.10.4. INDUKTION
DER
AP
KONFLUENT
BESTRAHLTER
HUMANER
KNOCHENMARKZELLEN
79
3.10.5.
OSTEOCALCINAKTIVITAET
ORTHOTOPER
OSTEOBLASTEN
NACH
RADIATIO
80
3.10.5.1.
OSTEOCALCINAKTIVITAET
ORTHOTOPER
OSTEOBLASTEN
NACH
BEHANDLUNG
MIT
MITOMYCINC
81
3.10.6.
IN
VITRO
MINERALISATION
NACH
BESTRAHLUNG
HETEROTOPER
OSTEOBLASTEN
82
4.
DISKUSSION
UND
SCHLUSSFOLGERUNGEN
83
4.1.
EINFUEHRENDE
BEMERKUNGEN
ZU
IN
VITRO
VERSUCHEN
83
4.2.
MIGRATION
UND
KONFLUENZ
IN
DER
PRIMAERKULTUR
84
4.3.
ZELLMORPHOLOGIE
IN
DER
PRIMAERKULTUR
85
4.4.
SUPRAZELLULAERE
STRUKTURBILDUNG
IN
VITRO
85
4.5.
PROLIFERATIONSVERHALTEN
OSTEOGENER
ZELLEN
86
4.6. KOLONIEBILDUNGSEFFIZIENZ
OSTEOGENER
ZELLEN
88
4.7.
EXPRIMIERUNG
DIFFERENZIERUNGSSPEZIFISCHER
PROTEINE
90
4.7.1.
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
90
4.7.2.
KOLLAGENTYPISIERUNG
UND
KNOCHENSIALOPROTEIN
91
4.7.3.
OSTEOCALCIN
91
4.8.
IN
VITRO
MINERALISATION
HETEROTOPER
OSTEOBLASTEN
92
4.9.
RADIATIO
94
4.9.1.
TESTUNG
DER
KOLONIEBILDUNGSEFFIZIENZ
NACH
RADIATIO
94
4.9.2.
ZYTOTOXIZITAETSTEST
MIT
MTT
NACH
RADIATIO
95
4.9.3.
EFFEKTE
DER
RADIATIO
AUF
DAS
DIFFERENZIERUNGS
VERHALTEN
OSTEOGENER
ZELLEN
97
4.9.3.1.
ZELLBIOLOGISCHE
AUSWIRKUNGEN
DER
RADIATIO
97
4.9.3.2.
ALKALISCHE
PHOSPHATASE-AKTIVITAET
NACH
RADIATIO
98
4.9.3.3.
OSTEOCALCINAKTIVITAET
NACH
RADIATIO
99
4.9.4.
IN
VITRO
MINERALISATION
NACH
RADIATIO
100
5.
ZUSAMMENFASSUNG
102
6.
LITERATURVERZEICHNIS
106 |
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