Untersuchungen zum Einfluss kationischer Mediatoren auf die Ablagerung anionischer Makromoleküle an der glomerulären Basalmembran: ein Beitrag zur Pathogenese der Lupus-Nephritis
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I
EINLEITUNG
.
1
1.1.
ULTRASTRUKTUR
DES
GLOMERULUS
.
1
1.2.
INMUNPATHOGENESE
DER
GLOMERULONEPHRITIDEN
.
2
1.3.
DER
EINFLUSS
VON
POLYKATIONEN
AUF
DIE
GLANERULAERE
ABLAGERUNG
VON
ANIONISCHEN
MAKROMOLEKUELEN
.
5
1.4.
PROBLEMSTELLUNG
.
6
1.5.
ZIEL
DER
VORGELEGTEN
ARBEIT
.
7
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
8
II.
1.
POLYKATIONEN
.
8
II.
2.
POLYANIONEN
.
8
II.
3.
PROTEINTRODIFIKATIONEN
.
9
II.
3.1.
ANIONISIERUNGEN
.
9
II.
3.2.
KAT
IONISIERUNGEN
.
10
II.
4.
PRAEPARATION
VON
INJEKTIONSFERTIGEM
HISTON
F3
UND
FL
.
11
II.
4.1.
PRAEPARATION
VON
HISTONFRAKTIONEN
AUS
KALBSTHYNUS
.
11
II.
4.2.
PRAEPARATION
VON
HISTONLOESUNGEN
.
13
II.
5.
EINSTELLUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.15
II.
6.
,25
J-MARKIERUNG
VON
PROTEINEN
.
16
II.
7.
PRAEPARATION
DER
RADIOAKTIVEN
PROBAI
.
17
II.
7.1.
HISTONE
.
17
II.
7.2.
RESTLICHE
PROTEINE
.
17
II.
8.
LYSIMODIFIKATICN
DER
SUCCINYLIERTEN
PROTEINE
.
18
II.
9.
ELEKTROPHORESEN
.
19
II.
9.1
SDS-POLYACRYLASNIDELEKTROPHORESE
(DISKONTINUIERLICH)
.
19
II
9.2.
POLYACRYLAMIDELEKTROPHORESE
FUER
ANIONISCHE
PROTEINE
.
20
II.
9.3.
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
IM
POLYACRYLAMIDGEL
.
20
II.
9.4.
ELEKTROPHORESE-ANALYSE
12
'
J-MARKIERTER
PROTEINE
.
21
II.
10.
ISOELEKTRISCHE
TITRATION
.
22
II.
11.
ENZYMATISCHE
AKTIVITAET
DER
HRP
UND
SHRP
.
22
II
.
11.1.
DIAMINOBENZIDIN-ASSAY
.
22
II.
11.2.
ENZYM-ASSAY
.
23
11.12.
GELFI
1
TRAT
ION
.
23
II.
12.1.
TECHNIK
DER
GELFILTRATION
.
23
II.
12.2.
GELFILTRATION
**J
MARKIERTER
PROTEINE
.
25
11.13.
HERSTELLUNG
VON
ANTISEREN
.
25
II.
13.1.
ANTI-HSA
SERUM
.
25
II.
13.2.
ANTI-HISTCN
SERUM
.
25
11.14.
AGARGELDOPPELDIFFUSION
NACH
OUCHTERLONY
.
26
11.15.
LICHTMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
NIERE
.
26
II.
15.1.
INDIREKTE
IIRMMFLUORESZENZ
.
26
II.
15.2.
AUTORADIOGRAPHIE
.
28
11.16.
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
NIERE
.
28
II
.
16.1.
STANDARDTECHNIK
.
28
II.
16.2.
DARSTELLUNG
VON
PEROXIDASE
IN
NIERENGEWEBE
.
28
II.
16.3.
AUTORADIOGRAPHIE
.
29
III.
TIERVERSUCHE
.
30
III.
1.
VERSUCHSTIERE
.
30
III.
2.
INJEKTIONSNETHODEN
.
30
III
.2.1.
ANFORDERUNGEN
.
30
III
.
2.2.
AUSSCHLUSSKRITERIEN
.
31
III.
2.3.
TECHNIK
DER
INTRAAORTALEN
INJEKTION
.
32
IN.
2.4.
TECHNIK
DER
INTRAVENOESEN
INJEKTION
.
34
III.
3.
AUFARBEITUNG
DER
NIEREN
.
35
III.
4.
BERECHNUNG
DER
GLANERULAER
ABGELAGERTEN
PROTEIRMENGE
.
36
III.
5.
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
37
IV.
ERGEBNISSE
.
39
IV.
1.
EIGENSCHAFTEN
DER
VERWENDETEN
PROTEINE
.
39
IV.
1.1.
DNA-GEHALT
DER
EINZELNEN
HISTONFRAKTIONSLOESUNGEI
.
39
IV.
1.2.
MEDIFIKATIONSGRAD
DER
ANIONISIERTEN
PROTEINE
.
39
IV.
1.3.
ELEKTROPHORETISCHES
VERHALTEN
.
40
IV.
1.3.1.
PASS-ELEKTROPHORESE
.
40
IV.
1.3.2.
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.41
IV.
1.3.3.
ISOELEKTRISCHE
PUNKTE
DER
VERSCHIEDENEN
PROTEINE
.
43
IV.
1.4.
BESTINNUNG
DER
PEROXIDASEAKTIVITAET
.
44
IV.
1.4.1.
DIATNINOBENZIDIN-ASSAY
.
44
IV.1.4.2.
ENZYM-ASSAY
.
44
IV.
1.5.
VERAENDERUNG
DER
ESR
DER
MEDITIERTEN
PROTEINE
.
45
IV.1.5.1.
ANIONISCHE
PROTEINE
.
.
45
IV.
1.5.2.
KATIONISCHE
PROTEINE
.
46
IV.
1.6.
ANTIKOERPER-REAKTIVITAET
DER
MODIFIZIERTEN
PROTEINE
.
46
IV.
1.7.
INDIREKTE
INTNUNFLUORESZENZ.
46
IV.
2.
TIERVERSUCHE:
PROTOKOLLE
UND
ERGEBNISSE
.
48
IV.
2.1.
BSA-NBSA
.
48
IV.2.2.
HSA/SHSA
-
REIHE
.
49
IV.2.3.
POLYKATION
-
SHSA#2
.
57
IV.2.4.
HISTONE
-
SHRR/FERRITIN
(01)
.
61
IV.2.5.
HISTON
FL/F3
-
SHSA#2
WECHSELWIRKUNG
.
63
IV.2.6.
HISTON
FL/F3
IV-VERSUCHE
.66
IV.2.7.
POLYANION
-
HISTON
WECHSELWIRKUNG
.
69
V.
DISKUSSION
.
73
VI.
ZUSAMENFASSUNG
.
89
VII
.
ANHANG
.
90
VII.
1.
AUFLISTUNG
TIERVERSUCHE
.
90
VII.
2.
EINZELERGEBNISSE
TIERVERSUCHE
.
91
VIII.
LITERATURVERZEICHNIS
.
94
IX.
DANKSAGUNG
.
107
X.
LEBENSLAUF
.
108 |
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