Untersuchung der Eignung von Eigelbimmunglobulinen (IgY) für die Diagnostik des Fischpathogens Aeromonas salmonicida ssp. salmonicida:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
7
2.
LITERATURUEBERSICHT
10
2.1.
HISTORIE
DER
WISSENSCHAFTLICHEN
WAHRNEHMUNG
UND
AUSEINANDERSETZUNG
MIT
DEM
PATHOGEN
10
2.2.
SYSTEMATISCHE
EINORDNUNG
VON
AEROMONAS
SALMONICIDA
11
2.3.
MORPHOLOGIE
UND
WACHSTUMSEIGENSCHAFTEN
12
2.4.
INFEKTION
DER
FISCHE
MIT
AEROMONAS
SALMONICIDA
13
2.4.1.
ERKRANKUNGEN
VON
SALMONIDEN
13
2.4.1.1.
FORMEN
DER
AEROMONAS
SALMONICIDA
-
INFEKTION
BEI
SALMONIDEN
14
2.4.1.2.
HISTOPATHOLOGIE
DER
FURUNKULOSE
BEI
SALMONIDEN
16
2.4.1.3.
PATHOGENITAETSMECHANISMEN
VON
AEROMONAS
SALMONICIDA
17
2.4.2.
ERKRANKUNGEN
VON
NICHT-SALMONIDEN
18
2.5.
DIAGNOSTIK
DER
FURUNKULOSE
22
2.5.1.
EVALUIERUNG
DER
BESTEHENDEN
METHODEN
22
2.5.2.
HERKUNFT
DER
ANTIKOERPER
26
2.6.
GEWINNUNG
POLYKLONALER
ANTIKOERPER
AUS
DEM
EIGELB
IMMUNISIERTER
HUEHNER
29
2.6.1.
ISOLIERUNG
DER
IMMUNGLOBULINE
AUS
DEM
EIGELB
-
UEBERSICHT
DER
METHODEN
30
2.7.
INSTITUTSINTERNE
GEWINNUNG
VON
AEROMONAS
SALMONICIDA
-ANTISERUM
AUS
KANINCHEN
32
3.
RIGENE
UNTERSUCHUNGEN
33
3.1.
MATERIAL
UND
METHODEN
33
3.1.1.
HERSTELLUNG
DIAGNOSTISCHER
ANTIKOERPER
IM
HUHN
33
3.1.1.1.
MATERIAL
33
2
3.1.1.2.
METHODIK
34
3.1.1.2.1.
IMMUNISIERUNG
DER
HUEHNER
UND
EIGEWINNUNG
34
3.1.2.
SEROLOGISCHE
VERFAHREN
ZUR
PRUEFUNG
VON
ANTIKOERPERTITERN
37
3.1.2.1.
MATERIAL
38
3.1.2.2.
METHODIK
38
3.1.2.2.1.
WAHL
DER
GEBRAUCHSVERDUENNUNGEN
39
3.1.2.2.2.
QUANTITATIVE
ERMITTLUNG
DES
ANTIKOERPERTITERS
IM
EIGELB
39
3.1.2.2.3.
QUANTITATIVE
ERMITTLUNG
DES
ANTIKOERPERTITERS
IM
EIKLAR
41
3.1.3.
PRAEPARATION
UND
ISOLIERUNG
DER
IRRANUNGLOBULINE
AUS
DEM
EIGELB
41
3.1.3.1.
QUANTITATIVE
ERMITTLUNG
DES
ANTIKOERPERTITERS
DER
EIGELBIMMUNGLOBULINE
44
3.1.3.2.
ABSCHAETZUNG
DES
VERLUSTES
AN
SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
IN
FOLGE
DES
ISOLIERUNGSPROZESSES
44
3.1.4.
EINSATZ
DER
EIGELBIMMUNGLOBULINE
IN
DER
AEROMONAS
SALMONICIDA
-DIAGNOSTIK
-
VERGLEICH
MIT
KANINCHENANTIKOERPERN
46
3.1.4.1.
DER
ELISA
46
3.1.4.1.1.
FORMEN
DES
ELISA
46
3.1.4.1.1.1.
DAS
PRINZIP
DES
INDIREKTEN,
NICHT-KOMPETITIVEN
ELISA
47
3.1.4.1.1.1.1.
BESTIMMUNG
DER
GEBRAUCHSVERDUENNUNGEN
48
3.1.4.1.1.1.2.
EXTINKTIONSKINETIK
UND
ABSCHAETZUNG
DER
NACHWEISGRENZE
49
3.1.4.1.1.1.3.
UNTERSUCHUNG
DER
KREUZREAKTIVITAET
50
3.1.4.2.
DAS
IMMUNOBLOTVERFAHREN
51
3.1.4.2.1.
DAS
PRINZIP
DES
INDIREKTEN
IIMNUNOBLOTVERFAHRENS
52
3.1.4.2.2.
ABLAUF
DES
VERFAHRENS
53
3.1.4.2.2.1.
TITRATION
DER
REAGENTEN
54
3
3.1.4.2.2.2.
ERMITTLUNG
DER
NACHWEISGRENZE
55
3.1.4.2.2.3.
UNTERSUCHUNG
DER
KREUZREAKTIVITAET
55
3.1.4.3.
DIE
IMMUNFLUORESZENZ
56
3.1.4.3.1.
DAS
PRINZIP
DER
INDIREKTEN
IMMUNFLUORESZENZ
57
3.1.4.3.2.
ABLAUF
DES
VERFAHRENS
58
3.1.4.3.2.1.
TITRATION
DER
REAGENTEN
60
3.1.4.3.2.2.
ERMITTLUNG
DER
NACHWEISGRENZE
60
3.1.4.3.2.3.
UNTERSUCHUNG
DER
KREUZREAKTIVITAET
61
3.1.5.
PUFFER
UND
REAGENZIEN
62
3.1.6.
AUSRUESTUNGEN
67
3.2.
ERGEBNISSE
69
3.2.1.
GEWINNUNG
DIAGNOSTISCHER
ANTIKOERPER
69
3.2.1.1.
QUANTITATIVE
ERMITTLUNG
DES
ANTIKOERPERTITERS
IM
EIGELB
69
3.2.1.2.
QUANTITATIVE
ERMITTLUNG
DES
ANTIKOERPERTITERS
IM
EIKLAR
73
3.2.1.3.
QUANTITATIVE
ERMITTLUNG
DES
ANTIKOERPERTITERS
DER
ISOLIERTEN
EIGELBIMMUNGLOBULINE
73
3.2.1.4.
ABSCHAETZUNG
DES
ANTIKOERPERVERLUSTES
IN
FOLGE
DES
ISOLIERUNGSPROZESSES
73
3.2.2.
EIGNUNG
DER
EIGELBIMMUNGLOBULINE
FUER
DEN
ELISA
75
3.2.2.1.
GEBRAUCHSVERDUENNUNGEN
UND
NACHWEISGRENZE
IM
ELISA
75
3.2.2.2.
DIE
KREUZREAKTIVITAET
IM
ELISA
77
3.2.3.
EIGNUNG
DER
EIGELBIMMUNGLOBULINE
FUER
DAS
IMMUNOBLOTVERFAHREN
78
3.2.3.1.
DIE
GEBRAUCHSVERDUENNUNGEN
IM
IMMUNOBLOT
VERFAHREN
78
3.2.3.2.
DIE
NACHWEISGRENZE
IM
IMMUNOBLOTVERFAHREN
80
3.2.3.3.
DIE
KREUZREAKTIVITAET
IM
IROMUNOBLOTVERFAHREN
81
3.2.4.
EIGNUNG
DER
EIGELBIMMUNGLOBULINE
FUER
DIE
IMMUNFLUORES
ZENZ
82
4.
DISKUSSION
83
5.
ZUSANNENASSUNG
90
6.
SUSNARY
91
7.
LITERATURVERZEICHNIS
92 |
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