Klonierung von Matrixmetalloproteinasen und deren Expressionsmuster in der Maus: AP-1 (Fos/Jun)-abhängige Expression von Kollagenase I im Knochen
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| Language: | German |
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FZKA
1995
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INHALTSVERZEICHNIS
I
ABKUERZUNGEN
IV
1.
EINLEITUNG
1
1.1
FUNKTION
UND
ZUSAMMENSETZUNG
DER
EXTRAZELLULAEREN
MATRIX
(ECM)
1
1.2
MATRIXMETALLOPROTEINASEN:
ECM
ABBAUENDE
PROTEASEN
2
1.3
STRUKTUR
UND
SUBSTRATSPEZIFITAET
VON
METALLOPROTEINASEN
3
1.4
REGULATION
DER
SYNTHESE
UND
AKTIVITAET
DER
METALLOPROTEINASEN
6
1.5
KONTROLLE
VON
MMPS
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
BEI
EMBRYONALEN
PROZESSEN
9
1.6
DIE
TRANSGENE
FOS-MAUS:
EIN
SYTEM
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
REGULATION
DER
MMP
EXPRESSION
"IN
VIVO"
11
1.7
ZIELSETZUNG
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
11
2.
MATERIALIEN
13
2.1
BEZUGSQUELLEN
13
2.2
RADIOCHEMIKALIEN
15
2.3
BAKTERIEN
UND
EUKARYONTISCHE
ZELLINIEN
15
2.4
MAUSSTAEMME
15
2.5
KULTURMEDIEN
16
2.6
PLASMIDE
17
2.7
VERWENDETE
PRIMER
17
3.
METHODEN
18
3.1 BEHANDLUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
18
3.1.1
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
18
3.1.2
PHENOL/CHLOROFORM-EXTRAKTION
18
3.1.3
PRAEZIPITATION
VON
NUKLEINSAEUREN
AUS
WAESSRIGEN
LOESUNGEN
18
3.2
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
18
3.2.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN
18
3.2.2
TRANSFORMATION
VON
KOMPETENTEN
ZELLEN
19
3.2.3
HERSTELLUNG
VON
SELEKTIV-AGARPLATTEN
19
3.3
DNA
PRAEPARATION
19
3.3.1
MINI-PLASMID
DNA
PRAEPARATION
19
3.3.2
PLASMID
DNA
PRAEPARATION
20
3.4
KLONIERUNGSTECHNIKEN
20
3.4.1
FRAGMENTIERUNG
VON
DNA-MOLEKUELEN
DURCH
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
20
3.4.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
21
3.4.3
PHOSPHORYLIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
UND
LINKEM
21
3.4.4
AUFFUELLEN
VON
5
'-UEBERHAENGEN
21
3.4.5
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
21
3.4.6
CDNA-SYNTHESE
(ERSTSTRANGSYNTHESE)
22
3.4.7
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
22
3.4.8
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
22
3.5
DNA-GELELEKTROPHORESE
23
3.5.1
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
23
3.5.2
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
23
3.5.3
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
23
3.5.4
DENATURIERENDE
POLYACRYLAMID-HAMSTOFF-GELE
24
3.6
ZELLKULTUR
25
3.6.1
TRYPSINIEREN
VON
ZELLEN
25
3.6.2
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
25
3.6.3
BEHANDLUNG
VON
ZELLEN
MIT
INDUKTOREN
25
3.7
POLY
A
+
-RNA-PRAEPARATION
25
3.8
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
UND
RNA
26
3.8.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
26
3.8.2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
RNA
DURCH
"IN
VITRO"
TRANSKRIPTION
26
3.9
RNA-TRANSFER
AUF
EINE
NYLONMEMBRAN
(
"
NORTHERN
BLOT")
UND
HYBRIDISIERUNG
27
3.9.1
RNA-TRANSFER
AUF
EINE
NYLONMEMBRAN
27
3.9.2
HYBRIDISIERUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA-FRAGMENTE
AN
DIE
FILTERGEBUNDENE
RNA
28
3.10
"IN
SITU"
HYBRIDISIERUNG
28
3.10.1
BEHANDLUNG
VON
OBJEKTTRAEGERN,
DECKGLAESERN,
GLASKAESTEN
UND
GLASFAERBEGESTELLEN
28
3.10.2
FIXIERUNG,
EINBETTUNG
VON
GEWEBEN
UND
ANFERTIGUNG
VON
SCHNITTEN
29
3.10.3
VORHYBRIDISIERUNG
DER
SCHNITTE
29
3.10.4
HYBRIDISIERUNG
DER
SCHNITTE
30
3.10.5
WASCHEN
DER
SCHNITTE
30
3.10.6
BESCHICHTEN
DER
OBJEKTTRAEGER
MIT
EINER
PHOTOEMULSION
31
3.10.7
ENTWICKELN,
FAERBEN
UND
MIKROSKOPIEREN
DER
SCHNITTE
31
N
4.
ERGEBNISSE
33
4.1
KLONIERUNG
MAUSSPEZIFISCHER
MMP
CDNAS
UND
IHRE
HOMOLOGIE
ZU
DEN
ENTSPRECHENDEN
SEQUENZEN
IN
MENSCH
UND
RATTE
33
4.2
TRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DER
MAUS-MMPS
IN
ZELLKULTUR
38
4.2.1
INDUKTION
DER
MMP-EXPRESSION
DURCH
TPA
UND
CAMP
38
4.2.2
INDUKTION
DER
MMP-EXPRESSION
DURCH
UV-BESTRAHLUNG
40
4.3
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
DER
MAUS
METALLOPROTEINASEN
41
4.3.1
EXPRESSION
DER
MMPS
WAEHREND
DER
EMBRYONALENTWICKLUNG
DER
MAUS
41
4.3.2
EXPRESSION
DER
MMPS
IN
GEWEBEN
DES
ADULTEN
ORGANISMUS
55
4.4
EXPRESSION
DER
KOLLAGENASE
I
IN
GEWEBEN
VON
C-FOS
TRANSGENEN
MAEUSEN
60
4.4.1
INDUZIERTE
EXPRESSION
VON
KOLLAGENASE
I
IN
MAEUSEN
MIT
INDUZIERTER
C-FOS
EXPRESSION
60
4.4.2
KOLLAGENASE
I
EXPRESSION
IN
KONSTITUTIV
C-FOS
EXPRIMIERENDEN
TRANSGENEN
MAEUSEN
62
4.5
EXPRESSION
DER
KOLLAGENASE
I
IN
GEWEBEN
VON
C-/OJ-NEGATIVEN
MAEUSEN
64
4.5.1
EXPRESSION
DER
KOLLAGENASE
I
IN
EMBRYONEN
VON
C-/OS-NEGATIVEN
MAEUSEN
64
4.5.2
KOLLAGENASE
I
EXPRESSION
ZUM
ZEITPUNKT
DES
AUFTRETEN
PHAENOTYPISCHER
VERAENDERUNGEN
(2
WOCHEN
ALTE
TIERE)
67
5.
DISKUSSION
71
5.1
DIE
MATRIX-ABBAUENDEN
ENZYME
DER
MAUS
LASSEN
SICH
IN
DIE
FAMILIE
DER
METALLO
PROTEINASEN
EINORDNEN
72
5.2
FOS/JUN
ALS
DIE
LIMITIERENDEN
KONTROLLFAKTOREN
DER
MMPS
IN
KULTURZELLEN
74
5.3
DIE
EXPRESSION
DER
MMPS
WAEHREND
DER
EMBRYOGENESE
IST
GEWEBESPEZIFISCH
UND
NICHT
UEBERLAPPEND
76
5.4
UNTERSCHIEDE
IN
DER
MMP
EXPRESSION
IM
EMBRYO
UND
IM
ADULTEN
ORGANISMUS
81
5.5
EXPRESSION
VON
KOLLAGENASE
I
IN
C-FOS
TRANSGENEN
UND
C-FOS
"NULL"
MAEUSEN:
IST
KOLLAGENASE
I
EIN
MARKERGEN
FUER
CFOS
ABHAENGIGE
PATHOLOGISCHE
VERAENDERUNGEN
IM
KNOCHENMETABOLISMUS
83
6.
LITERATURVERZEICHNIS
88
M |
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