Neurotrophin-3: genomische Organisation und Regulation der Genexpression
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| Format: | Book |
| Language: | German |
| Published: |
1994
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis |
| Item Description: | München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 1995 |
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INHALTSVERZEICHNIS
PUBLIKATIONSLISTE
III
DANKSAGUNG
V
INHALTSVERZEICHNIS
IX
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
DIE
FAMILIE
DER
NEUROTROPHINE
1
1.2.
DIE
STRUKTUR
DER
NEUROTROPHINE
2
1.3.
DIE
NEUROTROPHINE
UND
DER
NATUERLICHE
NEURONALE
ZELLTOD
2
1.3.1.
THEORIE
UEBER
DIE
MECHANISMEN
DER
NEUROTROPHIN
WIRKUNG
2
1.3.2.
DIE
FUNKTION
DER
NEUROTROPHINE:
UNTERSUCHUNGEN
IN
VITRO
4
1.3.3.
DIE
FUNKTION
DER
NEUROTROPHINE:
UNTERSUCHUNGEN
IN
VIVO
6
1.3.4.
DIE
FUNKTION
VON
NT-3
7
1.3.5.
PROGRAMMIERTER
ZELLTOD
UND
APOPTOSE
10
1.4.
DIE
NEUROTROPHIN-REZEPTOREN
12
1.5.
DIE
REGULATION
DER
NEUROTROPHIN-GENEXPRESSION
15
1.6.
ZIEL
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
19
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
20
2.1.
MATERIAL
20
2.1.1.
OLIGODESOXYNUKLEOTIDE
20
2.1.2.
MATERIALIEN
UND
CHEMIKALIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
21
2.1.3.
ZELLINIEN
UND
TIERE
.
.
21
2.1.4.
FEINCHEMIKALIEN,
MEDIEN,
MATERIALIEN
UND
GERAETE
21
2.1.5.
RADIOCHEMIKALIEN
23
2.1.6.
ENZYME,
NUKLEINSAEUREN
UND
KITS
23
2.1.7.
VEKTOREN,
GENBANKEN
UND
BAKTERIENSTAEMME
23
2.2.
LOESUNGEN,
MEDIEN
UND
PUFFER
24
2.2.1.
ZELLKULTUR-MEDIEN
24
2.2.2.
MEDIEN
FUER
MIKROBIOLOGISCHE
ARBEITEN
.
.
25
2.2.3.
LOESUNGEN
UND
PUFFER
26
2.3.
METHODEN
31
2.3.1.
REINIGUNG
VON
OLIGODESOXYNUKLEOTIDEN
31
2.3.2.
PHENOL/CHLOROFORM-EXTRAKTION
UND
ALKOHOLISCHE
FAELLUNG
31
2.3.3.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
31
2.3.4.
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
31
2.3.5.
ABSPALTEN
VON
3
'-UEBERHAENGENDEN
ENDEN
.
31
2.3.6.
AUFFUELLEN
VON
5
'-UEBERHAENGENDEN
ENDEN
31
2.3.7.
LIGATION
VON
VEKTOR
UND
FREMD-DNA
32
2.3.8.
TRANSFORMATION
32
2.3.8.1.
PRAEPARATION
TRANSFORMATIONS-KOMPETENTER
ZELLEN
FUER
DIE
ELEKTROPORATION
32
2.3.8.2.
ELEKTROPORATION
32
2.3.9.
SELEKTION
32
2.3.10.
KOLONIEHYBRIDISIERUNG
33
2.3.11.
PLASMIDPRAEPARATION
33
2.3.11.1.
MINIPRAEPARATION
33
2.3.11.2.
MAXIPRAEPARATION
33
2.3.11.2.1.
REINIGUNG
UEBER
ANIONEN
AUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
33
2.3.11.2.2.
REINIGUNG
UEBEREINEN
CAESIUMCHLORID-DICHTEGRADIENTEN
34
2.3.12.
RNA-EXTRAKTION
34
2.3.12.1.
EXTRAKTION
DER
GESAMT-RNA
34
2.3.12.2.
PRAEPARATION
VON
POLYA+-RNA
34
2.3.13.
GELELEKTROPHORESE
34
2.3.13.1.
AGAROSEGELE
FUER
DIE
AUFTRENNUNG
VON
DNA
35
2.3.13.2.
AGAROESGELE
FUER
DIE
AUFTRENNUNG
VON
RNA
35
2.3.13.3.
DENATURIERENDE
POLYACRYLAMIDGELE
35
2.3.14.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
35
2.3.15.
SOUTHERN-TRANSFER
35
2.3.16.
NOTHERN-TRANSFER
36
2.3.17.
SYNTHESE
RADIOAKTIV
MARKIERTER
NUKLEINSAEURESONDEN
36
2.3.17.1.
ENDMARKIERUNG
VON
OLIGODESOXYNUKLEOTIDEN
36
2.3.17.2.
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
CRNA
SONDEN
36
2.3.17.3.
RADIOAKTIV
MARKIERTE
DNA-SONDEN
37
2.3.18.
SCREENEN
EINER
LAMBDA-PHAGENBANK
37
2.3.18.1.
AUSPLATTIEREN
DER
PHAGENBANK
37
2.3.18.2.
PLAQUE-HYBRIDISIERUNG
37
2.3.18.3.
PRAEPARATION
DER
PHAGEN-DNA
37
2.3.19.
RACE
(RAPID
AMPLIFICATION
OF
CDNA
ENDS)
38
2.3.19.1.
5'-RACE
38
2.3.19.2.
3
-RACE
39
2.3.20.
PCR
ZUR
AMPLIFIZIERUNG
GROSSER
DNA-FRAGMENTE
.
.
39
2.3.21.
QUANTIFIZIERUNG
NASZIERENDER
MRNA-MOLEKUELE
("RUN
ON"-TRANSKRIPTIONSANALYSE)
39
2.3.22.
RNASE-PROTEKTIONSANALYSE
40
2.3.23.
ZELLKULTUR-METHODEN
.41
2.3.23.1.
ENTFERNUNG
DER
THYROID
UND
STEROIDHORMONE
AUS
DEM
SERUM
41
2.3.23.2.
PRAEPARATION
CEREBELLARER
KOEMERZELLEN
41
2.3.23.3.
PRAEPARATION
HIPPOCAMPALER
NEURONEN
42
2.3.23.4.
ANLEGEN
EINER
ASTROZYTENKULTUR
42
2.3.23.5.
SEKUNDAERE
ZELLKULTUREN
42
2.3.23.6.
TRANSFEKTION
EUKARYONTISCHER
ZELLEN
43
2.3.23.7.
TRANSFEKTION
PRIMAERER
NEURONEN
DURCH
LIPOFEKTION
43
2.3.23.8.
TRANSFEKTION
MIT
DER
KALZIUMPHOSPHAT
METHODE
43
2.3.23.9.
ELEKTROPORATION
43
2.3.23.10.
CAT-TEST
43
2.3.23.11.
QUANTIFIZIERUNG
DES
PROTEINGEHALTS
VON
ZELLEXTRAKTEN
44
2.3.23.12.
SS-GALAKTOSIDASE-TEST
MIT
CPRG
45
2.3.23.13.
RADIOIMMUNOASSAY
FUER
DEN
NACHWEIS
VON
HGH
45
3.
ERGEBNISSE
46
3.1.
DIE
TRANSKRIPTE
UND
DIE
EXON-INTRON-STRUKTUR
DES
NT-3
GENS
46
3.1.1.
DIE
KLONIERUNG
DER
5
'
-TERMINALEN
ABSCHNITTE
DER
NT-3-
CDNAS
46
3.1.2.
DIE
VERSCHIEDENEN
TRANSKRIPTE
DES
NT-3-GENS
48
3.1.2.1.
OFFENE
LESERAHMEN
FUER
VERSCHIEDENE
NT-3
VORLAEUFER-PROTEINE
48
3.1.3.
DIE
GENOMISCHE
ORGANISATION
DES
NT-3-GENS
50
3.1.4.
MENGENVERHAELTNIS
VON
TRANSKRIPT
A
ZU
TRANSKRIPT
A'
53
3.1.5.
DIE
POLYADENYLIERUNGSSTELLEN
DES
NT-3-GENS
53
3.1.6.
KARTIERUNG
DER
TRANSKRIPTIONSINITIATIONSSTELLEN
DES
NT-3
GENS
54
3.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
NT-3-GENEXPRESSION
56
3.2.1.
HERSTELLUNG
TRANSKRIPT-SPEZIFISCHER
SONDEN
UND
MENGENSTANDARDS
57
3.2.2.
DIE
EXPRESSION
VON
NT-3
IN
VERSCHIEDENEN
PERIPHEREN
GEWEBEN
58
3.2.3.
DIE
NT-3-GENEXPRESSION
IN
PRIMAEREN
ASTROZYTEN
IN
VITRO
58
3.2.4.
DIE
EXPRESSION
DES
NT-3-GENS
IN
CEREBELLAREN
KOERNERZELLEN
59
3.2.4.1.
DIE
WIRKUNG
VON
TRIJODTHYRONIN
AUF
DIE
NT-3
GENEXPRESSION
60
3.2.4.2.
DIE
HALBWERTSZEIT
DER
NT-3-MRNA
61
3.2.4.3.
WIRKUNG
VON
T3
AUF
DIE
TRANSKRIPTIONSFREQUENZ
DES
NT-3-GENS
62
3.2.4.4.
DIE
WIRKUNG
VON
BDNF
AUF
DIE
NT-3-
GENEXPRESSION
63
3.2.5.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
EXPRESSION
UND
REGULATION
DES
NT-3-GENS
IN
VERSCHIEDENEN
ZELLINIEN
65
3.3.
DIE
PROMOTORREGION
DES
NT-3-GENS
67
3.3.1.
DIE
NT-3-PROMOTOR-CAT-KONSTRUKTE
72
3.3.2.
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
KLONIERTEN
NT-3
PROMOTORSEQUENZEN
74
3.3.2.1.
TRANSFEKTION
PRIMAERER
CEREBELLARER
KOERNERZELLEN
DER
MAUS
75
3.3.2.2.
AKTIVITAET
DER
NT-3-PROMOTOREN
IN
CEREBELLAREN
KOERNERZELLEN
78
3.3.2.3.
AKTIVITAET
DER
NT-3-PROMOTOREN
IN
PRIMAEREN
ASTROZYTEN
UND
IN
PRIMAEREN
HIPPOCAMPALEN
NEURONEN
80
3.3.2.4.
AKTIVITAET
DER
NT-3-PROMOTOREN
IN
IMR
NEUROBLASTOMZELLEN
81
3.3.2.5.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
REGULATION
DER
NT-3-
PROMOTORAKTIVITAET
DURCH
TRIJODTHYRONIN
82
3.3.2.6.
VERSCHIEDENE
WEITERE
FAKTOREN
87
3.3.2.7.
EINFLUSS
VON
STEROIDHORMONEN
AUF
DIE
NT-3-
PROMOTORAKTIVITAET
89
3.3.3.
DIE
PROMOTORREGION
DES
HUMANEN
NT-3-GENS
93
3.3.3.1.
KLONIERUNG
UND
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNG
DER
HUMANEN
NT-3-PROMOTORREGION
94
3.3.4.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BDNF-VERMITTELTEN
TRANSAKTIVIERUNG
DER
NT-3-PROMOTOREN
96
3.3.4.1.
DER
EINFLUSS
VON
BDNF
AUF
DIE
EXPRESSION
DES
SOMATOTROPINREPORTERGENS
IM
HGH-PLASMID
100
4.
DISKUSSION
102
4.1.
DIE
EXON/INTRON-STRUKTUR
DES
NT-3
GENS
IM
VERGLEICH
ZUR
STRUKTUR
ANDERER
NEUROTROPHINGENE
102
4.2.
DIE
TRANSKRIPTE
DES
NT-3-GENS
105
4.2.1.
ANMERKUNGEN
UEBER
DIE
RACE-EXPERIMENTE
105
4.2.2.
DIE
TRANSKRIPTIONSINITIATIONSSTELLEN
(RNASE
PROTEKTIONSANALYSE)
107
4.2.3.
DIE
NT-3-MRNAS
UND
IHRE
POTENTIELLEN
TRANSLATIONSPRODUKTE
109
4.3.
REGULATION
DER
NT-3-GENEXPRESSION
DURCH
T3
114
4.3.1.
BEDEUTUNG
DER
T3-INDUZIERTEN
NT-3-GENEXPRESSION
FUER
DIE
ENTWICKLUNG
DES
CEREBELLUMS
114
4.3.2.
DER
DIFFERENTIELLE
EINFLUSS
VON
T3
AUF
DIE
KONZENTRATION
DER
NT-3-MRNAS
115
4.3.3.
DIE
ZELLSPEZIFITAET
DER
T3-INDUKTION
116
4.3.4.
T3
UEBT
EINEN
DIREKTEN
EINFLUSS
AUF
DIE
TRANSKRIPTION
DES
NT-3-GENSAUS
118
4.4.
DIE
REGULATION
DER
NT-3-GENEXPRESSION
DURCH
BDNF
120
4.5.
DIE
PROMOTOREN
DES
NT-3-GENS
123
4.5.1.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BDNF-ABHAENGIGEN
TRANSAKTIVIERUNG
DER
NT-3-PROMOTOREN
124
4.5.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
VERMEINTLICHEN
T3-ABHAENGIGEN
TRANSAKTIVIERUNG
DER
NT-3-PROMOTOREN
128
4.5.2.1.
GRUNDLAGEN
ZUR
T3-ABHAENGIGEN
REGULATION
DER
GENEXPRESSION
128
4.5.2.2.
POTENTIELLE
TRES
(T3
RESPONSIVE
ELEMENTS)
DER
NT-3-PROMOTOREN
130
4.5.2.3.
FUNKTIONELLE
ANALYSEN
ZUR
T3-ABHAENGIGEN
INDUKTION
DER
NT-3-PROMOTOREN
131
4.5.2.4.
UNTERSUCHUNG
DER
HUMANEN
NT-3-PROMOTOREN
137
5.
ZUSAMMENFASSUNG
139
6.
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
UND
DER
ENGLISCHEN
FACHAUSDRUECKE
140
7.
LITERATUR
143
8.
LEBENSLAUF
165 |
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