Untersuchungen zur Herstellung chimärisierter Antikörper: homologe Rekombination am Immunglobulin-Schwere-Ketten-Lokus von Hybridomzellen und Expression in Myelomzellen unter dem Aspekt transkriptioneller Aktivierung
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
V
1
EINLEITUNG
1
1.1
HOMOLOGE
REKOMBINATION
.
1
1.2
'
GENE
TARGETING
'
ALS
GEZIELTE
HOMOLOGE
REKOMBINATION
.
2
1.3
CHIMAERE
ANTIKOERPER
UND
IHRE
BEDEUTUNG
.
4
1.4
ZIEL
DER
ARBEIT
.
6
2
MATERIAL
UND
METHODEN
S
2.1
MATERIAL
.
8
2.1.1
BEZUGSQUELLEN
.
8
2.1.2
BAKTERIENSTAEMME
.
8
2.1.3
PLASMIDE
.
8
2.1.4
ZELLINIEN
.
8
2.1.5
MEDIEN
.
8
2.1.6
PUFFER
.
9
2.1.7
OLIGONUKLEOTIDE
.
9
2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
9
2.2.1
PLASMIDTRANSFORMATION
.
9
2.2.2
ANALYTISCHE
PLASMIDISOLIERUNG
.
9
2.2.3
PRAEPARATIVE
PLASMIDISOLIERUNG
.
10
2.2.4
DNA-VERDAU
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
.
10
2.2.5
DNA-FAELLUNG
MIT
ISOPROPANOL
.
10
2.2.6
GELELEKTROPHORESE
.
10
2.2.7
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
11
2.2.8
REAKTION
MIT
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
.
11
2.2.9
KLENOW-FRAGMENT-REAKTION
.
'
.
11
2.2.10
T4-DNA-POLYMERSE-REAKTION
.
11
2.2.11
T4-POLYNUKLEOTIDKINASE-REAKTION
.
12
2.2.12
LIGATION
.
12
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.13
DNA-AMPLIFIKATION
.
12
2.2.14
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
MYELOMZELLEN
.
12
2.2.15
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
RNA
.
12
2.2.16
'
NORTHERNBLOT
'
-HYBRIDISIERUNG
.
13
2.2.17
FLUORESZENZ
'
IN
SITU
'
-HYBRIDISIERUNG
(FISH)
.
13
2.3
KONSTRUKTION
DER
VEKTOREN
.
13
2.3.1
PSVGPT-HU71-A5
.
13
2.3.2
PSVNEO-HU^L-AS
.
13
2.3.3
PSVGPT-HU71-A6
.
14
2.3.4
PSVGPT-HU71-A5-S5
'
.
14
2.3.5
PSVGPT-HU71-A5-S3
'
.
14
2.3.6
PSV232AGPT-HU71-X5
.
14
2.3.7
P
SV232ANEO-HU71-X5
.
15
2.3.8
E/12+3'E
.
15
2.3.9
E/R6+2SP
.
15
2.3.10
EP2
-
E/R
.
16
2.3.11
E/X6
-
EFI
.
16
2.4
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
16
2.4.1
ANTIKOERPERREINIGUNG
DURCH
PROTEIN
G
.
16
2.4.2
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
16
2.4.3
'
WESTERNBLOT
'
.
17
2.4.4
QUALITATIVER
NACHWEIS
VON
ANTIKOERPER
DURCH
EL(SA
.
17
2.4.5
QUANTITATIVER
NACHWEIS
VON
ANTIKOERPER
DURCH
ELISA
.
18
2.4.6
INHIBITIONS-ELISA
.
18
2.5
ZELLKULTUR
.
18
2.5.1
ANZUCHTBEDINGUNGEN
.
18
2.5.2
PLASMIDTRANSFEKTION
.
18
2.5.3
REKLONIERUNG
.
19
2.5.4
ANZUCHT
FUER
QUANTITATIVEN
ELISA
.
19
2.5.5
KRYOKONSERVIERUNG
.
19
INHALTSVERZEICHNIS
III
3
ERGEBNISSE
21
3.1
'
GENE
TARGETING
'
IN
DER
ZELLINIE
MMTL
.
21
3.1.1
DAS
REKOMBINATIONSSYSTEM
.
21
3.1.2
SCHEMATISCHE
DARSTELLUNG
DER
VEKTOREN
.
23
3.1.3
VERSUCHE
ZUR
ERHOEHUNG
DER
REKOMBINATIONSFREQUENZ
.
25
3.1.3.1
LAENGE
DER
HOMOLOGEN
FLANKE
.
25
3.1.3.2
IONISIERENDE
STRAHLUNG
.
26
3.1.3.3
KEINE
FREQUENZSTEIGERUNG
DURCH
LPS
.
27
3.1.3.4
ANREICHERUNG
HOMOLOGER
EREIGNISSE
DURCH
EINEN
ENHAN
CER
-
LOSEN
VEKTOR
.
28
3.1.4
DAS
PHAENOMEN
DER
DOPPELPRODUZENTEN
.
30
3.1.4.1
GENOMISCHE
SITUATION
.
30
3.1.4.2
'
RETRANSFEKTION
'
.
30
3.1.5
DIE
EXPRESSIONSEINHEIT
:
GPT
'
VERSUS
'
NEO
.
32
3.1.6
CHARAKTERISIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
KLONE
.
33
3.1.6.1
VERLUST
DES
HUMANEN
ISOTYPS
.
33
3.1.H.2
DELETION
DER
C
H
I
-
DOMAENE
.
35
3.1.6.3
FRUEHZEITIGE
CHARAKTERISIERUNG
REKOMBINANTER
KLONE
DURCH
EIN
NEUES
DETEKTIONSSYSTEM
.
36
3.1.7
STEIGERUNG
DER
REKOMBINATIONSFREQUENZ
DURCH
ERHOEHTE
STABILITAET
RE
KOMBINANTER
KLONE
.
37
3.1.7.1
PRAEFERENTIELLE
EXZISION
VON
DUPLIZIERT
VORLIEGENDER
INTRON
SEQUENZ
.
37
3.1.7.2
3
'
-LINEARISIERUNG
VON
PSVGPT-HU71-A6
.
41
3.1.8
'
GENE
TARGETING
'
MIT
NICHT-LINEARISIERTEN
VEKTOREN
.
43
3.1.9
PRODUKTIONSRATEN
DER
HYBRIDOME
NACH
HOMOLOGER
REKOMBINATION
44
3.1.10
DARSTELLUNG
ALLER
ERGEBNISSE
NACH
'
GENE
TARGETING
'
IN
DER
HYBRIDOM
-
ZELLINIE
MMTL
.
46
3.2
VERSUCHE
ZUR
STEIGERUNG
DER
ANTIKOERPER-EXPRESSIONSRATE
IN
DER
MYELOM-
ZELLINIE
NS1
.
48
3.2.1
EXPRESSION
REKOMBINANTER
ANTIKOERPER
IN
NICHT-PRODUZIERENDEN
ZEL
LINIEN
.
48
INHALTSVERZEICHNIS
IV
3.2.2
UNTERSUCHUNGEN
ZU
MOEGLICHEN
WECHSELWIRKUNGEN
ZWISCHEN
IGH-3
'
-
UND
IGP-INTRON
-
ENHANCER
.
49
4
DISKUSSION
53
4.1
DIE
WAHL
DES
EXPRESSIONSVEKTORS
.
53
4.2
ERHOEHUNG
DER
REKOMBINATIONSFREQUENZ
DURCH
IONISIERENDE
STRAHLUNG
UND
SYSTEMATISCHE
VERLAENGERUNG
DER
HOMOLOGEN
FLANKE
.
54
4.3
STEIGERUNG
DER
REKOMBINATIONSFREQUENZ
DURCH
ERHOEHTE
STABILITAET
REKOM
BINANTER
KLONE
.
56
4.4
'
GENE
TARGETING
'
MIT
NICHT-LINEARISIERTEN
VEKTOREN
.
59
4.5
ELIMINIERUNG
DES
PERSISTIERENDEN
PARENTALEN
ISOTYPS
DURCH
'
RETRANSFEKTION
'
61
4.6
CHARAKTERISIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
KLONE
.
61
4.7
UNTERSUCHUNGEN
ZU
MOEGLICHEN
WECHSELWIRKUNGEN
ZWISCHEN
IGH-3
'
-
UND
IG/R
INTRON-ENHANCER
.
63
5
ZUSAMMENFASSUNG
~
64
6
LITERATURVERZEICHNIS
68
7
DANKSAGUNG
79 |
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| spelling | Kardinal, Christian Verfasser aut Untersuchungen zur Herstellung chimärisierter Antikörper homologe Rekombination am Immunglobulin-Schwere-Ketten-Lokus von Hybridomzellen und Expression in Myelomzellen unter dem Aspekt transkriptioneller Aktivierung vorgelegt von Christian Kardinal 1995 V, 79 S. graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 1995 Rekombination (DE-588)4049338-6 gnd rswk-swf Hybride (DE-588)4026279-0 gnd rswk-swf Immunglobulintherapie (DE-588)4161377-6 gnd rswk-swf Genetik (DE-588)4071711-2 gnd rswk-swf Immunglobuline (DE-588)4026626-6 gnd rswk-swf Antikörper (DE-588)4002290-0 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Antikörper (DE-588)4002290-0 s Immunglobulintherapie (DE-588)4161377-6 s DE-604 Immunglobuline (DE-588)4026626-6 s Hybride (DE-588)4026279-0 s Rekombination (DE-588)4049338-6 s Genetik (DE-588)4071711-2 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=006923388&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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